2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 柑 橘 中 挥 发 性 物 质 测 定 气 相 色 谱 - 质 谱 联 用 法 3 1 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 C C S B 4 8 6 3 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f v o l a t i l e c o m p o u n d s i n c i t r u s u s i n g — G a s c h r o m a t o g r a p h y - m a s s s p e c t r o m e t r y Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４８６３—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出. 本文件由农业农村部农产品加工标准化技术委员会归口. 本文件起草单位:华中农业大学、广东省农业科学院果树研究所. 本文件主要起草人:徐娟、陈嘉景、刘园、张红艳、蒋友武、曾继吾. ⅠNY/T４８６３—２０２５ 柑橘中挥发性物质测定　气相色谱质谱联用法 １　范围 本文件描述了柑橘中挥发性物质的气相色谱质谱联用测定方法. 本文件适用于柑橘中αＧ蒎烯、香桧烯、βＧ月桂烯、dＧ柠檬烯、γＧ松油烯、(－)芳樟醇、橙花醛、乙酸芳樟 酯、香叶醛及瓦伦烯共１０种挥发性物质的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 根据溶剂之间的相似相溶原理,利用有机溶剂萃取挥发性物质. 气相色谱质谱联用法(GCＧMS)测定根据物质的质谱信息(MS)和保留指数(RI)进行定性分析,结合 外标法与内标法进行定量. ５　试剂和材料 本文件所使用试剂未特别注明要求时,均为符合国家标准的分析纯试剂,所使用的水均为符合国家 GB/T６６８２规定的一级水. ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　壬酸甲酯(C１０H２０O２,CAS号:１７３１Ｇ８４Ｇ６,纯度＞９９％). ５􀆰１􀆰２　甲基叔丁基醚(MTBE,C５H１２O,CAS号:１６３４Ｇ０４Ｇ４,色谱纯). ５􀆰２　材料 ５􀆰２􀆰１　研钵 ５􀆰２􀆰２　量筒:规格为１０mL和１００mL ５􀆰２􀆰３　进样瓶:规格为２mL ５􀆰２􀆰４　离心管:规格为１􀆰５mL ５􀆰２􀆰５　内插管:规格为２００μL ５􀆰３　标准品 以下标准品均为经国家认证并授予标准物质证书的标准物质. ５􀆰３􀆰１　αＧ蒎烯(C１０H１６,CAS号:８０Ｇ５６Ｇ８,纯度＞９８％). ５􀆰３􀆰２　香桧烯(C１０H１６,CAS号:３３８７Ｇ４１Ｇ５,纯度＞９５％). ５􀆰３􀆰３　βＧ月桂烯(C１０H１６,CAS号:１２３Ｇ３５Ｇ３,纯度＞９０％). ５􀆰３􀆰４　dＧ柠檬烯(C１０H１６,CAS号:５９８９Ｇ２７Ｇ５,纯度＞９９％). ５􀆰３􀆰５　γＧ松油烯(C１０H１６,CAS号:９９Ｇ８５Ｇ４,纯度＞９７％). １NY/T４８６３—２０２５ ５􀆰３􀆰６　(Ｇ)Ｇ芳樟醇(C１０H１８O,CAS号:１２６Ｇ９１Ｇ０,纯度＞９８％). ５􀆰３􀆰７　橙花醛(C１０H１６O,CAS号:１０６Ｇ２６Ｇ３,纯度＞９５％). ５􀆰３􀆰８　乙酸芳樟酯(C１２H２０O２,CAS号:１１５Ｇ９５Ｇ７,纯度＞９７％). ５􀆰３􀆰９　香叶醛(C１０H１６O,CAS号:１４１Ｇ２７Ｇ５,纯度＞９５％). ５􀆰３􀆰１０　瓦伦烯(C１５H２４,CAS号:２２５Ｇ０４７Ｇ６,纯度＞７０％). ５􀆰３􀆰１１　饱和烷烃混标(C７ＧC４０). ５􀆰４　溶液 ５􀆰４􀆰１　提取工作液 用MTBE将内标壬酸甲酯稀释至４３􀆰７５μg/mL和１７􀆰５０μg/mL,分别为提取工作液A和工作液B. ５􀆰４􀆰２　标准品储备液 分别吸取标准品各５􀆰００μL,用MTBE分别定容至１０mL. ６　仪器和设备 ６􀆰１　天平 感量为０􀆰０１g,用于称取样品;感量为０􀆰０００１g,用于称取标准品. ６􀆰２　超声波清洗器 功率以４５０W为宜. ６􀆰３　气相色谱质谱联用仪(GCＧMS) 气相色谱(GC),质谱(MS). ６􀆰４　色谱柱 TRＧ５色谱柱,３０m０􀆰２５mm０􀆰２５μm. ７　样品制备 ７􀆰１　取样 ７􀆰１􀆰１　果皮和叶片:收集柑橘的果皮或叶片新鲜组织,用液氮快速研磨成粉末,称取０􀆰１０g样品粉末置 于２mL离心管中,用提取工作液A进行提取. ７􀆰１􀆰２　果肉和囊衣:收集柑橘的果肉或囊衣新鲜组织,用液氮快速研磨成粉末,称取１􀆰００g样品粉末置 于２mL离心管中,用提取工作液B进行提取. ７􀆰２　提取 向上述离心管中依次加入５００μL超纯水和５００μL提取工作液,涡旋混匀,然后于４℃、４５０W功率 下超声萃取４０min,随后在４℃、１２０００r/min离心１０min; ７􀆰３　上机 用１mL注射器吸取上述离心后的上清液３００μL,经０􀆰２２μm有机相滤膜过滤至带内插管的２mL 进样瓶中,准备GCＧMS分析. ８　检测 ８􀆰１　仪器条件 ８􀆰１􀆰１　气相色谱条件 进样口温度:２５０℃;恒流模式,载气流速:１mL/min.对于富含油胞的样品,选择分流模式,分流比 为５０∶１;对于不含油胞的样品,选择不分流模式.气相色谱柱升温程序应符合表１规定. ２NY/T４８６３—２０２５ 表１　气相色谱柱升温程序 升温速率,℃/min 温度,℃ 保持时间,min — ４０ ３ ２ １６０ １ ５ ２００ １ ８ ２４０ ３ ８􀆰１􀆰２　质谱条件 离子源温度:２６０℃;传输线温度:２８０℃;电离能量:７０eV;扫描模式:全扫模式;质荷比扫描范围: ４５amu~４００amu. ８􀆰２　GCＧMS分析 ８􀆰２􀆰１　配制梯度标准使用液 取各标准品储备溶液用MTBE稀释,分别配置成浓度为１３􀆰４４μg/mL、２６􀆰８８μg/mL、５３􀆰７５μg/mL、 １０７􀆰５０μg/mL、２１５􀆰００μg/mL的梯度标准使用液.根据挥发性物质在样品中的检测浓度范围对梯度标 准使用液的数量进行增删,使样品中挥发性物质的检测浓度处于梯度标准使用液的浓度范围内. ８􀆰２􀆰２　工作曲线的绘制 以８􀆰２􀆰１中各标准品梯度标准使用液的浓度与对应内标浓度的比值为横坐标,相应的定量离子峰面 积为纵坐标,建立工作曲线. ８􀆰２􀆰３　GCＧMS色谱图 在本文件规定的气相色谱质谱条件下,各目标化合物的色谱图见附录A. ８􀆰３　样品挥发性物质的分析 按７的流程进行样品制备,按本文件８􀆰１的仪器条件参数进行GCＧMS分析. ９　物质鉴定 按８􀆰２获得的目标化合物色谱图和质谱信息进行挥发性物质的定性分析.若有标准品,则与标准品 的保留时间和质谱信息对比确定,标准品的保留时间和特征离子见附录B;若无标准品,则基于NIST/ EPA/NIHMassSpectralLibrary和WileyRegistryofMassSpectralData谱库中标准质谱信息对比,对 照目标化合物与饱和烷烃标准品的保留时间,计算目标化合物的保留指数. 以饱和烷烃在对应色谱柱的保留时间为参考,按公式(１)计算目标化合物的保留指数(RI)值. RI＝１００×(n＋Ti－Tn T(n＋１)－Tn) (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: RI　———目标化合物i的保留指数; n———饱和烷烃的碳原子数; Ti———目标化合物i的保留时间,单位为分钟(min); Tn———含n个碳原子饱和烷烃的保留时间,单位为分钟(min); T(n＋１)———含(n＋１)个碳原子饱和烷烃的保留时间,单位为分钟(min). 计算结果保留整数. 样品中目标化合物的保留时间与期望保留时间(即其对应标准品工作液中的平均相对保留时间)的相 对偏差应控制在±３％以内;样品中目标化合物的不同碎片离子丰度比与期望Q值(即其对应标准品工作 液中碎片离子的平均离子丰度比)的相对偏差应控制在±３０％以内. １０　结果计算 １０􀆰１　挥发性物质质量浓度 若目标化合物有对应的标准品,按８􀆰２所绘制的工作曲线进行定量分析,可得目标化合物的真实质量 ３NY/T４８６３—２０２５ 浓度Pi.若目标化合物无标准品,则基于内标法定量.样品中目标化合物的质量浓度Pi按照公式(２) 计算. Pi＝(Ai×Pis Ais－b) a×f (２) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: Pi———样品中目标化合物i质量浓度的数值,单位为微克每毫升(μg/mL); Ai———样品中目标化合物i的定量离子峰面积; Pis———样品中目标化合物i对应内标物质量浓度的数值,单位为微克每毫升(μg/mL); Ais———样品中目标化合物i对应内标物的定量离子峰面积; b———工作曲线的截距; a———工作曲线的斜率; f———样品稀释的倍数. 计算结果小数点后保留２位有效数字. １０􀆰２　挥发性物质含量 目标化合物i在样品中的含量按公式(３)计算. ω＝Pi×V m(３)式中: 􀆺􀆺