2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 兽 用 抗 菌 药 物 敏 感 性 折 点 制 定 技 术 指 南 2 2 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 7 . 1 2 0 . 1 0 C C S X 4 8 4 7 — 2 0 2 5 G u i d e l i n e s f o r e s t a b l i s h m e n t o f s u s c e p t i b i l i t y b r e a k p o i n t s f o r v e t e r i n a r y a n t i m i c r o b i a l a g e n t s Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４８４７—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国兽药残留与耐药性控制专家委员会归口. 本文件起草单位:中国兽医药品监察所、华中农业大学、中国农业大学、华南农业大学、上海市兽药饲 料检测所. 本文件起草人:徐士新、郝海红、张纯萍、王鹤佳、赵琪、黄安雄、阮紫涵、吴聪明、廖晓萍、商军、黄玲利、 王旭、王少林、王淑歌、邹紫莹. ⅠNY/T４８４７—２０２５ 兽用抗菌药物敏感性折点制定技术指南 １　范围 本文件提供了兽用抗菌药物敏感性折点(以下简称“折点”)制定和最终确定的指南. 本文件适用于兽用抗菌药物流行病学界值、药动学/药效学界值、临床界值及其最终敏感性折点的 制定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改本)适用于本 文件. NY/T４１４１　动物源细菌耐药性监测样品采集技术规程 NY/T４１４２　动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程　微量肉汤稀释法 NY/T４１４３　动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程　琼脂稀释法 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 兽用抗菌药物　veterinaryantimicrobialagents 用于治疗动物细菌、支原体、真菌等微生物感染的发酵或化学合成的药物. ３􀆰２ 敏感　susceptible,S 批准剂量的抗菌药物能有效治疗病原菌感染. ３􀆰３ 中介　intermediate,I 批准剂量的抗菌药物在感染部位蓄积或高于批准剂量用药时,能有效治疗病原菌感染. 注:也用于预防微小的、不可控的技术参数等引起的判定差异. ３􀆰４ 耐药　resistant,R 批准剂量的抗菌药物无法抑制病原菌的生长,不能达到临床治疗效果. ３􀆰５ 最小抑菌浓度　minimalinhibitoryconcentration,MIC 抑制培养基中特定浓度病原菌生长所需的最低药物浓度. ３􀆰６ 抗菌后效应　postＧantimicrobialeffect,PAE 病原菌接触抗菌药物一定时间,当药物去除后,病原菌生长受到持续抑制的效应. ３􀆰７ 肉汤稀释法　brothdilution 将特定浊度病原菌接种于含有梯度药物浓度的液体培养基中共同孵育,体外测定抗菌药物对病原菌 的MIC的方法. 注:包括常量肉汤稀释法和微量肉汤稀释法. １NY/T４８４７—２０２５ ３􀆰８ 琼脂稀释法　agardilution 将特定浊度病原菌接种于含有梯度药物浓度的琼脂平板上共同孵育,体外测定抗菌药物对病原菌的 MIC的方法. ３􀆰９ 流行病学界值　epidemiologicalcutoffvalues,ECOFF 野生型界值　wildＧtypecutoffvalue,COWT 通过体外药物敏感性试验测定的无获得性耐药或非固有耐药的天然菌株对应的最高MIC值. ３􀆰１０ 药动学/药效学界值　PK/PDcutoffvalue,COPK/PD 根据药物在动物体内(如血液或特定感染部位)的药物代谢动力学(pharmacokinetics,PK)与药物效 应动力学(pharmacodynamics,PD)建立的MIC值. ３􀆰１１ 临床界值　clinicalcutoffvalue,COCL 基于临床试验研究数据,达到期望的临床/微生物效应(如９０％或以上治愈率)所对应的特定病原菌 MIC值. ３􀆰１２ 敏感性折点　susceptibilitybreakpoint 基于特定“药物动物病原菌”组合,在制定其ECOFF(COWT)、COPK/PD和COCL的基础上,根据决策 表确定的MIC值. 注:用于判断病原菌对药物是S、I或R. ３􀆰１３ 生理药物代谢动力学　physiologicalpharmacokinetics,PBPK 以生物体的生理学、解剖学特性和药物理化性质为研究基础的药物代谢动力学. ３􀆰１４ 群体药物代谢动力学　populationpharmacokinetics,PPK 以群体为对象,将传统的药代动力学模型与群体统计学模型结合,研究药代动力学特性中存在的变异 性,研究药物体内过程的群体规律、药代动力学参数的统计分布及其影响因素. ４　折点制定 ４􀆰１　流行病学界值(ECOFF) ４􀆰１􀆰１　药物敏感性试验的病原菌代表性 药物敏感性试验的病原菌代表性如下: a)　病原菌的区域代表性宜按NY/T４１４１的规定执行; b)病原菌分离株宜注明来源,宜含一定比例近年分离的菌株; c)当病原菌以属分类,至少３００株目标菌(如大肠杆菌、肠球菌等); d)当病原菌以种分类,至少１００株目标菌(如金黄色葡萄球菌等). e)当病原菌较难获得或苛养,至少５０株(如支原体等). ４􀆰１􀆰２　药物敏感性试验的操作规范 按NY/T４１４２或NY/T４１４３的规定执行. ４􀆰１􀆰３　耐药性分析 对临床分离株的耐药性进行分析,宜包含一定比例的、已知耐药机制的分离菌株.对于新型抗菌药物 或新增病原菌,研究同类药物之间的交叉耐药性.不同菌种的交叉耐药性应分别列表展示. ４􀆰１􀆰４　流行病学界值的确定 ２NY/T４８４７—２０２５ ４􀆰１􀆰４􀆰１　MIC值直方图展示 根据流行病学数据,分析特定药物对特定病原菌的MIC值分布直方图示例见附录A.对于以属分类 的指示菌,分别展示该属及其属内各菌种的MIC值分布直方图.采用KolmogorovＧSmirnov拟合度分析 和非线性回归分析两步法等方法获得ECOFF. ４􀆰１􀆰４􀆰２　KolmogorovＧSmirnov拟合度分析 对MIC分布进行以２为底的对数转化,选择KolmogorovＧSmirnov方法进行拟合度检验,检验实际分 布与正态分布模型的接近程度.当分布呈现双峰或多峰形态,需剔除非天然菌株数据后重新作图计算. ４􀆰１􀆰４􀆰３　非线性回归分析 对符合正态分布的MIC值进行非线性回归分析,获得修正后的平均值、标准差和病原菌株总数.对 MIC值分布频率依次进行拟合,每次递增一个MIC,进行多次修正,直至拟合的天然病原菌总数与实测病 原菌总数差别最小,得到最佳拟合度的天然病原菌MIC分布.选择９５％置信区间对应的MIC值为 ECOFF. ４􀆰２　药动学/药效学界值(COPK/PD) ４􀆰２􀆰１　基本要素 COPK/PD的建立需要体外药物效应动力学(包括MIC和抗菌作用类型等)、药物在动物血液或感染部 位的药物代谢动力学(PK)数据、药物代谢动力学/效应动力学(PK/PD)指数及其目标值. ４􀆰２􀆰２　药物效应动力学(PD) ４􀆰２􀆰２􀆰１病原菌的最小抑菌浓度(MIC) 按照４􀆰１􀆰２的规定进行测定. ４􀆰２􀆰２􀆰２　抗菌后效应(PAE) 将药物与病原菌混合培养,在适宜条件下培养一定时间后,通过反复洗涤、药物钝化或稀释(１００倍~ １０００倍稀释)将药物快速去除,继续监测病原菌生长动力学曲线.按公式(１)计算PAE. PAE＝T－C (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: T———去除药物后,给药组细菌对数生长,数目增加１０倍所需时间,单位为小时(h); C———同时间下,对照组细菌对数生长,数目增加１０倍所需时间,单位为小时(h). ４􀆰２􀆰２􀆰３　确定抗菌作用类型 梯度药物浓度与病原菌共同孵育,计数２４h内(根据病原菌种类调整孵育时间)不同时间点病原菌对 数减少量,绘制杀灭曲线;根据高浓度药物(特别是大于４倍MIC)处理后的杀菌速率与程度,确定是浓度 依赖型或时间依赖型药物.不同药物对特定病原菌具有不同作用特点,不能用一类药物作用特点代替某 种药物. ４􀆰２􀆰３　药物代谢动力学(PK) ４􀆰２􀆰３􀆰１　绘制药时曲线并获得主要PK参数 建立血浆(或感染部位)中抗菌药物浓度检测方法(如高效液相色谱法等).以特定给药途径单剂量或 多剂量给药后,测定受试动物体内血浆(或感染部位)药物浓度随时间变化趋势,绘制药时曲线;应用药物 代谢动力学软件,获得PK参数及其平均值和标准差,包括药时曲线下面积(AUC)、达峰浓度(Cmax)、达 峰时间(Tmax)、消除半衰期(T１/２)、总清除率(CL)和稳态分布容积(VDss)等. ４􀆰２􀆰３􀆰２　PK受试动物 PK受试动物如下: a)　主要从健康动物获取,条件允许下使用患病动物PK数据; b)　尽量考虑年龄