2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 饲 料 中 1 0 种 硝 基 呋 喃 类 化 合 物 的 测 定 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 4 6 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 2 0 C C S B 4 8 4 3 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f 1 0 n i t r o f u r a n s i n f e e d s — L i q u i d c h r o m a t o g r a p h y - t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４８４３—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC７６)归口. 本文件起草单位:上海市动物疫病预防控制中心、上海市质量监督检验技术研究院. 本文件主要起草人:秦宇、黄士新、翁史昱、吴剑平、张斌骏、王承平、虞成华、王安琪、顾颖娟、王博、 葛宇、曹莹、雷涛、严凤. ⅠNY/T４８４３—２０２５ 饲料中１０种硝基呋喃类化合物的测定　液相色谱串联质谱法 １　范围 本文件描述了饲料中１０种硝基呋喃类化合物的液相色谱串联质谱测定方法. 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂中呋喃苯烯 酸钠、呋喃妥因、硝呋醛肟、硝呋索尔、硝呋烯腙、呋喃它酮、硝呋齐特、硝呋吡醇、呋喃唑酮、呋喃西林的 测定. 本文件中呋喃苯烯酸钠、呋喃妥因、硝呋醛肟、硝呋索尔、硝呋烯腙、呋喃西林的检出限为０􀆰０２mg/kg,定 量限为０􀆰０５mg/kg;呋喃它酮、硝呋齐特、硝呋吡醇、呋喃唑酮的检出限为０􀆰００２mg/kg,定量限为 ０􀆰００５mg/kg. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T２０１９５　动物饲料　试样的制备 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样中的硝基呋喃类化合物用乙腈提取,中性氧化铝粉末净化,液相色谱串联质谱仪测定,基质匹配 外标法定量. ５　试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂. ５􀆰１　水:GB/T６６８２,一级. ５􀆰２　甲醇:色谱纯. ５􀆰３　乙腈:色谱纯. ５􀆰４　N,NＧ二甲基甲酰胺:色谱纯. ５􀆰５　二甲基亚砜:色谱纯. ５􀆰６　乙腈溶液(５０％,体积分数):移取乙腈(５􀆰３)５０mL与水(５􀆰１)５０mL,混匀. ５􀆰７　标准储备溶液(１mg/mL):准确称取１０种硝基呋喃类标准品(CAS号和结构式见附录A,纯度均不 小于９９％)各１０mg(精确至０􀆰０１mg),分别置于１０mL棕色容量瓶中,其中呋喃苯烯酸钠用二甲基亚砜 (５􀆰５)溶解并定容,硝呋烯腙用N,NＧ二甲基甲酰胺(５􀆰４)溶解并定容,呋喃它酮用甲醇(５􀆰２)溶解并定容, 呋喃妥因、硝呋醛肟、硝呋索尔、硝呋齐特、硝呋吡醇、呋喃唑酮、呋喃西林用乙腈(５􀆰３)溶解并定容,混匀. 于－１８℃下避光保存,有效期６个月. ５􀆰８　混合标准工作溶液Ⅰ(１０μg/mL):分别准确移取呋喃它酮、硝呋齐特、硝呋吡醇、呋喃唑酮标准储备 溶液(５􀆰７)１mL于１００mL棕色容量瓶中,用乙腈(５􀆰３)稀释至刻度,混匀.于－１８℃下避光保存,有效期 ６个月. １NY/T４８４３—２０２５ ５􀆰９　混合标准工作溶液Ⅱ(１００μg/mL):分别准确移取呋喃苯烯酸、呋喃妥因、硝呋醛肟、硝呋索尔、硝呋 烯腙、呋喃西林标准储备溶液(５􀆰８)５mL于５０mL棕色容量瓶中,用乙腈(５􀆰３)稀释至刻度,混匀.于－ １８℃下避光保存,有效期６个月. ５􀆰１０　混合标准系列溶液:分别准确移取适量体积的混合标准工作液Ⅰ(５􀆰８)和混合标准工作液Ⅱ(５􀆰９) 于棕色容量瓶中,用乙腈溶液(５􀆰６)配置成呋喃它酮、硝呋齐特、硝呋吡醇、呋喃唑酮质量浓度分别为 ０􀆰５ng/mL、１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、１０ng/mL,呋喃苯烯酸、呋喃妥因、硝呋醛肟、硝呋索尔、硝呋 烯腙、呋喃西林质量浓度分别为５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL的混合标准系列 溶液.临用现配. ５􀆰１１　中性氧化铝粉末:粒径为４０μm~６０μm. ５􀆰１２　微孔滤膜:０􀆰２２μm,有机系. ６　仪器设备 ６􀆰１　液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾(ESI)离子源. ６􀆰２　分析天平:精度为０􀆰０１g和０􀆰０１mg. ６􀆰３　离心机:转速不低于９０００r/min. ６􀆰４　涡旋混合器. ６􀆰５　氮吹仪. ７　样品 按GB/T２０１９５制备样品,至少２００g,粉碎使其全部通过粒径为０􀆰４２５mm的分析筛,充分混匀,装 入密闭容器中,避光保存,备用.选取类型相同,均匀一致且在待测物保留时间处,仪器响应值小于方法定 量限３０％的饲料样品,作为空白样品. ８　试验步骤 注意:试验全过程避光操作. ８􀆰１　提取 平行做两份试验.称取试样２g(精确至０􀆰０１g),置于５０mL离心管中,加入１５mL乙腈(５􀆰３)涡旋 混匀.涡旋提取２０min,９０００r/min离心１min,将上清液转移至５０mL棕色容量瓶中.重复提取两 次,合并上清液,用乙腈(５􀆰３)稀释并定容(V１),涡旋混匀,备用. ８􀆰２　净化 准确移取提取液(８􀆰１)１０mL于１５mL离心管中,加入１g中性氧化铝粉末(５􀆰１１),涡旋１min, ９０００r/min离心１min,准确移取上清液５mL(V２)于１０mL刻度试管中,在室温下用氮气吹至小于 １mL,用水定容至２mL(V３),涡旋混匀,过微孔滤膜(５􀆰１２)滤液待测. ８􀆰３　基质匹配标准系列溶液的制备 取空白试样,按８􀆰１和８􀆰２处理至氮气吹干,准确移取混合标准系列溶液(５􀆰１０)２mL溶解残余物, 制得呋喃它酮、硝呋齐特、硝呋吡醇、呋喃唑酮质量浓度分别为０􀆰５ng/mL、１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、 １０ng/mL,呋喃苯烯酸、呋喃妥因、硝呋醛肟、硝呋索尔、硝呋烯腙、呋喃西林质量浓度分别为５ng/mL、 １０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL的基质匹配混合标准系列溶液. ８􀆰４　测定 ８􀆰４􀆰１　液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下: a)　色谱柱:C１８柱,内径２􀆰１mm,柱长１００mm,粒径１􀆰９μm,或性能相当者; b)流动相:A相为水(５􀆰１),B相为乙腈(５􀆰３),梯度洗脱程序见表１; c)流速:０􀆰３５mL/min; ２NY/T４８４３—２０２５ d)柱温:４０℃; e)进样量:２　μL. 表１　梯度洗脱程序 时间 minA相 ％B相 ％ ０􀆰０ ９０ １０ １􀆰０ ９０ １０ ２􀆰５ １０ ９０ ４􀆰０ １０ ９０ ４􀆰１ ９０ １０ ７􀆰０ ９０ １０ ８􀆰４􀆰２　质谱参考条件 质谱参考条件如下: a)　离子源模式:电喷雾电离,正/负离子模式(ESI＋/ESI－); b)检测方式:多反应监测(MRM); c)喷雾电压:３􀆰０kV; d)离子源温度:１５０℃; e)脱溶剂气流速:８００L/h; f)锥孔气流速:１５０L/h; g)脱溶剂气温度:５００℃. 多反应监测(MRM)离子对、锥孔电压、碰撞能量的参考值及扫描模式见表２. 表２　多反应监测(MRM)离子对、锥孔电压、碰撞能量的参考值及扫描模式 被测物名称监测离子对 m/z锥孔电压 V碰撞能量 eV扫描模式 呋喃苯烯酸钠２５７􀆰６＞２１３􀆰８a ２５７􀆰６＞１８４􀆰０１０ １０１２ １８负离子 呋喃妥因２３７􀆰０＞１５２􀆰１a ２３７􀆰０＞１９３􀆰９２０ ２０１０ １５负离子 硝呋醛肟１５５􀆰１＞９５􀆰０a １５５􀆰１＞８１􀆰１２０ ２０１０ １０负离子 硝呋索尔３６６􀆰０＞２１０􀆰９a ３６６􀆰０＞１５６􀆰０４０ ４０２０ ３５正离子 硝呋烯腙３６１􀆰４＞１８０􀆰０a ３６１􀆰４＞３０２􀆰０４０ ４０２０ ２０正离子 呋喃它酮３２５􀆰４＞２５２􀆰１a ３２５􀆰４＞２８１􀆰０４０ ４０１５ ２５正离子 硝呋齐特２７６􀆰１＞１２１􀆰１a ２７６􀆰１＞９３􀆰１４０ ４０２０ ４０正离子 硝呋吡醇２４７􀆰２＞１５４􀆰１a ２４７􀆰２＞２２９􀆰０４０ ４０１５ ３０正离子 呋喃唑酮２２６􀆰２＞１２２􀆰０a ２２６􀆰２＞１３９􀆰０４０ ４０２０ １５正离子 呋喃西林１９９􀆰３＞１８２􀆰１a １９９􀆰３＞１３５􀆰９４０ ４０１０ １５正离子 　　a　为定量离子. ８􀆰４􀆰３　基质匹配标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下,分别取基质匹配标准系列溶液(８􀆰３)和试样溶液(８􀆰２)上机测定.１０种硝基呋 喃类化合物基质匹配标准溶液的定量离子色谱图见附录B. ３NY/T４８４３—２０２５ ８􀆰４􀆰４　定性 在相同试验条件下,试样溶液(８􀆰２)与基质匹配标准溶液中待测