2 0 2 5 1 2 0 9 发 布 － － 2 0 2 6 0 5 0 1 － － 实 施 香 菇 液 体 菌 种 生 产 技 术 规 程 3 9 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 7 9 8 — 2 0 2 5 T e c h n i c a l c o d e o f p r a c t i c e f o r l i q u i d s p a w n o f X i a n g g u Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４７９８—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:上海市农业科学院、上海国森生物科技有限公司、河南金海生物科技有限公司、延边 德康生物技术有限公司、山东御苑生物科技有限公司,辽宁峪程菌业有限公司. 本文件主要起草人:周峰、李玉、谭琦、宋春艳、尚晓冬、董慧、于海龙、刘四海、李巧珍、李正鹏、董浩然、 姜宁、郭倩、章炉军、陆欢、高霞、张丹、刘建雨、王瑞娟、张美彦、徐珍、杨慧. ⅠNY/T４７９８—２０２５ 香菇液体菌种生产技术规程 １　范围 本文件规定了香菇液体菌种生产的产地环境、生产设施与设备、工艺流程、生产技术、留样、储存和生 产记录的要求. 本文件适用于香菇液体菌种生产. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T１５０􀆰１　压力容器　第１部分:通用要求 GB３０９５　环境空气质量标准 GB５７４９　生活饮用水卫生标准 GB/T１２７２８　食用菌术语 GB１９１７０　香菇菌种 GB５００７３　洁净厂房设计规范 NY/T１１９　饲料原料　小麦麸 NY/T５２８　食用菌菌种生产技术规程 NY/T１８４６　食用菌菌种检验规程 NY/T３４７６　饲料原料　甘蔗糖蜜 HG/T４０２８　有机硅高温消泡剂 ３　术语和定义 GB/T１２７２８界定的以及下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 母种　stockculture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物,也称一级种. [来源:GB/T１２７２８—２００６,２􀆰５􀆰７,有修改] ３􀆰２ 液体菌种　liquidspawn 培养基为液体状态的菌种. [来源:GB/T１２７２８—２００６,２􀆰５􀆰３０] ３􀆰３ 摇瓶液体菌种　liquidspawninshakeＧflask 由母种移植至摇瓶液体培养基中,在磁力搅拌器或摇床上扩大培养的液体菌种. ３􀆰４ 发酵罐液体菌种　liquidspawninfermenter 由摇瓶液体菌种转接至发酵罐液体培养基中,通入无菌空气深层培养而成的液体菌种. ４　产地环境 ４􀆰１　环境要求 １NY/T４７９８—２０２５ 环境应干净整洁,周围无生活垃圾堆放或填埋场,无畜禽养殖场,无工业固体废弃物和危险废弃物堆 放或填埋场等.环境应符合GB３０９５中环境空气二类区质量要求及NY/T５２８对产地环境的规定. ４􀆰２　厂房设置和布局 厂房设置和布局应符合NY/T５２８要求,应增设摇瓶液体菌种培养室、发酵罐液体菌种培养室.净 化车间应符合GB５００７３要求. ５　生产设施与设备 香菇液体菌种生产应有NY/T５２８规定的相关设施设备,还应配备水处理设备、发酵罐、摇床或磁力 搅拌器、蒸汽发生器、空气压缩机、压缩空气储气罐及空气过滤系统等.压力容器应使用经有资质部门生 产与检验的安全合格产品,发酵罐应符合GB/T１５０􀆰１规定.空气过滤系统一般包括冷冻干燥机、吸附式 干燥机、空气过滤器、恒温机等.应配备备用电源(发电机). ６　工艺流程 工艺流程见图１. 图１　香菇液体菌种生产工艺流程 ７　生产技术 ７􀆰１　培养基配方 母种培养基可采用附录A中A􀆰１规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(以下简称“PDA培养基”).摇瓶 液体菌种培养基可采用A􀆰２给出的配方,发酵罐液体菌种可采用A􀆰３给出的配方.糖蜜应符合NY/T ３４７６要求,麦麸应符合NY/T１１９要求,消泡剂应符合HG/T４０２８要求,生产用水应符合GB５７４９要 求,其他培养基质应符合NY/T５２８要求.生物制剂和天然材料的水不溶性固体物料粉碎后应过孔径 ０􀆰１２５mm~０􀆰１５０mm的筛网. ７􀆰２　母种生产 母种生产应符合NY/T５２８要求,按NY/T１８４６规定检验,母种质量应符合GB１９１７０要求.母种 菌丝体纯白色,无异常色泽和形态;菌落形态均匀平整,边缘整齐,无角变;背面无色素或暗斑;无污染;显 微镜观察菌丝有锁状联合. ７􀆰３　摇瓶液体菌种生产 ７􀆰３􀆰１　容器 ２NY/T４７９８—２０２５ 宜选用１０００mL三角甁,用棉(梳棉)塞、硅胶塞、海绵塞或专用封口透气膜封口. ７􀆰３􀆰２　培养基配制与装瓶 按照A􀆰２配方配制培养基,装液量为摇甁容量的４０％~６０％,加入１粒３cm~３􀆰５cm的磁转子,封 口后灭菌,灭菌时瓶口用报纸、硫酸纸或牛皮纸包扎防潮. ７􀆰３􀆰３　灭菌、冷却 灭菌温度１２１℃,维持３０min~４０min.灭菌结束将摇瓶放入超净工作台中冷却至２６℃以下备用. ７􀆰３􀆰４　接种 严格按无菌操作规程,接种直径３mm~５mm的母种块２０块~２４块,挑取的母种块应距离接种点 ２cm~４cm. ７􀆰３􀆰５　培养 将接种后的摇瓶置于磁力搅拌器上,１０００r/min~１２００r/min打碎１h~２h,然后置于摇床(转速 １１０r/min~１３０r/min)或磁力搅拌器(转速４００r/min~８００r/min),２３℃~２６℃,避光培养５d~７d. ７􀆰３􀆰６　菌种检验 每日观察菌液颜色、菌球形态,及时捡出浑浊、泡沫异常的不合格菌种. ７􀆰３􀆰７　菌种质量标准 菌球及片段形态饱满、均匀,密集;静置６０min~９０min,菌球体积占比不低于整个菌液的８５％;pH ３􀆰０~５􀆰０;菌丝湿重０􀆰１g/mL~０􀆰２０g/mL.取样无异味,镜检无杂菌,菌丝有锁状联合.检验方法按照 附录B的规定执行. ７􀆰４　发酵罐液体菌种生产 ７􀆰４􀆰１　蒸汽发生系统、空气过滤系统和循环冷却水系统检查 生产前,检查蒸汽发生系统、空气过滤系统和循环冷却水系统等设施设备,确保工作正常. ７􀆰４􀆰２　发酵罐检查与清洗 发酵罐的阀门、安全阀、压力表应完好,气密性良好,工作正常.用流水将罐体内、外和全部阀门冲洗 干净,无死角. ７􀆰４􀆰３　空消 在初次使用、出现杂菌、长期放置或更换品种时,发酵罐应进行空消.灭菌压力０􀆰１１MPa~０􀆰１３ MPa、温度１２１℃~１２３℃、时间３０min~６０min.空消结束,通气备用. ７􀆰４􀆰４　投料、定容 根据A􀆰３配方,按照所需的发酵数量准确称取培养料,搅拌均匀后过孔径０􀆰３mm~０􀆰６mm筛网, 加入罐体,加水定容至所需体积,加入０􀆰０３％~０􀆰０５％消泡剂,通气搅拌混合均匀,拧紧上料口盖.气密 性检查良好方可进行灭菌. ７􀆰４􀆰５　实消 灭菌压力０􀆰１１MPa~０􀆰１３MPa、温度１２１℃~１２３℃、时间５０min~６０min.灭菌时微开排气阀, 保持蒸汽通畅. ７􀆰４􀆰６　冷却 灭菌结束后将培养液温度降至２３℃~２６℃.降温过程中应及时向发酵罐内通入无菌空气,罐内始 终维持正压状态,防止冷却过程中罐压回零倒吸导致污染. ７􀆰４􀆰７　接种 采用火焰接种法,按无菌操作规程,将摇瓶液体菌种接入发酵罐,接种量为培养液总量的０􀆰１％~ ０􀆰５％(v/v). ７􀆰４􀆰８　培养 根据菌丝生长情况,适时调节进气阀和排气阀,维持罐压０􀆰０３MPa~０􀆰０５MPa,通气比０􀆰２vvm~ ０􀆰３vvm,培养温度２３℃~２６℃,时间６d~８d.接种后每日检查菌液色泽、菌球形态和排气气味,发现 ３NY/T４７９８—２０２５ 问题及早处理. ７􀆰４􀆰９　菌种检验 检验方法按照附录B的规定执行. ７􀆰４􀆰１０　菌种质量标准 质量标准按照附录C的规定执行. ７􀆰４􀆰１１　放罐 经检验,达到菌种质量标准即可放罐.放罐应严格遵守无菌操作规程. ８　留样 菌种和培养基均应留样备查.母种每个批次留存３支~５支,于２℃~４℃下储存,储存至该批次菌 种出第一潮菇.摇瓶液体菌种每个批次留样３０mL~４０mL;发酵罐实消后的空白培养液、放罐前２４h~ ４８h的菌液和发酵终止后的菌液均留样１００mL~１５０mL.样品用三角瓶留存,２℃~４℃保存７d 以上. ９　储存 摇瓶液体菌种,２℃~４℃可存放１d~３d.发酵罐液体菌种,储存时持续通入无菌空气,保持罐压 ０􀆰０３MPa~０􀆰０５MPa,１０℃~２０℃可存放１d~３d. １０　生产记录 母种、摇瓶液体菌种和发酵罐液体菌种生产的每个环节应有完整详实的生产记录档案,以备提供香菇 液体菌种生产所涉及的各环节的溯源记录.生产记录由具体操作人员现场填写,每天由主管领导审核,签 字后归档保存,留存至少２年.有条件的提倡使用电子生产记录.生产档案记录事项见附录D. ４NY/T４７９８—２０２５ 附　录　A (规范性) 培养基配方 　 A􀆰１　马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基