21 辽宁省地方标准 DB21/T4431—2026 梅花鹿体内胚胎生产与移植技术规程 Codeofpracticeforinvivoembryoproductionandtransferinsikadeer 2026-05-07发布 2026-06-07实施 辽宁省市场监督管理局  发布ICS20.060.30 CCSB44DB21/T4431—2026 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：辽宁省农业农村发展服务中心、桓仁强风鹿业科研繁育基地。 本文件主要起草人：邓福金、关春梁、杨术环、王化青、杜学海、江馗语、王超、李静、关伟国、 杨鹏、詹克宇、金洪艳、樊琳琳。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024-23447862。 本文件起草单位通讯地址:辽宁省农业农村发展服务中心（沈阳市皇姑区陵园街7-1号），联系电 话：024-81845015。DB21/T4431—2026 1梅花鹿体内胚胎生产与移植技术规程 1范围 本文件规定了供体鹿的选择与饲养管理、同期发情超数排卵与人工授精、胚胎采集与胚胎质量鉴定、 胚胎冷冻保存与解冻、胚胎移植与妊娠检查技术操作的要求，描述了记录过程。 本文件适用于梅花鹿体内胚胎生产与移植技术操作。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T5458液氮生物容器 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T25881牛胚胎 GB/T45209鹿人工授精技术规程 NY/T1674牛羊胚胎质量检测技术规程 DB21/T1835梅花鹿饲养管理技术规程 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4供体鹿的选择与饲养管理 4.1供体鹿的选择 应满足以下条件： a)品种优良，生产性能高，经济价值大； b)三代系谱完整，繁殖机能正常，遗传性能稳定； c)3岁～5岁经产母鹿，体质健康，营养状况良好。 4.2供体鹿的饲养管理 应满足以下条件： a)单圈饲养，保持安静的环境； b)超数排卵前28d～30d应进行短期优饲，每只每天补饲胡萝卜0.25kg，精料饲喂量及配方遵 守DB21/T1835中的规定； c)同期发情处理后，肌肉注射维生素ADE，剂量参见产品说明； d)超数排卵前28d，不应注射疫苗。DB21/T4431—2026 25供体鹿的同期发情、超数排卵与人工授精 5.1器材和药品 5.1.1器材 见附录A中A.1。 5.1.2药品 见附录A中A.2。 5.2同期发情与超数排卵 5.2.1供体鹿的同期发情处理 在发情周期的任意一天将CIDR植入母鹿阴道深处（埋栓），在埋栓后第11天换栓、第13天撤栓。 5.2.2供体鹿的超数排卵处理 在埋栓后第11天开始肌肉注射FSH，每天早、晚各1次，间隔12h，共8次，剂量递减，总剂量 10.00mL，在第6次肌肉注射FSH的同时肌肉注射PG-CI0.15mg，撤栓后第30小时～第36小时肌肉 注射LHRH-A325µg。FSH注射程序见表1。 表1FHS注射程序 第11天 第12天 第13天 第14天 FSH2.60mL FSH1.80mL FSH1.40mL FSH1.00mL FSH2.20mL FSH1.80mL FSH1.40mL FSH0.70mL 注：每瓶FSH（500IU）用10mL生理盐水稀释。 5.3人工输精 5.3.1冷冻精液 精子活力≥35%（即0.35），每支细管含有前向运动精子数量≥1000万个。 5.3.2试情与输精 5.3.2.1撤栓后12h开始试情，母鹿接受爬跨视为发情。 5.3.2.2发情母鹿于撤栓后第40小时～第44小时输精一次。 5.3.3输精方法 应遵守GB/T45209规定的要求。 5.4记录 填写供体同期发情、超数排卵与人工授精记录表，见附录B中表B.1。DB21/T4431—2026 36胚胎采集与胚胎质量鉴定 6.1基本要求 6.1.1现场条件 6.1.1.1具有相对独立的采胚室、检胚室、胚胎冷冻室。 6.1.1.2采胚室宽敞明亮、无灰尘，并配有照明、上下水、工作台、保定架等设施，宜与检胚室相邻。 6.1.1.3采胚室和检胚室配备温度控制和紫外消毒设备，温度宜控制在18℃～25℃，采胚前一天用 紫外线灯照射30min～40min。 6.1.2器材消毒 凡是接触鹿的器材，如手术剪、手术刀、宫颈钳、打孔器、镊子、创布、毛巾、纱布等，洗净后放 入（金属器械用布包好）高压灭菌器中，温度121℃～126℃，维持30min，消毒后置于无菌箱中备 用。 6.1.3人员准备 操作人员应穿好工作服，戴好工作帽和医用乳胶手套，双手用0.1%新洁尔灭溶液消毒。 6.1.4供体准备 供体应在手术前24h断水断料，避免应激。 6.2器材、药品和试剂 6.2.1器材 见附录A中A.3。 6.2.2药品和试剂 见附录A中A.4。 6.2.3冲胚液和保存液 冲胚液配制见附录C中C.1，保存液配制见附录C中C.2。或者使用商品冲胚液、保存液。 6.3胚胎采集 6.3.1胚胎采集时间 人工输精后的第6天进行。 6.3.2胚胎采集步骤 6.3.2.1用吹管、吹针、麻醉药将供体麻倒，头朝前呈水平仰卧姿势保定在保定架上，拉出舌头，戴 上头套，运到采胚室。 6.3.2.2位于乳房前4cm、腹中线两侧20cm区域，先用剃毛剪剔除皮肤的被毛，再用剃须刀刮净。用 湿毛巾擦净，先用5%碘酊消毒，再用75%酒精脱碘处理。DB21/T4431—2026 46.3.2.3升起保定架一端，呈前低后高姿势,术部固定好创布。 6.3.2.4在乳房前4cm，沿腹中线用手术刀切约5cm切口，用宫颈钳将子宫角及卵巢牵出，观察左右 卵巢上的黄体发育情况，记录黄体数目。 6.3.2.5卵巢上没有黄体或黄体数量少于3个（包括3个），不进行冲胚；卵巢上有3个以上黄体，在子 宫角基部（上1/3处）用止血钳穿孔，插入冲胚管，由冲胚管的充气孔注入3mL～5mL冲胚液，使气囊 封阻子宫腔。在子宫角的上端（子宫角和输卵管结合部）用打孔器打一小眼，插入套管针，将套管针向 输卵管方向插入，拔出针芯，将装有冲胚液的20mL注射器接到套管针上，注入2针管共40mL冲胚液（手 术前置于35℃～37℃水浴箱中），将胚胎由冲胚管的出液孔收集于培养皿（Φ90mm）中，用记号笔 在培养皿上做好标记。抽出气囊中液体，取下冲胚管，用同样的方法冲取另一侧子宫角的胚胎。 6.3.2.6用含青霉素的生理盐水（500mL生理盐水加入青霉素400万单位）冲洗子宫角，放回腹腔。 6.3.2.7创口用缝合针和可吸收性外科缝合线缝合两层，腹膜和肌肉层连续缝合，皮肤结节缝合，外 涂5%碘酊，肌肉注射兽用土霉素160万单位和PG-CI0.2mg。 6.3.2.8将供体鹿运回鹿舍，肌肉注射麻醉解药，剂量是麻醉药的2.5倍。 6.4胚胎检查 6.4.1在20℃～25℃环境条件下，将盛有冲胚液的培养皿放在28℃～30℃恒温板上，静置10min， 让其自然沉降。 6.4.2在体式显微镜8倍～10倍镜下，将寻找到的胚胎用连有移胚针的1mL注射器或吸胚管移入盛有保 存液的培养皿（Φ35mm）中，同一供体的胚胎应放在一个培养皿内，并记录。 6.5胚胎洗涤 6.5.1将同一供体的胚胎从保存液中吸出移到另一个培养皿中的保存液中，洗涤1次～2次。 6.5.2每次洗涤保存液应不少于200µL，每组洗涤胚胎数不应超过10枚，每次洗涤应更换移胚针、注 射器或吸胚管，每次洗涤胚胎带入培养皿中的液体量不应超过1%。 6.6胚胎质量鉴定 6.6.1胚胎洗涤后，置于体式显微镜50倍以上镜下观察胚胎发育状态，确定胚胎等级。 6.6.2胚胎发育期划分应按照GB/T25881的规定执行。 6.6.3胚胎等级划分应按照NY/T1674的规定执行。 6.6.4胚胎分为A、B、C、D四个等级，其中A、B、C级为可用胚胎，D级为不可用胚胎。 6.7记录 胚胎采集及质量鉴定后，应由操作人员及时填写胚胎采集与胚胎质量鉴定记录表，见附录B中表B.2。 7胚胎的冷冻、保存与解冻 7.1器材 见附录A中A.5。 7.2胚胎的冷冻 7.2.1冷冻液