ICS 11.220 CCS B 41 团体标准 T/CVMA 366—2026 淀粉卵涡鞭虫病诊断技术 Diagnostic techniques for amyloodiniosis 2026 - 4 - 1发布 2026 - 4 - 1实施 中国兽医协会 发布 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 中国兽医协会 CVMA全国团体标准信息平台 T/CVMA 366—2026 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 广州双螺旋基因技术有限公司 \中山大学 和华南农业大学 共同提出。 本文件由中国兽医协会归口。 本文件起草单位：广州双螺旋基因技术有限公司、华南农业大学、中山大学 。 本文件主要起草人： 石磊、但学明、李安兴、李言伟、莫泽权、李志成、常彦磊、张璜、陈灏挺、 孔明慧。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 中国兽医协会 CVMA全国团体标准信息平台 T/CVMA 366—2026 1 淀粉卵涡鞭虫病诊断技术 1 范围 本文件规定了淀粉卵涡鞭虫病 (Amyloodiniosis) 临床检查、样品采集、淀粉卵涡鞭虫形态学鉴定 和 TaqMan实时荧光 PCR检测方法。 本文件适用于淀粉卵涡鞭虫病的检测、诊断和检疫。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 668 2 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 眼点淀粉卵涡鞭虫 Amyloodinium ocellatum 眼点淀粉卵涡鞭虫隶属于肉足鞭毛门（ Sarcomastigophora ）腰鞭毛目（ Dinoflagell ata）淀粉卵涡鞭 虫属（ Amylood inium）。该寄生虫主要寄生于热带和亚热带海水鱼类的鳃、皮肤和鳍条，感染 多种海水 鱼类，被列为重要的海洋鱼类病原。 3.2 淀粉卵涡鞭虫病 Amyloodiniosis 由眼点淀粉卵涡鞭虫感染海水鱼类引起的疾病，主要在热带和亚热带地区的海水养殖区暴发，包括 中国、法国、印度、埃及和美国等地。感染该寄生虫的鱼类表现为摄食量减少、呼吸频率加快，并聚集 于水面或氧气充足的区域。严重感染时，病鱼在 12 h内窒息死亡。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 实时荧光 PCR：实时荧光聚合酶链式反应（ Real-time polymerase chain reaction ） Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环数（ Cycle threshold ） DNA：脱氧核糖核酸（ deoxyribonucleic acid ） Taq酶： Taq DNA 聚合酶（ Taq DNA ploymerase ） 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 366—2026 2 5 临床诊断 5.1 临床特征 5.1.1 患病部位 眼点淀粉卵涡鞭虫寄生于海水鱼类的鳃、皮肤和鳍条。 5.1.2 主要症状 病鱼出现体色加深、体表黏液分泌增多、摄食减少、活动能力下降等临床症状。严重感染时，鳃丝 颜色变浅或呈苍白状，鳃部可观察到 白点。 5.2 流行病学 淀粉卵涡鞭虫病俗称 “海水鱼天鹅绒病 ”，是由眼点淀粉卵涡鞭虫寄生于海水鱼类体表而引起的寄 生虫病。该病主要集中在 4月到 7月或 9月到 10月，在水温高于 20℃、水体交换量少的密集养殖区域 易暴发，严重时可造成较高的死亡率。 6 样品采集 6.1 采样要求 选择符合 5.1临床症状 的患病鱼 。 6.2 采集部位和样品 采集患病鱼的鳃丝、鳍条或体表黏液。 7 初步判定 7.1 若发现鱼体符合 5.1.2时，取鳃丝压片或用载玻片将鱼体表的黏液刮下压片，显微镜下见椭圆形或 梨形静止的黑色虫体（参见附录 A图A.1），大小为 30 μm ~ 80 μm，可判定为可疑 。 7.2 当发现可疑病鱼时，需继续观察或采样进行 病原学鉴定。 8 TaqMan实时荧光 PCR反应 8.1 设备和器械 8.1.1 水浴锅或金属浴。 8.1.2 普通冰箱。 8.1.3 显微镜。 8.1.4 荧光定量 PCR仪。 8.1.5 微量可调移液器及配套吸头 （1 μL ~ 2.5 μL，0.5 μL ~ 10 μL，10 μL ~ 100 μL，100 μL ~ 1000 μL）。 8.2 材料和试剂 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 366—2026 3 8.2.1 除非另有说明，检测中所用试剂均为分析纯，试验用水符合 GB/T 6682 的要求。 8.2.2 水生动物病原体基因组提取试剂盒。 8.2.3 荧光 PCR反应液：按照不同的实时荧光 PCR平台的说明书选取推荐的荧光 PCR扩增试剂。 8.2.4 引物和探针：参照 眼点淀粉卵涡鞭虫 18S rRNA 特异性基因片段（序列见 附录 B.1） ，设计眼点 淀粉卵涡鞭虫 荧光 PCR扩增特异性引物及探针序列，见附录 C。 8.2.5 阳性对照 ：含有眼点淀粉卵涡鞭虫 18S rRNA 基因片段的重组质粒按照附录 B中B.2制备，也 可以使用其他经过确认的阳性质控品 。 8.2.6 阴性对照 ：已被确认为未感染 眼点淀粉卵涡鞭虫 的阴性样品。 8.2.7 空白对照：超纯水 。 8.3 实时荧光 PCR操作 8.3.1 样品 DNA提取 在核酸提取区进行。 取鱼体表的虫体 ，使用商品化的 核酸提取试剂盒 进行提取。 8.3.2 实时荧光 PCR反应体系 反应体系的配制应在专门的区域进行，反应体系的配制见附录 D中表 D.1。 8.3.3 实时荧光 PCR反应程序 实时荧光 PCR反应程序见附录 D.2。 8.4 结果判定 8.4.1 试验成立条件 当阳性对照的 FAM检测通道有典型的 S型扩增曲线且 Ct值≤ 30，阴性对照和空白对照的 FAM检 测通道均无扩增曲线且 Ct > 40或者无值时，试验成立；否则试验无效。 8.4.2 结果判定 8.4.2.1 阳性 被检样品 FAM检测通道出现典型的 S型扩增曲线，且 Ct值≤ 36，判定为 眼点淀粉卵涡鞭虫 核酸 阳性。 8.4.2.2 阴性 被检样品 FAM检测通道 Ct值≥40或无 Ct值，未见的S型扩增曲线， 判定为眼点淀粉卵涡鞭虫 核 酸阴性。 8.4.2.3 可疑 被检样品 FAM检测通道 36<Ct值<40，判定为可疑，可疑样品需 重新进行一次检测。如重新检测 后仍出现上述结果，可判定为阳性；如重复检测后无 Ct值或者无 “S”型扩增曲线，可判定为阴性。 9 综合判定 9.1 如果病鱼黏液或鳃丝在显微镜下观察到疑似虫体 ，则判定为可疑。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台 T/CVMA 366—2026 4 9.2 如观察到疑似虫体，并用 TaqMan实时荧光 PCR方法检测结果为阳性，则可确诊为眼点淀粉卵涡 鞭虫。病鱼同时符合 5.1中的症状，则确诊为淀粉卵涡鞭虫病 。 中国兽医协会 CVMA 全国团体标准信息平台