书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜４ ０ ４ ８—２ ０ １ ４ 出口食品中季铵盐的测定液相色谱 质谱／质谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狇狌 犪 狋 犲 狉 狀 犪 狉 狔犪 犿犿 狅 狀 犻 狌 犿犮 狅 犿 狆狅 狌 狀 犱 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋—犔 犆  犕 犛／犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ４１ １１ ９发布 ２ ０ １ ５０ ５０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局 、中国检验检疫科学研究院 。本标准主要起草人 ：李玲、康明芹、张勋、吴连鹏、胡婷婷、吴剑、牟峻、陈明岩、陈冬东。 Ⅰ犛 犖／犜４ ０ ４ ８—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口食品中季铵盐的测定液相色谱 质谱／质谱法 １　范围 本标准规定了出口食品中 ５种季铵盐的液相色谱 质谱／质谱测定方法 。本标准适用于猪肉 、牛肝、苹果、菠菜、大米、白糖、生乳中十二烷基三甲基溴化铵 （ＤＴＡＢ） 、十二烷基二甲基苄基氯化铵 （Ｃ １ ２  Ｂ ＡＣ ） 、十四烷基二甲基苄基氯化铵 （Ｃ １ ４  Ｂ ＡＣ ） 、十六烷基二甲基苄基氯化铵（Ｃ １ ６  Ｂ ＡＣ ） 、二癸基二甲基氯化铵 （ＤＤＡＣ）的测定和确证 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和实验方法 ３　方法提要 试样用甲醇或甲醇溶液提取 ，经固相萃取柱净化 ，用液相色谱 质谱／质谱测定和确证 ，外标法定量 。 ４　试剂和材料 除另有规定外 ，所用试剂均为色谱纯 ，水为Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２规定的一级水 。 ４．１　甲醇。 ４．２　甲酸。 ４．３　乙腈。 ４．４　甲酸铵：优级纯。 ４．５　氨水（含量为２ ５％，体积分数 ） ：优级纯。 ４．６　标准物质 ：十二烷基三甲基溴化铵 （ｄ ｏ ｄ ｅ ｃｙｌｔ ｒ ｉ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙｌａ ｍｍ ｏ ｎ ｉ ｕ ｍｂ ｒ ｏ ｍ ｉ ｄ ｅ ，ＣＡ Ｓ号：１ １ １ ９  ９ ４  ４ ， Ｃ１ ５Ｈ３ ４Ｂ ｒ Ｎ） 、十二烷基二甲基苄基氯化铵 （ｄ ｏ ｄ ｅ ｃｙｌｄ ｉ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙｌｂ ｅ ｎ ｚｙｌａ ｍｍ ｏ ｎ ｉ ｕ ｍｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｉ ｄ ｅ ，ＣＡ Ｓ号：１ ３ ９ ０ ７  １，Ｃ２ １Ｈ３ ８ＮＣ ｌ） 、十四烷基二甲基苄基氯化铵 （ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ｄ ｅ ｃ ｙｌｄ ｉ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙｌｂ ｅ ｎ ｚｙｌａ ｍｍ ｏ ｎ ｉ ｕ ｍｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｉ ｄ ｅ ，ＣＡ Ｓ号：１ ３ ９  ０ ８  ２ ，Ｃ２ ３Ｈ４ ２Ｃ ｌ Ｎ） 、十 六 烷 基 二 甲 基 苄 基 氯 化 铵 （ｈ ｅ ｘ ａ ｄ ｅ ｃｙｌｄ ｉ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙｌｂ ｅ ｎ ｚｙｌａ ｍｍ ｏ ｎ ｉ ｕ ｍｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｉ ｄ ｅ ，ＣＡ Ｓ号：１ ２ ２  １ ８  ９ ，Ｃ２ ５Ｈ４ ６Ｃ ｌ Ｎ） 、二癸基二甲基氯化铵 （ｄ ｉ ｄ ｏ ｃ ｔｙｌｄ ｉ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙｌａ ｍｍ ｏ ｎ ｉ ｕ ｍｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｉ ｄ ｅ ， ＣＡ Ｓ号：７ １ ７ ３  ５ １  ５ ，Ｃ２ ２Ｈ４ ８Ｃ ｌ Ｎ） ，纯度均≥９ ８％。 ４．７　５％氨水溶液 （体积分数 ） ：取５． ０ｍＬ 氨水（４． ５） ，用水稀释并定容至 １ ０ ０ｍＬ 。 ４．８　９ ０％甲醇溶液 （体积分数 ） ：取９ ０ ０ｍＬ 甲醇，用水稀释并定容至 １Ｌ。 ４．９　８ ０％甲醇溶液 （体积分数 ） ：取８ ０ ０ｍＬ 甲醇，用水稀释并定容至 １Ｌ。 ４．１ ０　２％甲酸甲醇溶液 ：取２ ０ｍＬ甲酸，用甲醇稀释并定容至 １Ｌ。 ４．１ １　５ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ甲酸铵（含０． １％甲酸溶液 ） ：准确称取 ３． １ ５ ３ｇ甲酸铵（４． ４） ，并准确吸取 １ｍＬ甲酸 （４． ２） ，用水稀释并定容至 １Ｌ。 １犛 犖／犜４ ０ ４ ８—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.４．１ ２　乙腈 ５ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ甲酸铵（４ ５＋５ ５，体积比） ：准确量取 ４ ５ｍＬ乙腈和５ ５ｍＬ５ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ甲酸铵 （４． １ １） ，混匀，用作定容液 。 ４．１ ３　标准储备溶液 ：分别准确称取各标准物质 （４． ６）适量（精确至０． ０ ０ ０１ｇ）于１ ０ ０ｍＬ 容量瓶中 ，用甲醇稀释至刻度 ，分别配制成浓度为 １． ０ｍｇ／ｍＬ的标准储备溶液 ０℃～４℃保存。 ４．１ ４　标准工作液 ：从标准储备溶液 （４． １ ３）中准确吸取 １． ０ｍＬ 于１ ０ ０ｍＬ 容量瓶中 ，用甲醇稀释成 １ ０． ０μｇ／ｍＬ的溶液。使用时再根据需要用空白基质液 （４． １ ５）稀释配制适当浓度的标准工作溶液 ，现用 现配。 ４．１ ５　空白基质液 ：选择不含季铵盐且与待测试样同种类的试样作为空白试样 ，按照测定步骤 ７． １和 ７． ２进行得到空白基质液 。 ４．１ ６　固相萃取柱 （Ｓ Ｐ Ｅ） ：ＷＣ Ｘ，３ｍＬ，６ ０ｍｇ或相当者 。使用前依次用 ３ｍＬ甲醇、６ｍＬ水预处理 。 ４．１ ７　微孔滤膜 ：有机系，０． ２ ２μｍ。 ５　仪器与设备 ５．１　液相色谱 质谱／质谱仪：配备电喷雾离子源 （Ｅ Ｓ Ｉ） 。 ５．２　超声波发生器 。 ５．３　天平：感量０． ０ ０ ０１ ｇ和０． ０ １ｇ。 ５．４　高速匀浆机 。 ５．５　高速冷冻离心机 。 ５．６　涡旋混合器 。 ６　试样制备与保存 ６．１　蔬菜水果 、粮谷、肉及动物内脏 取具代表性的试样约 ５ ０ ０ｇ，将其可食用部分切碎后 （不可用水洗 ） ，用高速匀浆机将样品加工成浆 状，混匀，装入洁净的盛样容器内 ，密封并标明标记 。 ６．２　生乳、糖 取具代表性的试样 ５ ０ ０ｇ，混匀，装入洁净的盛样容器内 ，密封并标明标记 。 ６．３　试样保存 肉类及动物内脏试样于 －１ ８℃以下冷冻保存 ，其他试样于 ０℃～４℃下保存。 在制样的操作过程中 ，应防止试样受到污染或发生残留物含量的变化 。 ７　测定步骤 ７．１　提取 ７．１．１　蔬菜水果 、粮谷、糖、肉及动物内脏 称取２ｇ（精确至０． ０ １ｇ）试样于５ ０ｍＬ离心管中 ，加入１ ０ｍＬ９ ０％ 甲醇溶液 （４． ８） ，涡旋混合 ２ｍ ｉ ｎ， 超声１ ０ｍ ｉ ｎ 后，以１ ００ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ（－４℃）冷冻离心 ５ｍ ｉ ｎ，取上清液于另一 ５ ０ｍＬ离心管中 。残渣用 １ ０ｍＬ８ ０％ 甲醇溶液 （４． ９）重复提取一次 ，合并上清液并混匀 ，待净化。 ２犛 犖／犜４ ０ ４ ８—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.７．１．２　生乳 称取２ｇ（精确至０． ０ １ｇ）试样于５ ０ｍＬ离心管中 ，加入１ ０ｍＬ甲醇，涡旋混合 ２ｍ ｉ ｎ，超声１ ０ｍ ｉ ｎ后，以１ ００ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ冷冻离心 ５ｍ ｉ ｎ，取上清液于另一 ５ ０ｍＬ离心管中 。残渣用１ ０ｍＬ８ ０％ 甲醇（４． ９） 溶液重复提取一次 ，以２ ００ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ冷冻离心 ５ｍ ｉ ｎ，合并上清液并混匀 ，待净化。 ７．２　净化 取７． １． １或７． １． ２处理的提取液 ５ｍＬ过预处理的 ＷＣ Ｘ固相萃取柱 （４． １ ６） ，待全部通过后 ，依次用 ３ｍＬ５％ 氨水溶液 （４． ７） 、３ｍＬ甲醇淋洗 ，弃去淋洗液 ，负压抽干 １ ５ｍ ｉ ｎ，再用６ｍＬ２％ 甲酸甲醇溶液 （４． １ ０）洗脱，收集洗脱液至试管中 ，４ ０℃以下氮气吹干 ，用乙腈 ５ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ甲酸铵（４ ５＋５ ５，体积比） （４． １ ２）定容至１ｍＬ，过０． ２ ２μｍ滤膜，滤液供Ｌ Ｃ  ＭＳ／ＭＳ测定。 ７．３　测定 ７．３．１　液相色谱 质谱／质谱条件 色谱和质谱参考条件如下 ： ａ）　色谱柱：Ｓ Ｃ Ｘ：Ｃ１ ８＝１∶４，１ ５ ０ｍｍ×２． ０ｍｍ ，５． ０μｍ或相当者 ； ｂ）柱温：３ ０℃； ｃ）进样量：１ ０μＬ； ｄ）流动相：Ａ：５ ０ｍｍ ｏ ｌ ／Ｌ甲酸铵（含０． １％甲酸溶液 ）Ｂ：乙腈，梯度洗脱程序见表 １； ｅ）流速：０． ３ ０ｍＬ ／ｍ ｉ ｎ； ｆ）离子源：电喷雾离子源 （Ｅ Ｓ Ｉ） ； ｇ）扫描方式 ：正离子扫描 ； ｈ）监测方式 ：多反应监测 （ＭＲＭ） ； ｉ）其他质谱参数参见附录 Ａ。 表１　流动相及梯度洗脱条件 时间 ｍ ｉ ｎ流速 ｍＬ／ｍ ｉ ｎ流动相Ａ ％流动相Ｂ ％ ０． ０ ０． ３ ０ ４ ５ ５ ５ ３． ０ ０． ３ ０ ４ ５ ５ ５ １ ０． ０ ０． ３ ０ １ ０ ９ ０ １ ３． ０ ０． ３