书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜４ ０ ３ ９—２ ０ １ ４ 出口食品中萘乙酰胺 、吡草醚、乙虫腈、氟虫腈残留量的测定方法液相色谱 质谱／质谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 １ 狀 犪狆犺 狋 犺 犪 犾 犲 狀 犲 犪 犮 犲 狋 犪 犿 犻 犱 犲 ，狆 狔狉 犪 犳 犾 狌 犳 犲 狀  犲 狋 犺 狔犾，犲 狋 犺 犻狆狉 狅 犾 犲，犳 犻狆狉 狅 狀 犻 犾狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋—犔 犆  犕 犛／犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 ２ ０ １ ４１ １１ ９发布 ２ ０ １ ５０ ５０ １实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。本标准起草单位 ：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局 。本标准主要起草人 ：荣会、牟峻、康明芹、胡婷婷、张琦、周晓、马书民、王岸英。 Ⅰ犛 犖／犜４ ０ ３ ９—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口食品中萘乙酰胺 、吡草醚、乙虫腈、氟虫腈残留量的测定方法液相色谱 质谱／质谱法 １　适用范围 本标准规定了出口食品中萘乙酰胺 、吡草醚、乙虫腈、氟虫腈残留量的液相色谱 质谱／质谱检测 方法。 本标准适用于苹果 、菠菜、圆葱中萘乙酰胺 、吡草醚、乙虫腈、氟虫腈残留量的测定和确证 。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本 （包括所有的修改单 ）适用于本文件 。 Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　方法提要 试样中残留的萘乙酰胺 、吡草醚、乙虫腈、氟虫腈采用乙腈提取 ，ＨＬ Ｂ固相萃取柱净化 ，液相色谱 质谱／质谱仪测定和确证 ，外标法定量 。 ４　试剂和材料 除另有规定外 ，所用试剂均为分析纯 ，水为Ｇ Ｂ／Ｔ６ ６ ８ ２规定的一级水 。 ４．１　乙腈：ＨＰ Ｌ Ｃ级。 ４．２　甲酸：ＨＰ Ｌ Ｃ级。 ４．３　氯化钠。 ４．４　溶解液：乙腈水（２＋８，体积比） 。 ４．５　定容液：乙腈水（１％甲酸） （２＋８体积比） 。 ４．６　标准品：标准品详细信息见表 Ａ． １。 ４．７　标准储备溶液 ：准确称取适量的萘乙酰胺 、吡草醚、乙虫腈、氟虫腈标准物质 ，用乙腈将其配制成 １ ０ ０μｇ／ｍＬ标准储备液 ，避光，于０℃～４℃保存，保质期为 １ ２个月。 ４．８　标准中间液 ：用乙腈稀释标准储备溶液至 １ ０μｇ／ｍＬ，避光，于０℃～４℃保存，保质期为 ６个月。 ４．９　标准工作溶液 ：根据检测要求临用前用空白样品提取液将标准中间液稀释成相应浓度的标准工作 溶液。现用现配 。 ４．１ ０　ＨＬ Ｂ固相萃取柱 （６ｍＬ／５ ０ ０ｍｇ） ：使用前先用 ５ｍＬ乙腈、再用５ｍＬ水依次预处理 。 ４．１ １　微孔滤膜 Ｔ Ｆ：０． ２ ２μｍ。 ４．１ ２　硅藻土：１ ０ ０目～２ ０ ０目。 １犛 犖／犜４ ０ ３ ９—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.５　仪器和设备 ５．１　液相色谱串联质谱仪 ，配电喷雾离子源 （Ｅ Ｓ Ｉ） 。 ５．２　组织捣碎机 。 ５．３　旋转蒸发器 。 ５．４　高速均质器 ：１ ８０ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ。 ５．５　固相萃取仪 （Ｓ Ｐ Ｅ） 。 ５．６　离心机：１ ００ ０ ０ｒ ／ｍ ｉ ｎ。 ５．７　涡旋混合器 。 ６　试样制备与保存 ６．１　试样制备 取有代表性样品 ５ ０ ０ｇ，将其切碎后 ，用组织捣碎机将样品加工成浆状 ，混匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记 。 ６．２　试样保存 试样于０℃～４℃保存，在制样的操作过程中 ，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 。 ７　测定步骤 ７．１　提取 称取２ ０ｇ（精确至０． ０ １ｇ）均匀试样置于 １ ０ ０ｍＬ 离心管中 ，加入１ ０ｇ氯化钠、５ｇ硅藻土和 １ ０ｍＬ水，用涡旋混合器初步混匀 。然后加入 ５ ０ｍＬ乙腈，于高速均质器上匀浆 ２ｍ ｉ ｎ。将离心管以 ５０ ０ ０ｒ／ ｍ ｉ ｎ离心５ｍ ｉ ｎ，吸取上层提取液于 ２ ５ ０ｍＬ 心形瓶中 。重复上述操作提取两次 ，合并提取液于 ２ ５ ０ｍＬ心形瓶中 。于４ ０℃下减压蒸干 ，准确加入乙腈 ∶水（２＋８，体积比）溶解液１ ０． ０ｍＬ ，充分溶解残渣 ，供固相萃取仪净化 。 ７．２　净化 取５． ０ｍＬ 待净化液于已活化的 ＨＬ Ｂ固相萃取柱中 ，自然滴下 ，弃去流出液 。用１ ０ｍＬ水淋洗，自然滴下，弃去。再用５ｍＬ乙腈∶水（２＋８，体积比）溶解液淋洗 ，自然滴下 ，弃去。最后用１ ５ｍＬ乙腈洗脱（保持１ｍＬ／ｍ ｉ ｎ） ，收集流出液于 １ ０ ０ｍＬ 心形瓶中 ，于４ ０℃下旋转浓缩至干 ，准确加入乙腈 ∶水 （１％甲酸） （２＋８，体积比）２． ０ｍＬ 定容液充分溶解残渣 ，过０． ２ ２μｍ有机滤膜后供液相色谱 质谱／质谱 （Ｌ Ｃ  ＭＳ／ＭＳ）测定。 ７．３　测定 ７．３．１　液相色谱条件 液相色谱参考条件如下 ： ａ）　色谱柱：Ｃ１ ８柱，３． ５μｍ，１ ５ ０ｍｍ×２． １ｍｍ （内径） ，或相当者 ； ｂ）　流动相：乙腈 ０． １％甲酸溶液 ，梯度洗脱 （见表１） ； ｃ）　流速：２ ０ ０μＬ／ｍ ｉ ｎ； ２犛 犖／犜４ ０ ３ ９—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.ｄ）　柱温：室温； ｅ）　进样量：１ ０μＬ。 表１　液相色谱的梯度洗脱条件 时间／ｍ ｉ ｎ 流速／（μＬ／ｍ ｉ ｎ） ０． １％甲酸溶液 ／％ 乙腈／％ ０． ０ ０ ２ ０ ０ ７ ０ ３ ０ ５． ０ ０ ２ ０ ０ ３ ０ ６ ０ ６． ０ ０ ２ ０ ０ ３ ０ ６ ０ １ ５． ０ ０ ２ ０ ０ ２ ０ ８ ０ ２ ０． ０ ０ ２ ０ ０ ０ １ ０ ０ ２ ０． １ ０ ２ ０ ０ ７ ０ ３ ０ ３ ０． ０ ０ ２ ０ ０ ７ ０ ３ ０ ７．３．２　质谱条件 质谱参考条件如下 ： ａ）　离子化模式 ：电喷雾电离正离子模式 （Ｅ Ｓ Ｉ ＋）与负离子模式 （Ｅ Ｓ Ｉ －） ； ｂ）　检测方式 ：多反应监测 （ＭＲＭ） ； ｃ）　分辨率：单位质量分辨率 。其他参考质谱条件参见附录 Ｂ。 ７．３．３　液相色谱串联质谱测定 ７．３．３．１　一般要求 根据样液中被测化合物的含量情况 ，选定峰面积相近的标准工作溶液 ，对标准工作液和样液等体积参插进样 ，测定标准工作溶液和样液中被测化合物的响应值均应在仪器检测的线性范围内 。 ７．３．３．２　定性测定 在相同实验条件下 ，样液中被测化合物的保留时间 ，与标准溶液的保留时间偏差在 ±２． ５％之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表 ２规定的范围 ，则可判定为样品中存在对应的被测物 。 表２　定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ／％ ＞５ ０ ＞２ ０～５ ０ ＞１ ０～２ ０ ≤１ ０ 允许的相对偏差 ／％ ±２ ０ ±２ ５ ±３ ０ ±５ ０ ７．３．３．３　定量测定 在仪器最佳工作条件下 ，对标准工作溶液进样 。用标准工作曲线按外标法定量 ，样品溶液中被测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内 。在上述色谱条件下 ４种吡唑类药物的参考保留时间 ：萘乙酰胺７． ４ｍ ｉ ｎ 、乙虫腈１ １． ６ｍ ｉ ｎ 、氟虫腈１ ４． ５ｍ ｉ ｎ 、吡草醚１ ５． １ｍ ｉ ｎ ，４种吡唑类标准溶液的多反应监测 （ＭＲＭ）色谱图参见附录 Ｃ。４种吡唑类原药的分子式 、分子量、结构式见附录 Ａ。 ３犛 犖／犜４ ０ ３ ９—２ ０ １ ４ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.７．４　空白实验 除不加试样外 ，均按上述测定步骤进行 。 ８　结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式 （１）分别计算试样中被测化合物的含量 ： 犡犻＝犃犻×犮ｓ犻×犞犃ｓ犻×犿…………………………（ １） 　　式中： 犡犻— — —试样中每种被测化合物的含量 ，单位为毫克每千克 （ｍｇ／ｋｇ） ； 犃犻— — —样液中每种被测化合物的峰面积 ； 犮ｓ犻— — —标准工作液中每种化合物的浓度 ，单位为微克每毫升 （μｇ／ｍＬ） ； 犞— — —样液最终定容体积 ，单位为毫升 （ｍＬ） ； 犃ｓ犻— — —标准工作液中每种化合物的峰面积 ； 犿— — —最终样液所代表的试样量 ，单位为克 （ｇ） 。 ９　方法测定低限 、回收率 ９．１　测定低限 本方法的测定低限均为 ０． ０ １ｍｇ／ｋｇ。 ９．２　回收率 分别在苹果 、菠菜、圆葱中添加萘乙酰胺 、吡草醚、乙虫腈、氟虫腈药物 ，添加浓度及其回收率范围的实验数据参见表 ３。 表３　三种食品中萘乙酰胺 、吡草醚、乙虫腈、氟虫腈添加回收率范围 药物名称添加浓度 ／ （ｍｇ／ｋｇ）回收率／％ 苹果 菠菜 圆葱