ICS 67.200.10 LS CCS X 04 中华人民共和国粮食行业标准 LS/T 6151—2024 粮油检验 苦否仁苷含量的测定 高效液相色谱法 Inspection of grain and oilsDetermination of amygdalin 2024-10-01发布 2025-04-01实施 发布 国家粮食和物资储备局 中国标准出版社 出版 LS/T 6151—2024 前言 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由国家粮食和物资储备局提出。 本文件由全国粮油标准化技术委员会（SAC/TC 270)归口。 林业科学研究院林业研究所、榆林沙漠王生物科技有限公司、山东龙大粮油有限公司、陕西省粮食质量 安全中心、中国天津粮油批发交易市场、陕西科仪阳光检测技术服务有限公司、山东香驰粮油有限公 司、黑龙江谱尼测试科技有限公司。 本文件主要起草人：薛雅琳、朱琳、袁强、王伟、张至、张蕊、高洪良、段章群、刘萍、李荃、安铁鹏 郑海杰、赫志强、郭咪咪。 I LS/T 6151—2024 粮油检验苦杏仁苷含量的测定 高效液相色谱法 1范围 本文件描述了高效液相色谱法测定苦杏仁苷含量的扦样、试样制备、操作步骤、结果表示和精 密度。 本文件适用于植物油料、饼粕及植物油中苦否仁苷含量的测定。 本方法在油料中苦杏仁苷的检出限分别为 40 mg/kg,定量限 80 mg/kg;在植物油中苦杏仁苷的检 出限 80 mg/kg,定量限 160 mg/kg;在饼粕中苦杏仁苷的检出限为 2mg/kg,定量限 4mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 5491粮食、油料检验扦样、分样法 GB/T 5524动植物油脂扦样 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 15687动植物油脂试样的制备 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 样品经甲醇提取后,采用高效液相色谱分离,在波长 210 nm条件下测定苦杏仁苷含量,外标法 定量。 5 试剂 除非另有说明,所用试剂均为分析纯（AR）,水应符合 GB/T 6682 中一级水的规定。 5.1甲醇:色谱纯。 5.2甲醇-水混合液（20十80,体积比）:取 20mL甲醇加入80mL水,混匀。 5.3石油醚:沸程30℃～60℃。 5.4苦杏仁苷标准品:纯度≥98%。 5.5苦杏仁苷标准储备溶液（500 μg/mL）:准确称取 25.0mg（精确至 0.0001g)苦杏仁苷标准品（5.4） 置于 50mL容量瓶中,用甲醇（5.1)溶解并定容,摇匀,保存于 4℃,根据每次用量分装备用,有效期 1个月。 1 LS/T 6151—2024 99 液（5.5）于10 mL 容量瓶中,用甲醇-水混合液（5.2)定容,制备成25 μg/mL、50μg/mL、100 μg/mL、 200 μg/mL 和 300 μg/mL标准工作液;再从 50 μg/mL标准工作液中移取 1.0 mL于 10mL 容量瓶中, 用甲醇-水混合液（5.2)定容,制备成 5 μg/mL标准工作液；从 5 μg/mL标准工作液移取 2.0 mL于 10 mL容量瓶中,用甲醇-水混合液（5.2)定容,制备成1μg/mL标准工作液,摇匀,现配现用。 6仪器和设备 6.1高效液相色谱仪:配紫外检测器或二极管阵列检测器。 6.2粉碎机 6.3样品筛:20目筛网,孔径为0.9mmc 6.4圆底离心管:带螺盖,50mL。 6.5 超声波发生器。 6.6 涡旋振荡器。 6.7 分析天平：精度0.0001g。 6.8离心机:转速可达4000 r/min 6.9 离心管:5mL、10 mL。 6.10微孔滤头:孔径0.22 μm,附带有机相滤膜。 6.11定性滤纸:直径12.5 cm,中速。 7扦样 7.1油料、饼粕扦样、分样按 GB/T 5491 执行。 7.2植物油扦样按 GB/T 5524 执行。 8试样制备 8.1油料、饼样品：用粉碎机（6.2)将样品粉碎,使其全部通过样品筛（6.3）,混匀,装入洁净容器内作 为试样,密封备用。 吸收水分。 8.2植物油样品:按 GB/T 15687执行。 9操作步骤 9.1油料样品:准确称取 0.2g～0.4g(精确至 0.0001g)粉碎的样品于 50mL圆底离心管（6.4)中,用 量筒加人 30 mL石油醚（5.3），盖塞，,于超声波发生器（6.5)中超声 10 min 后,4000r/min 离心10min， 弃去上层石油醚液,敞口置于通风橱中过夜挥干溶剂后,用移液管准确加人 20.0mL甲醇（5.1）,将离 心管置于超声波发生器（6.5)中,底部样品重悬后,开始计时30min（期间每隔10min水平振荡1次） 后，取出离心管，上下混匀,静置冷却至室温后，用定性滤纸（6.11)将甲醇提取液滤于另一支离心管 (6.4)中,将过滤液混匀,准确吸取 1.0 mL滤液于 10 mL离心管（6.9)中,再准确加入至少 1.0mL甲 （09)（)（) 瓶中,待上机分析。 2 LS/T 6151—2024 注：每次超声时,超声波发生器(6.5)中的液位需高于离心管内液位的高度。 9.2饼样品:准确称取 0.1g～0.4g（精确至 0.0001g)粉碎的样品于 50mL离心管（6.4)中,用移液 管准确加人20.0mL甲醇（5.1），盖塞,按8.1“将离心管置于超声波发生器（6.5中，底部样品重悬 后，待上机分析”操作。 （6'9)0（000)06 甲醇（5.1）,涡旋 1min 后,放人超声波发生器（6.5)中超声 20 min（隔 10 min上下振荡 1次）,4 000 r/min 离心10 min 后,将提取上清液转移至 5 mL 容量瓶中,再在样品中加入 1 mL 甲醇（5.1）,猛烈振摇 30 s 后,放入超声波发生器（6.5)中超声 10 min,4 000 r/min 离心10 min,将上清液并人之前的提取液中,再 加入 1mL甲醇（5.1）,猛烈振摇 30 s后,再重复提取 1次。将 3次甲醇提取液合并于 5mL容量瓶中, 并定容至刻线后,混匀。准确吸取提取液 1.0 mL于 5 mL离心管（6.9)中,再准确加入 1.0 mL甲醇-水 混合液（5.2)稀释混匀（如出现乳浊，属正常现象）,用微孔滤头（6.10)过滤至澄清后,转移至进样瓶中， 待上机分析。 9.4色谱参考条件 色谱参考条件如下。 色谱柱:C18 柱(250 mmX4.6 mm,5 μm)或性能相当者。 a） b） 流动相：甲醇-水混合液（5.2）。 流速:1.0 mL/min c） d）柱温:30℃。 检测器：检测波长210nm。 e） 进样量:10 μL。 f） 苦杏仁苷标准色谱图见附录 A。 9.5测定 9.5.1标准曲线 析,记录峰面积,以苦杏仁苷峰面积为纵坐标,以苦杏仁苷质量浓度为横坐标,绘制标准曲线。 9.5.2样品测定 准曲线比较,计算出样品测试溶液中苦杏仁苷的质量浓度。 如果样品测试溶液的峰面积超出标准曲线范围,应适当稀释滤液,重新进行测定。 9.5.3空白试验 除不加试样外,根据样品类型采用相同的操作步骤做空白试验。 10结果表示 试样中苦杏仁苷含量(X)>0.1%时,以质量分数表示,按式(1)计算： X 100 ....(1) m X 1 000 000 3 LS/T 6151—2024 式中: X 样品中苦杏仁苷含量,%; 从标准工作曲线得到的待测液中苦杏仁苷的质量浓度,单位为微克每毫升（μg/mL); 从标准工作曲线得到的空白液中苦杏仁苷的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); 0o V 试样提取液的体积,单位为毫升(mL); N 滤液(提取液)的稀释倍数; m 试样质量,单位为克（g); 单位换算常数。 100、1 000 000 计算结果保留小数点后两位。 试样中苦杏仁苷含量(X)<0.1% 时,以mg/kg表示,按式(2)计算： ..(2) mX 1000 式中: X 样品中苦杏仁苷含量,单位为毫克每千克（mg/kg); 从标准工作曲线得到的待测液中苦杏仁苷的质量浓度,单位为微克每毫升（μg/mL）; 00 从标准工作曲线得到的空白液中苦杏仁苷的质量浓度,单位为微克每毫升（μg/mL); V 试样提取液的体积,单位为毫升(mL); N 滤液(提取液)的稀释倍数; 试样质量,单位为克（g); m 单位换算常数。 1 000 计算结果保留小数点后一位。 11精密度 11.1 重复性 在重复条件下获得的两个独立测试结果的绝对差值大于重复性限（r)的情况不超过5%。苦杏仁 苷含量的重复性限(r)见附录B。 11.2 再现性 在再现性条件下获得的两个独立测试结果的绝对差值大于再现性限(R)的情况不超过5%。苦杏 仁苷含量的再现性限(R)见附录B。 4 LS/T 6151—2024 附录A (资料性) 苦杏仁苷标准色谱图 苦杏仁苷标准色谱图见图A.1。 mAU 40 30 J 20 苦杏仁苷 10 J 0 t/min 10 15 5 20 25 图 A.1 苦杏仁苷标准色谱图 5