DB22 吉林省地方标准 DB22/T 414-2005 高效液相色谱法测定六种水溶性维生素 Determination for six sorts of vitamin by HPLC 2005-12-01实施 2005-11-01发布 发布 吉林省技术监督局 前言 本标准由吉林省卫生厅提出 本标准由吉林省技术质量监督局批准 本标准起草单位：吉林省卫生监测检验中心 本标准主要起草人杨明远战英 段世敏 丁政 本标准于2005年 11月首次发布。 高效液相色谱法测定六种水溶性维生素 1．范围 本标准规定了高效液相色谱法测定水溶性维生素的原理，试剂，仪器设备，分析步 骤，结果。 本标准适用于高效液相色谱法测定维生素B1、维生素B2、维生素 B6、烟酸（维生素 Bs）、 烟酰胺（Vpp）维生素C。 2．原理 样品中的水溶性维生素经溶解、稀释、过滤，使用具有紫外检测器的高效液相色谱 仪测定，根据色谱峰的保留时间定性，峰面积或峰高定量。 3．试剂 实验用水为去离子 3.1甲醇（色谱纯） 3.2甲酸（分析纯） 3.3甲酸铵（分析纯） 3.4高效液相色谱流动相：0.1000mol/L甲酸铵-甲酸（PH4~5）+甲醇（75+25） 3.5维生素B、维生素B2、维生素 B6、烟酸（维生素 Bs）、烟酰胺（Vpp）维生素C标准品。 4．仪器设备 4.1高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV） 4.2超声波发生器 4.3酸度计 4.4磁力搅拌器 4.5离心机 5．分析步骤 5.1准确称取样品1.0g左石加1mL0.0001mol/L盐酸溶解，用水定容至25mL。超声波提取 5min，离心取上清液过0.45um滤膜后分析。 5.2测定 5.2.1液相色谱参考条件 5.2.1.1紫外检测器检测波长254nm； 5.2.1.2色谱柱：PC8--10/S25.4（250mmX4.0mm,粒径5um) 5.2.1.3柱温30℃ 5.2.1.4 流速 1.0mL/min 5.2.2色谱分析 取10uL标准溶液及样品提取液进高效液相色谱仪，以保留时间定性，吸收峰高或峰面 积与标准比较定量。 5.2.3色谱图：见图1 6计算结果 6.1计算按下式： h/hs X CX 25 X= m 式中：x一样品中维生素的含革，mg/g: h-样品的吸收峰高或峰面积; hs--标准的吸收峰高或峰面积; c-维生素标准溶液的浓度，mg/ml;