DB22 吉國林國省國地國方 标准 DB22/T235-2000 酶联一步法快速测定血清谷丙转氨酶 The Method of Determing Serum ALT by ELISA 2000-12-30 发布 2001-01-01实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T235-2000 前 言 血清中谷丙转氨酶的测定是诊断肝脏疾病的重要指标，目前国内测定（ALT) 的主要方法有速率法、丙酮酸氧化酶法和赖氏比色法。前者需要引进上百万元的全 自动生化分析仪和昂贵的试剂，后者操作烦琐、费时、费力，不能满足基层单位及 预防性体检的需要。本标准应用酶联一步法快速诊断试剂盒，可在数十分钟内测定 上百份样品，无需特殊仪器，用肉眼和半自动生化分析仪便可观察结果，有利于基 层医疗、防疫卫生保健机构、血站等实施应用。 本标准由吉林省卫生厅提出。 本标准由吉林省卫生防疫站负责起草，长春汇力生物制品有限公司协助起草。 本标准主要起草人：李梅、刘冷、孙文礼、杨红、董礼 吉林省地方标准 酶联一步法快速测定血清谷丙转氨酶 DB 22/T235-2000 1 范围 本标准规定了酶联一步法快速诊断试剂盒测定谷丙转氨酶的方法。 本标准适合于基层医疗、防疫卫生保健机构、血站等对血清谷丙转氨酶的初筛。 2引用标准 下列标准包含的条文，通过在本标准中引用构成本标准的条文。在标准出版时所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 体外诊断试剂生产企业验收标准（暂行）卫生部 1994年 全国临床检验操作规程 卫生部医政司1991年 3试剂盒的制备 3.1设计原理 ALT 根据化学反应方程式L-一丙氨酸+α酮戊二酸一 谷氨酸+丙酮酸 GLDH H2O+谷氨酸+NAD- →NADH+α酮戊二酸+NH3+H+ DLAS NADH+氮唑兰 ·紫色的甲腾 其颜色的深浅与ALT活性成正比。 注：NAD：氧化型辅酶 I NADH：还原型辅酶I GLDH：谷氨酸脱氢酶 DIAS：心肌黄酶 3.2工作试剂的成份及制法 HCL-Tris 缓冲液 PH7.4 0.1mol/L α-酮戊二酸 0.8mmol/L GLDH 2000u/L 心肌黄酶 5000u/L 保护剂（PEA）10g/L 除干扰剂5g/L 氮唑兰 0.002g/L NAD 5mmol/L 将上述成份除HCI-Tris缓冲液外，按比例在分析天平上称取，研磨制成冻干粉。临用时用 缓冲液制成工作试剂，工作试剂在2～8℃条件下可稳定24h。 3.3ALT复合酶粉2.5ml×10、10mlX×5两种规格，配足量的缓冲液2瓶，按其规格溶解使用 ALT标准溶液50U/L、100U/L、200U/L各2支、1：10浓缩终止液1瓶，用时用蒸馏水稀释， 试剂盒在2～8℃条件下存放，有效期为1年。 4测定方法和步骤 可用于各型半自动生化分析仪和分光光度计测定 吉林省质量技术监督局2000-12-30:批准 2001-01-01 实施