(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210277726.4 (22)申请日 2022.03.21 (71)申请人 锘海生物科 学仪器 （上海） 有限公司 地址 201600 上海市松江区九亭镇 顺庆路 650号1幢102、 202室 (72)发明人 殷明　朱宏　李严　顾振红　姜婷　 (74)专利代理 机构 上海创开专利代理事务所 (普通合伙) 31374 专利代理师 吴海燕 (51)Int.Cl. G01N 1/28(2006.01) G01N 21/01(2006.01) G01N 21/84(2006.01) (54)发明名称 基于水性的生物组织透明化试剂盒及组织 透明化方法 (57)摘要 本申请涉及组织透明化技术领域， 尤其是涉 及一种基于水性的生物组织透明化试剂盒及组 织透明化方法， 基于水性的生物组织透明化试剂 盒包括： 试剂一， 试剂一包括尿素、 四乙二胺以及 Triton X‑100； 试剂二， 试剂二包括N ‑正丁基二 乙醇胺以及Triton  X‑100； 试剂三， 试剂三包括 安替比林、 烟酰胺以及N ‑正丁基二乙醇胺。 经过 该试剂盒处理后， 可 以使组织快速透明， 而且透 明化后的组织利用光片显微镜可以做完整的三 维成像。 权利要求书2页 说明书9页 附图6页 CN 114636605 A 2022.06.17 CN 114636605 A 1.一种基于水性的生物组织透明化试剂盒， 其特 征在于， 包括： 试剂一， 所述试剂一包括尿素、 四乙二胺以及Trito n X‑100； 试剂二， 所述试剂二包括 N‑正丁基二乙醇胺以及Trito n X‑100； 试剂三， 所述试剂三包括 安替比林、 烟酰胺以及N ‑正丁基二乙醇胺。 2.根据权利要求1所述的基于水性的生物组织透 明化试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂一 所包括的尿素、 四乙二胺以及Triton  X‑100的质量 ‑体积浓度分别为25 ‑35、 10‑30以及1‑5， 且优选为30、 30以及5。 3.根据权利要求1所述的基于水性的生物组织透 明化试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂二 所包括的N ‑正丁基二乙醇胺以及Triton  X‑100的质量 ‑体积浓度分别为10 ‑20以及10 ‑30， 且优选为15以及15 。 4.根据权利要求1所述的基于水性的生物组织透 明化试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂三 所包括的安替比林、 烟酰胺以及N ‑正丁基二乙醇胺的质量 ‑体积浓度分别为35 ‑50、 20‑40以 及1‑5， 且优选为50、 20以及1。 5.一种组织透明化方法， 其特征在于， 应用于权利要求1至9中任一项所述的基于水性 的生物组织透明化试剂盒； 所述组织透明化方法包括如下步骤： 步骤100、 样本固定； 步骤200、 样本透明化： 将样品依次放入所述试剂一、 所述试剂二以及所述试剂三中分 别进行缓和震荡 预设时间。 6.根据权利要求5所述的组织透明化方法， 其特 征在于， 所述 步骤200包括如下步骤： 步骤201、 样本经过1xPBS洗涤后， 放入所述试剂一中进行孵育， 在预设温度下缓和震 荡； 步骤202、 将样本转移至所述试剂一中， 在预设温度下缓和振荡， 且每隔预设时间更换 一次所述试剂一。 7.根据权利要求5所述的组织透明化方法， 其特 征在于， 所述 步骤200包括如下步骤： 步骤203、 将样本转移至1xPBS中， 室温下缓和振荡洗涤； 步骤204、 样本经 过洗涤后， 放入所述试剂二中进行孵 育， 在预设温度下， 缓和震荡； 步骤205、 将样本转移至所述试剂二中， 在预设温度下， 缓和振荡， 且按照 每隔预设时间 更换一次所述试剂二。 8.根据权利要求5所述的组织透明化方法， 其特 征在于， 所述 步骤200包括如下步骤： 步骤206、 将样本转移至1xPBS中， 室温 缓和振荡洗涤； 步骤207、 样本 洗涤后， 放入所述试剂三中进行孵 育， 在预设温度下缓和震荡； 步骤208、 样本经过孵育后， 将样本转移至所述试剂三中， 在预设温度下， 缓和振荡， 匹 配直至样本 透明。 9.根据权利要求5所述的组织透明化方法， 其特 征在于， 所述 步骤100包括如下步骤： 步骤101、 灌注、 取材： 麻醉小鼠后， 先用ice  cold 1xPBS灌注心脏， 然后用ice  cold  4％PFA灌流小鼠， 直到血 液灌流干净； 步骤102、 PFA后固定： 样本放在4％PFA中， 而后在预设温度下， 进行缓和震荡 过夜。 10.根据权利要求5所述的组织透明化方法， 其特征在于， 所述组织透明化方法还包括 如下步骤：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114636605 A 2步骤300、 样本成像： 样本折射率匹配后， 低熔点琼脂糖和所述试剂三充分混合并放至 离心管中， 直到琼脂糖粉末分布在溶 液中； 加热离心管： 将离心管放置在微波炉内加热 预设时间， 重复几次， 直至溶 液沸腾； 将凝胶溶 液和样本移入容器中， 移入的凝胶溶 液用量至少达 到样本厚度； 将装有样本的容器移至预设温度下的冰箱中， 直到 凝固； 从容器中取 出样品， 并切去 多余的凝胶； 使用光片显微镜对样本进行完整三维成像。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114636605 A 3