(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211037105.5 (22)申请日 2022.08.26 (71)申请人 浙江工业大 学 地址 310014 浙江省杭州市拱 墅区潮王路 18号 (72)发明人 章华伟　刘圆圆　邵益兰　蔡悦　 王鸿　 (74)专利代理 机构 杭州天正专利事务所有限公 司 33201 专利代理师 李世玉 (51)Int.Cl. C07K 11/02(2006.01) C12P 21/04(2006.01) C07K 1/36(2006.01) C07K 1/34(2006.01)C07K 1/20(2006.01) C07K 1/14(2006.01) A61K 38/15(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/77(2006.01) (54)发明名称 一种环缩肽类化 合物及其制备方法与应用 (57)摘要 本发明公开了一种环缩肽类化合物及其制 备方法与应用， 本发明首次从尖 胞镰刀菌发酵产 物中分离出来一种高产量的环缩肽类化合物 (I)， 产率为10mg/L。 本发明环缩肽类化合物采用 微生物液态发酵生产， 操作工艺简单， 成本低， 对 环境无污染。 本发明环缩肽类化合物(I)具有抗 肿瘤活性， 后期可 以进行结构修饰， 制备其衍生 物来大幅度提高其活性， 从而制备抗肿瘤药物。 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 CN 115505033 A 2022.12.23 CN 115505033 A 1.一种式(I)所示环缩肽类化 合物： 2.一种权利要求1所述环缩肽类化合物的制备方法， 其特征在于， 所述方法按如下步骤 进行： (1)菌株发酵： 将尖孢镰刀菌(Fusarium  oxysporum)CGMCC  No.17763接至GPY培养基， 在室温下避光静置发酵10 ‑30天， 获得发酵混合物； 所述GPY培养基组成： 葡萄糖10g/L， 蛋白 胨5g/L， 酵母提取物 2g/L， L‑色氨酸2g/L， 海盐2g/L， 溶剂为水， pH  7.5； (2)化合物提取： 将步骤(1)制备的发酵混合物离心， 取沉淀加入甲醇a后进行超声辅助 萃取， 有机层减压浓缩至无液体流出， 得到粗提物浸膏； 将全部粗提物浸膏用甲醇b溶解后 用0.22 μm有机滤头进行过滤， 滤液选用高效液相色谱分析型色谱柱进行等度洗脱， 流动相 为体积比70: 30的乙腈与水， 收集第16min的流出液， 去 溶剂， 干燥， 获得所述式(I)所示环缩 肽类化合物。 3.如权利要求2所述环缩肽类化合物 的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)所述尖孢镰刀 菌CGMCC No.17763发酵前先活化， 种子扩大培养， 再将种子液以50mL/L的接种量接种至GPY 培养基； 所述活化和种子扩大培养按如下步骤进行： ①活化培养： 将尖孢镰刀菌CGMCC   No.17763接入PDA斜面培养基， 28℃培养箱培养3 ‑4天， 活化菌种； PDA斜面培养基终浓度组 成为： 葡萄糖20g/L， 马铃薯200g/L， 琼脂15 ‑18g/L， 溶剂为蒸馏水， pH自然； ②种子培养： 从 步骤①活化菌落中挑取一接种环菌体接种至PDB种子培养基， 在200rpm、 28℃条件 下摇床培 养3天， 获得种 子液； PDB种 子培养基终浓度组成为： 马铃薯200g/L， 葡萄糖20g/L， 溶剂为蒸 馏水， pH自然。 4.如权利要求2所述环缩肽类化合物 的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)所述超声条件 为： 30‑50kHz超声15‑20min。 5.如权利要求2所述环缩肽类化合物 的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)高效液相色谱 条件为： 液相仪器： UV ‑VIS， 检测器： 岛津SPD ‑16； 高效液相输液泵： 岛津LC ‑16P； 色谱条件： 分析型色谱柱， C18色谱柱4.6 ×250mm， 流速1.0mL/mi n， 柱温40℃， 检测波长209nm。 6.一种权利要求1所述环缩肽类化 合物在制备抑制肿瘤 细胞活性药物中的应用。 7.如权利 要求6所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤细胞为人乳腺癌耐药细胞株MCF ‑7/ ADR。 8.一种权利要求1所述环缩肽类化 合物在制备抗肿瘤药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115505033 A 2一种环缩肽类化合物及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明涉及 一种抗耐药肿瘤先导物， 特别涉及一种环缩肽类化合物及 其制备方法 与应用。 背景技术 [0002]恶性肿瘤严重威胁着人类健康， 已成为人类死亡的第二位致命性疾病， 抗肿瘤药 物的研究仍然是医学发展的一个主要领域。 海洋环境中有数千种生物物种， 它们 是新型功 能蛋白和多肽的一个有价 值的来源， 已被 应用于许多疾病的治疗， 包括癌症。 [0003]植物内生真菌被认为是天然产物最丰富的来源之一， 它们在新药的开发中起着潜 在的重要作用， 滨海植物因其生存环境特殊， 其内生真菌可能存在与陆地以及海洋植物来 源的内生真菌不同的代谢机制。 镰刀菌作为三大丝状真菌之一， 该菌中普遍存在有聚酮合 成酶、 非核糖体肽合 成酶和萜烯 合成酶， 能产生结构新颖多样的次级代谢产 物(生物碱、 肽、 酰胺、 萜类、 醌和吡喃酮等)， 而这些次生代谢物都普遍具有潜在药理活性， 比如抗菌、 抗肿 瘤、 抗虐、 抗氧化以及酶抑制等。 发明内容 [0004]本发明目的是提供一种环缩肽类化合物及 其制备方法与应用， 所述环缩肽类化合 物采用生物方法合成， 对环境无污染， 解决了所述化合物大规模生产的问题， 且此化合物具 有一定的抗肿瘤活性， 对活性药物先导 化合物的发现起到促进作用。 [0005]本发明采用的技 术方案是： [0006]本发明提供一种式(I)所示环缩肽类化 合物， 具有如下化学 结构： [0007] [0008]本发明提供一种式(I)所示环缩肽类化合物的制备方法， 所述方法按如下步骤进 行： [0009](1)菌株发酵： 将尖孢镰刀菌(Fusarium  oxysporum)CGMCC  No.17763接至GPY  培 养基， 在室温(28℃)下避光静置发酵 10‑30天(优选20天)， 获得 发酵混合物； 所述GPY培养基 组成： 葡萄糖10g/L， 蛋白胨5g/L， 酵母提取物2g/L， L ‑色氨酸2 g/L， 海盐2g/L， 溶剂为水， pH   7.5； [0010](2)化合物提取： 将步骤(1)制备的发酵混合物离心(优选20℃、 4000rpm离心说　明　书 1/6 页 3 CN 115505033 A 3