(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211189598.4 (22)申请日 2022.09.28 (71)申请人 中国水产科 学研究院黄海水产研究 所 地址 266071 山东省青岛市 市南区南京路 106号 (72)发明人 邢丽红　孙伟红　谭志军　李兆新　 冷凯良　苗钧魁　刘小芳　孙晓杰　 (74)专利代理 机构 北京科家知识产权代理事务 所(普通合伙) 11427 专利代理师 杜娇 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量 的检测方法 (57)摘要 本发明涉及一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚 乙氧喹啉残留量的检测方法， 属于水产品检测技 术领域， 所述方法为以碳酸钠溶液和丙酮溶液提 取磷虾粉样品中的乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉， 用 正己烷液液萃取目标化合物， 在40℃下氮气吹 干。 用乙腈复溶后， 过固相萃取柱净化， 再经净化 剂净化后， 进高效液相色谱 ‑荧光检测器测定， 外 标法定量。 本发明首次采用高效液相色谱 ‑荧光 检测法同时分析磷虾粉中乙氧喹啉及其最主要 代谢物二聚乙氧喹啉， 分析一个样品仅用15min， 极大提高了工作效率， 缩短了工作时间， 节约了 试剂消耗和人力成本。 本发明测定结果准确可 靠， 灵敏度高， 结果重现性 好， 定量精准。 权利要求书2页 说明书7页 附图10页 CN 115494176 A 2022.12.20 CN 115494176 A 1.一种磷虾粉中乙氧喹啉和二 聚乙氧喹啉残留量的检测方法， 其特征在于所述方法为 以碳酸钠溶液和丙酮溶液提取磷虾粉样品中的乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉， 提取液用正己烷 液液萃取， 然后经中性氧化铝或C18固相萃取柱净化后， 再经PSA或Florisil净化， 净化液用 高效液相色谱 ‑荧光检测器测定， 外标法定量。 2.根据权利要求1所述的一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法， 其特征在于， 所述方法包括样品提取、 净化、 标准 曲线的绘制、 实验所用的仪器条件和定性 与定量； 具体步骤如下： (1)样品提取 称取磷虾粉样品， 加入碳酸钠溶液和丙酮， 涡旋震荡， 使其分散均匀； 加入正己烷， 涡旋 混合， 离心， 取正己烷和丙酮层， 再加入正己烷重复提取一次， 合并提取液， 于40℃氮吹至 干； 用乙腈复溶， 待净化； (2)样品净化 将步骤(1)待净化液转移至已活化的中性氧化铝或C18固相萃取柱中， 用乙腈洗脱， 收集 所有流出液， 并在40℃下氮气吹干， 用乙腈定容至1mL； 加 入PSA或Florisil进一步净化， 充 分涡旋混合均匀， 高速 离心取上清液， 过有机相滤膜后供高效液相色谱仪测定； (3)标准曲线的绘制 分别配制乙氧喹啉和二 聚乙氧喹啉的系列混合标准溶液， 并按照设定的液相色谱条件 进样分析； (4)实验所用的仪器条件 色谱条件如下： a)色谱柱： C18反相色谱柱， 4.6m m×250mm， 5 μm； b)柱温： 3 0℃； c)流速： 1.2mL/mi n； d)进样量： 20 μL； e)荧光检测器： 激发波长 360nm， 发射波长43 5nm； f)流动相： A： 水， B： 乙腈， 采用梯度洗脱程序， 见 下表 时间/(mi n) A/(％) B/(％) 0.00 30 70 4.00 5 95 11.00 5 95 11.50 30 70 15.00 30 70 (5)定性与定量 ①定性测定 在同样测试条件下， 试样液中目标化合物的保留时间与标准工作液中目标化合物的保 留时间之比， 偏差在 ±5％以内； ②定量测定 取试样溶液和相应的标准工作 液， 作多点校准， 按外标法定量； 标准溶液及试样溶液中 目标化合物的响应值均应在仪器 检测的线性范围之内；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115494176 A 2③空白实验 除不加试样外， 均按上述测定条件和步骤进行； ④结果计算和表述 按式(a)计算试样中目标化 合物的残留量： 式中： X—试样中目标化 合物的残留量， μg/kg； C—试样溶液中目标化 合物的浓度， ng/mL； V—最终样液定容体积， mL； f—稀释倍数； m—试样量， g。 3.根据权利要求2所述的一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法， 其特征在于， 所述步骤(2)中的固相萃取柱为1g/6mL中性氧化铝固相萃取柱或1g/6mLC18固 相萃取柱。 4.根据权利要求2所述的一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中磷虾粉与碳酸钠溶液的质量体积比为 1g/2.5mL， 碳酸钠溶液的 浓度为10 0g/L。 5.根据权利要求2所述的一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法， 其特征在于， 丙酮的加入量与碳 酸钠溶液体积相等。 6.根据权利要求2所述的一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法， 其特征在于， 正己烷的用量 为待萃取溶液体积的1 ‑2倍。 7.根据权利要求3所述的一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法， 其特征在于， 1g/6mL中性 氧化铝固相萃取柱的乙腈洗脱体积为3mL， 1g/6mLC18固相萃取柱的 乙腈洗脱体积为5mL。 8.根据权利要求2所述的一种磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法， 其特征在于， 采用荧光3D扫描的方法确定乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉波长范围， 荧光检测 器 激发波长 360nm， 发射波长43 5nm。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115494176 A 3