(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211096978.3 (22)申请日 2022.09.08 (71)申请人 成都市药品检验研究院 地址 610000 四川省成 都市武侯科技园武 兴二路10号 (72)发明人 胡泽锴　罗嫄　熊雯　郑萍　陈红　 汪洋　 (74)专利代理 机构 成都高远知识产权代理事务 所(普通合伙) 51222 专利代理师 全学荣　魏静 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 用于测定呋塞米片中有关物质的含量的 HPLC主成分自身 对照法 (57)摘要 本发明提供了一种用于测定呋塞米片中有 关物质的含量的HPLC主成分自身对照法， 属于质 量控制领域。 本发明首次采用HPLC主成分自身对 照法测定了呋塞米片中杂质B、 其他最大单个杂 质和总杂质的含量。 与外标法相比， 本发明的 HPLC主成分自身对照法不需要采用价格昂贵的 杂质B作为对照品， 降低了成本； 另外， 本发明的 HPLC主成分自身对照法不仅能够准确检测呋塞 米片中杂质B的含量， 还能够准确检测呋塞米片 中其他最大单个杂质和总杂质的含量， 可以更全 面的对呋塞米片进行质量控制。 本发 明方法操作 简便快速， 检测结果准确， 重复性好， 精密度好， 回收率高， 耐用性好， 为呋塞米药物制剂质量标 准的提高和仿制药一致性评价提供了有效依据， 应用前景广阔。 权利要求书2页 说明书9页 附图19页 CN 115452983 A 2022.12.09 CN 115452983 A 1.一种测定呋塞米或其药物制 剂中杂质B含量的方法， 其特征在于： 所述方法包括以下 步骤： (1)制备供试品溶液： 取呋塞米或其药物制剂， 加入溶剂溶解， 得到供 试品溶液； (2)制备对照溶 液： 取供试品溶液， 加入溶剂稀释， 得到对照溶 液； (3)取供试品溶液、 对照溶液进行高效液相色谱检测， 得到谱图， 按照以下公式计算呋 塞米或其药物制剂中杂质B的含量： 杂质B含量 ＝(Aix×Cd)/(Ad×Cs)×100％； 其中， Aix表示供试品溶液中杂质B的峰面积， Cd表示对照溶液浓度， Ad表示对照溶液中主 成分的峰面积， Cs表示供试品溶液浓度， 杂质B为4 ‑氯‑5‑氨磺酰邻氨苯甲酸， 杂质B与主成 分的相对保留时间为0.31； 高效液相色谱检测时， 填料为十八烷基硅烷键合硅胶， 检测波长为271 ‑273nm。 2.一种测定呋塞米或其药物制剂中其他最大单个杂质含量的方法， 其特征在于： 所述 方法包括以下步骤： (1’)制备供试品溶液： 取呋塞米或其药物制剂， 加入溶剂溶解， 得到供 试品溶液； (2’)制备对照溶 液： 取供试品溶液， 加入溶剂稀释， 得到对照溶 液； (3’)取供试品溶液、 对照溶液进行高效液相色谱检测， 得到谱图， 按照以下公式计算呋 塞米或其药物制剂中其 他最大单个杂质的含量： 其他最大单个杂质含量 ＝(Aiy×Cd)/(Ad×Cs)×100％； 其中， Aiy表示供试品溶液中其他最大单个杂质的峰面积， Cd表示对照 溶液浓度， Ad表示 对照溶液中主成分的峰面积， Cs表示供试品溶液浓度； 高效液相色谱检测时， 填料为十八烷基硅烷键合硅胶， 检测波长为271 ‑273nm。 3.一种测定呋塞米或其药物制剂中总杂质含量的方法， 其特征在于： 所述方法包括以 下步骤： (1”)制备供试品溶液： 取呋塞米或其药物制剂， 加入溶剂溶解， 得到供 试品溶液； (2”)制备对照溶 液： 取供试品溶液， 加入溶剂稀释， 得到对照溶 液； (3”)取供试品溶液、 对照溶液进行高效液相色谱检测， 得到谱图， 按照以下公式计算呋 塞米或其药物制剂中总杂质的含量： 总杂质含量 ＝(Aiz×Cd)/(Ad×Cs)×100％； 其中， Aiz表示供试品溶液中总杂质的峰面积， Cd表示对照 溶液浓度， Ad表示对照 溶液中 主成分的峰面积， Cs表示供试品溶液浓度； 高效液相色谱检测时， 填料为十八烷基硅烷键合硅胶， 检测波长为271 ‑273nm。 4.一种测定呋塞米或其药物制 剂中杂质B、 其他最大单个杂质和总杂质含量的方法， 其 特征在于： 所述方法包括以下步骤： (a)按照权利要求1的方法测定呋塞米或其药物制剂中杂质B的含量； (b)按照权利要求2的方法测定呋塞米或其药物制剂中其 他最大单个杂质的含量； (c)按照权利要求3的方法测定呋塞米或其药物制剂中总杂质的含量。 5.根据权利要求1 ‑4任一项所述的方法， 其特征在于： 所述呋塞米的药物制剂为呋塞米 片、 呋塞米注射液或复方呋塞米片， 优选为呋塞米片。 6.根据权利要求1 ‑4任一项所述的方法， 其特征在于： 所述溶剂为冰醋酸、 乙腈和水的权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115452983 A 2混合溶液， 其中冰醋酸、 乙腈和水的体积比为(10 ‑30):(470 ‑510):(470 ‑510)； 所述供试品 溶液浓度为0.5 ‑10mg/mL； 所述稀释的倍数为10 ‑200倍。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于： 所述溶剂中， 冰醋酸、 乙腈和水的体积比为 22:489:489； 所述供 试品溶液浓度为1mg/mL； 所述稀释的倍数为10 0倍。 8.根据权利要求1 ‑4任一项所述的方法， 其特 征在于： 所述检测波长为272nm。 9.根据权利要求1 ‑8任一项所述的方法， 其特征在于： 高效液相色谱检测时， 色谱柱为 Agilent ZORBAX SB‑C18柱、 资生堂TYPE  MGII C18柱或SVEA C18柱； 流动相为水、 四氢呋喃和 冰醋酸的混合溶液， 其中水、 四氢呋喃和冰醋酸的体积比为(68 ‑72)： (28 ‑32)： 1； 流速为 0.9‑1.1mL·min‑1； 进样体积为10 ‑30 μL； 柱温为25 ‑35℃。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于： 所述色谱柱为Agilent  ZORBAX SB‑C18柱； 流动相中， 水、 四氢呋喃和冰醋酸的体积比为70∶ 30∶ 1； 流速为1.0mL ·min‑1； 进样体积为20 μ L； 柱温为3 0℃。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115452983 A 3