(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211161638.4 (22)申请日 2022.09.22 (71)申请人 华润三九医药股份有限公司 地址 518110 广东省深圳市龙华区观湖街 道观澜高新园区观 清路1号 申请人 深圳市中药制造业创新中心有限公 司 (72)发明人 王亮　周宇　陈威　周琪　陈艳萍　 吴晓敏　陈世彬　孙楠　马鹏岗　 (74)专利代理 机构 北京三聚阳光知识产权代理 有限公司 1 1250 专利代理师 廖慧敏 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01)G01N 30/34(2006.01) (54)发明名称 温经汤方中人参皂苷Rg1、 Re和Rb1的检测方 法及其用途 (57)摘要 本发明涉及药物检测技术领域， 具体涉及温 经汤方中人参皂苷Rg1、 Re和Rb1的检测方法及其 用途。 本发明提供的温经汤方中人参皂苷Rg1、 Re 和Rb1的检测方法， 在制备供试品溶液的过程中， 在碱洗所得的第三中间液中加入酸性溶液以调 节第三中间液的pH值， 避免因经过碱洗的供试品 溶液的pH值过高而导致 色谱柱的耐用性差、 柱效 过快降低、 频换更换， 因此， 本发明的方法能够显 著提升色谱柱的耐用性， 降低色谱柱的柱效下降 速率， 进而降低色谱柱的更 换频率。 权利要求书2页 说明书19页 附图7页 CN 115436524 A 2022.12.06 CN 115436524 A 1.一种温经汤方中人参皂苷Rg1、 Re和Rb1的检测方法， 其特征在于， 采用高效液相色谱 法进行检测， 检测时所采用的供 试品溶液的制备 过程包括： 1)取供试品， 利用醇类溶剂提取， 提取 液蒸干， 得第一残渣； 2)加水溶解所述第一残渣， 所得残渣水溶液利用低极性有机溶剂进行第一萃取， 取水 层， 得第一中间液； 3)利用水饱和的正丁醇溶液对所述第一中间液进行第二萃取， 取正丁醇层， 得第二中 间液； 4)利用强碱溶 液对所述第二中间液进行洗涤， 取正 丁醇层， 得第三中间液； 5)向所述第三中间液中加入酸 性溶液， 蒸干， 所 得第二残渣加醇类溶剂溶解。 2.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述醇类溶剂选自甲醇、 乙醇、 体积百 分比不低于70％的 甲醇水溶液、 和体积百分比不低于70％的乙醇水 溶液中的至少一种； 可选的， 操作1)中， 所述提取为超声提取， 相对于1g的所述供试品， 所述醇类溶剂的用 量为25～200mL； 可选的， 操作2)中加水溶解所述第一残渣时， 水与所述第一残渣对应的所述提取液的 体积比为1:(1～3)。 3.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 操作2)中所述第一萃取的次数为1～3 次， 单次第一萃取时， 所述低极性有机溶剂与所述残渣水 溶液的体积比为1:(1～3)； 可选的， 所述第一萃取为摇床振摇萃取， 单次第一萃取的时间为1～4mi n； 可选的， 所述低极性有机溶剂选自乙醚、 氯仿和石油醚中的至少一种。 4.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 操作3)中所述第二萃取的次数为2～4 次， 单次第二萃取时， 所述水饱和的正 丁醇溶液与所述第一中间液的体积比为(1～3):1； 可选的， 所述第二萃取为摇床振摇萃取， 单次第二萃取的时间为1～4mi n。 5.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 操作4)中在利用强碱溶液对所述第二 中间液进 行洗涤时， 洗涤次数为 1～4次， 单次洗涤时， 所述 强碱溶液与所述第二中间液的体 积比为1:(1～3)； 可选的， 所述强碱溶液为氢氧化钠溶液和/或氢氧化钾溶液； 所述强碱溶液中， 强碱的 质量分数为0.1％～5％。 6.根据权利要求5所述的检测方法， 其特征在于， 操作4)中利用强碱溶液对所述第二中 间液进行洗涤后， 所述检测方法还 包括： 取强碱溶液层， 利用水饱和的正丁醇溶液进行第 三萃取， 取正丁醇层， 与 所述第二萃取 的正丁醇层合并， 得 所述第三中间液； 可选的， 所述第 三萃取的次数为1～3次， 单次第 三萃取时， 所述水饱和的正丁醇溶液与 所述强碱溶 液层的体积比为1:(1～3)。 7.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 操作5)中向所述第 三中间液中加入酸 性溶液， 调节所述第三中间液的pH值 为7.5～10； 可选的， 所述酸性溶液选自冰醋酸溶液和/或甲酸溶液； 所述酸性溶液中， 酸的质量分 数为0.1～5％ ％。 8.根据权利要求1～7中任一项所述的检测方法， 其特征在于， 所述高效液相色谱法的 检测条件 包括如下 条件中的至少一项：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115436524 A 2(1)色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱， 柱长为150mm， 内径为4.6mm， 粒径为2.7μm； 色 谱柱优选为CAPC ELL CORE C18柱； (2)以乙腈 ‑水为流动相进行梯度洗脱， 梯度洗脱程序包括： 0～21min， 流动相中乙腈的 体积百分比为18％； 21～30min， 流动相中乙腈的体积百分比为18％ →20％； 30～35min， 流 动相中乙腈的体积百分比为20％； 35～40min， 流动相中乙腈的体积百分比为20％ →28％； 40～56min， 流动相中乙腈的体积百分比为28％ →29％； 56～60min， 流动相中乙腈的体积百 分比为29％； (3)柱温为25～3 5℃； (4)流速为0.5～1.0mL/mi n； (5)检测波长为20 0～210nm； (6)进样量 为2～10 μl。 9.根据权利要求1～7中任一项所述的检测方法， 其特征在于， 所述供试品包括温经汤 复方制剂的成品、 温经汤复方制剂的中间品或者温经汤方 的基准样品， 所述温经汤复方制 剂包括温经汤颗粒； 可选的， 所述温经汤方包括如下重量份的原料： 1～2重量份当归、 1～2重量份川芎、 1～2重量份芍药、 1～2重量份桂心、 1～2重量份牡 丹皮、 1～ 2重量份莪术、 1～ 2重量份人参、 1～ 2重量份甘草、 1～ 2重量份牛膝。 10.权利要求1～ 9中任一项所述的检测方法在温经汤复方制剂质量控制中的用途。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115436524 A 3