(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211211001.1 (22)申请日 2022.09.30 (71)申请人 昆明和合医学检验所有限公司 地址 650000 云南省昆明市高新区昌源北 路1389号 (72)发明人 吕小波　黄和飞　谷叶　何水兰　 张芳玮　 (74)专利代理 机构 北京隆达恒晟知识产权代理 有限公司 1 1899 专利代理师 杨青 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 液相色谱串联质谱法同时测定干血滤纸片 中血管紧张素 Ⅰ、 血管紧张素 Ⅱ、 醛固酮含量 (57)摘要 本发明涉及一种液相色谱串联质谱法同时 测定干血滤纸片中血管紧张素 Ⅰ、 血管紧张素 Ⅱ、 醛固酮含量， 属于医学检测领域， 本发明采用液 相色谱质谱联用仪进行检测， 以以Ang Ⅰ、 AngⅡ、 ALD的标准工作液与内标工作液浓度的比值为横 坐标， 各自标准工作液与内标工作液的色谱图峰 面积比值为纵坐标绘制标准曲线。 需要检测待测 样品时使用液相色谱质 谱联用仪测出待测样品 峰面积， 然后通过S1步骤的标准曲线进行定量， 计算出待测样品中Ang Ⅰ、 AngⅡ、 ALD的含 量。 本发 明方法所采用的前处理方法简单、 便捷、 耗时短、 所需采血量较少， 且可以同时检测三种物质。 权利要求书2页 说明书9页 附图5页 CN 115453001 A 2022.12.09 CN 115453001 A 1.一种液相色谱串联质谱法同时测定干血滤纸片中血管紧张素 Ⅰ、 血管紧张素 Ⅱ、 醛固 酮含量， 其特 征在于， 包 含以下步骤： S1， 制备标准曲线： 制取An gⅠ、 AngⅡ、 ALD得标准工作液和内标工作液， 然后采用液相色 谱质谱联用仪进行检测， 以各自标准工作液与内标工作液浓度的比值为横坐标， 各自标准 工作液与内标工作液的色谱图峰面积比值为纵坐标绘制标准曲线； A ngⅠ、 AngⅡ、 ALD标准曲 线的线性相关方程如下表； S2， 待测样品含量检测： 将干血滤纸处理后进行用液相色谱质谱联用仪进行检测， 使用 液相色谱质谱联用仪测出待测样品峰面积， 然后通过S1步骤的标准曲线进行定量， 计算出 待测样品中Ang Ⅰ、 AngⅡ、 ALD的含量。 2.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法同时测定干血滤纸片中血管紧张素 Ⅰ、 血 管紧张素 Ⅱ、 醛固酮含量， 其特征在于： 所述的S1步骤中Ang Ⅰ、 AngⅡ、 ALD标准工作液的浓度 包含七个梯度， 分别为： AngⅠ： 0.9375ng/mL、 1.875ng/mL、 3.75ng/mL、 7.5ng/mL、 15ng/mL、 3 0ng/mL、 6 0ng/mL； AngⅡ： 0.03125ng/mL、 0.0625ng/mL、 0.125ng/mL、 0.25ng/mL、 0.5ng/mL、 1ng/mL、 2ng/ mL； ALd： 0.15ng/mL、 0.3ng/mL、 0.6ng/mL、 1.2ng/mL、 2.4 ng/mL、 4.8ng/mL、 9.6ng/mL； 内标工作液的浓度为： Ang Ⅰ ‑IS 50ng/mL、 Ang Ⅱ‑IS 2ng/mL、 ALd ‑IS 10ng/mL。 3.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法同时测定干血滤纸片中血管紧张素 Ⅰ、 血 管紧张素 Ⅱ、 醛固酮含量， 其特征在于： 所述的液相色谱质谱联用仪检测的色谱条件如下： 流动相A相： 0.1v/v%甲醇； B相： 水； 梯度洗脱条件为： 。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115453001 A 24.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法同时测定干血滤纸片中血管紧张素 Ⅰ、 血 管紧张素 Ⅱ、 醛固酮含量， 其特征在于： 所述S2步骤干血滤纸处理方法为： 直径3mm打孔器取 样2个DBS 血斑， 置于96  孔板中， 每孔加入200 μL甲醇萃取溶剂， 10   µL PMSF， 37℃密封孵育 震荡60min， ‑20℃放置15min终止酶反应 →室温解冻 →200µL水→2000 r/min涡旋混匀2min →200µL甲醇活化柱子 →200µL水平衡→400μL上样 →200µL10%乙腈 →更换96孔板 →50µ L10%乙腈 （1%甲酸） 两次 →封膜上机检测进行LC ‑MS/MS分析。 5.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法同时测定干血滤纸片中血管紧张素 Ⅰ、 血 管紧张素 Ⅱ、 醛固酮含量， 其特征在于： 所述的色谱分析所用的色谱柱为： Kinetex  Polar  C18， 2.1×100mm， 2.6µm， 柱温： 35℃； 进样量： 25  uL； 分析时间： 6mi n。 6.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法同时测定干血滤纸片中血管紧张素 Ⅰ、 血 管紧张素 Ⅱ、 醛固酮含量， 其特征在于： 采用液相色谱质谱联用仪进行检测时， 质谱检测条 件为： 7.如权利要求1所述的液相色谱串联质谱法同时测定干血滤纸片中血管紧张素 Ⅰ、 血管 紧张素Ⅱ、 醛固酮含量在医学检测中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115453001 A 3