(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211154911.0 (22)申请日 2022.09.21 (71)申请人 重庆智合 生物医药有限公司 地址 400700 重庆市北碚区安 礼路128号大 学科技园科技创业中心C座21 1室 (72)发明人 但彦春　曹姣　田佳婷　 (74)专利代理 机构 北京酷爱智慧知识产权代理 有限公司 1 1514 专利代理师 刘志刚 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/16(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/60(2006.01) (54)发明名称 植物鞘氨醇和/或N-乙酰植物鞘氨醇的分离 鉴定方法 (57)摘要 本发明公开了一种植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰 植物鞘氨醇的分离鉴定方法， 包括如下步骤： 采 用高效液相色谱法对植物鞘氨醇或N ‑乙酰植物 鞘氨醇的对照品溶液进行分离检测， 得到第一色 谱图； 采用所述高效液相色谱法对含有植物鞘氨 醇和/或N ‑乙酰植物鞘氨醇的样品进行分离检 测， 得到第二色谱图； 根据第一色谱图、 第二 色谱 图以及植物鞘氨醇或N ‑乙酰植物鞘氨醇的对照 品溶液浓度确定所述样品中植物鞘氨醇和/或N ‑ 乙酰植物鞘氨醇及其含量； 该方法对植物鞘氨醇 的含量与N ‑乙酰植物鞘氨醇进行了快速、 准确有 效的检测， 为植物鞘氨醇的质量控制提供可靠的 检测分析方法； 该方法具有操作简单、 数据准确 可靠、 重现性 好的特点。 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 CN 115372521 A 2022.11.22 CN 115372521 A 1.一种植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰植物鞘氨醇的分离鉴定方法， 其特征在于， 包括如下步 骤： 采用高效液相色谱法对植物鞘氨醇或N ‑乙酰植物鞘氨醇的对照品溶液进行分离检测， 得到第一色谱图； 采用所述高效液相色谱法对含有植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰植物鞘氨醇的样品进行分离 检测， 得到第二色谱图； 根据第一色谱图、 第二色谱图以及植物鞘氨醇或N ‑乙酰植物鞘氨醇的对照品溶液浓度 确定所述样品中植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰植物鞘氨醇及其含量； 所述高效液相色谱法以流动相A和流动相B进行梯度洗脱； 所述流动相A为 三氟乙酸水 溶液； 所述流动相B为乙腈。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述三氟乙酸水溶液浓度为0.04％～ 0.06％。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述梯度洗脱程序为： 0～5min， 流动相A  50v/v％； 5～25min， 流动相A  50v/v％～3 0v/v％； 25～30min， 流动相A  30v/v％～ 20v/v％； 30～35min， 流动相A  20v/v％； 35～36min， 流动相A  20v/v％～5 0v/v％； 36～45min， 流动相A  50v/v％。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述梯度洗脱的流速为0.9 ～1.0ml/mi n。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述高效液相色谱法采用的色谱柱为C8色 谱柱； 所述色谱柱规格长度为10 0‑200mm， 内径为 4.0‑5.0mm， 填料粒径为4.0‑6.0 μm。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述色谱柱的柱温为3 5～40℃。 7.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述高效液相色谱法所采用的CAD检测器 的雾化温度为5 0℃， 进样量 为10 μL。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述植物鞘氨醇的对照品溶液浓度为0.03 ～0.05mg/ml； 所述 N‑乙酰植物鞘氨醇的对照品溶 液浓度为0.0 3～0.05mg/ml。 9.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述含有植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰植物鞘 氨醇的样品中植物鞘氨醇和N ‑乙酰植物鞘氨醇的浓度分别为0.0 3～0.07mg/ml。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115372521 A 2植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰植物 鞘氨醇的分离鉴定方 法 技术领域 [0001]本发明涉及化合物的分离纯化技术领域， 具体涉及一种植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰 植物鞘氨醇的分离鉴定方法。 背景技术 [0002]植物鞘氨醇(Ph yto sphingosine)， 又称神经鞘氨醇， 学名2 ‑氨基‑4‑十八烯‑1,3‑ 二醇， 是一种含有不饱和烃基链的十八碳氨基醇。 其结构式如下 所示： [0003] [0004]植物鞘氨醇为新型化妆品原 料， 研究发现， 植物鞘氨醇， 这种长链有机分子除了水 分保持和屏障功能之外， 在抗炎舒缓、 抑制微生物、 调控上皮角化增殖以及治疗痤疮等方面 都有着不俗的表现和优异效果。 植物鞘氨醇之所以对皮肤作用显著， 一个很重要的原因是 因为它作为PPARs(过氧化物酶体增殖物激活受体)的配体来发挥作用， 因此即使添加量很 小， 也同样可以发挥作用。 经发酵、 提取、 水解得到植物鞘氨醇。 [0005]目前无文献报到植物鞘氨醇的含量与有关物质的测定， 但对于具有相似的结果的 物质多采用NMR与液相色谱柱前衍生法， 采用上述方法操作复杂与仪器设备昂贵， 不适用于 工业生产质量监控； 此外， 植物鞘氨醇中影响质量最大杂质为N ‑乙酰植物鞘氨醇； 然而， 采 取衍生方法无法准确获取植物鞘氨醇中N ‑乙酰植物鞘氨醇以及其他杂质的含量， 为植物鞘 氨醇在化妆品使用领域的安全带来潜在风险。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供一种植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰植物鞘氨醇的分离鉴定方 法， 本发明分离鉴定方法能够实现样品中植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰植物鞘氨醇的分离鉴定， 实现植物鞘氨醇以及N ‑乙酰植物鞘氨醇的分离纯化， 提高了植物鞘氨醇的纯度。 [0007]为了实现本发明的上述目的， 特采用以下技 术方案： [0008]本发明第一方面提供一种植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰植物鞘氨醇的分离鉴定方法， 所述方法包括如下步骤： [0009]采用高效液相色谱法对植物鞘氨醇或N ‑乙酰植物鞘氨醇的对照品溶液进行分离 检测， 得到第一色谱图； [0010]采用所述高效液相色谱法对含有植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰植物鞘氨醇的样品进行 分离检测， 得到第二色谱图； [0011]根据第一色谱图、 第二色谱图以及植物鞘氨醇或N ‑乙酰植物鞘 氨醇的对照品溶液 浓度确定所述样品中植物鞘氨醇和/或N ‑乙酰植物鞘氨醇及其含量； [0012]所述高效液相色谱法以流动相A和流动相B进行梯度洗脱； [0013]所述流动相A为 三氟乙酸水 溶液；说　明　书 1/5 页 3 CN 115372521 A 3