(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211207115.9 (22)申请日 2022.09.30 (71)申请人 广州艾格生物科技有限公司 地址 510700 广东省广州市广州高新 技术 产业开发区科学城掬泉路3号广州国 际企业孵化器B区B401号 申请人 广州百美医药 科技有限公司 (72)发明人 尹科　张现涛　何盛江　谭斌　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 苏婕 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法 与应用 (57)摘要 本发明提供了一种替尼类药物中间体中毒 性杂质的检测方法， 包括如下步骤： 分别取3,4 ‑ 二氯硝基苯、 3 ‑氯‑4‑氟硝基苯、 3 ‑氯‑2‑氟硝基 苯、 4‑氯‑3‑氟硝基苯与对氟硝基苯对照品， 制备 对照品溶液； 取替尼类药物中间体的待测 品， 制 备供试品溶液； 分别将所述对照品溶液与所述供 试品溶液进行高效液相色谱检测； 其中， 高效液 相色谱检测的条件包括： 流动相A为甲醇， 流动相 B为醋酸铵水溶液， 采用梯度洗脱。 该检测方法操 作快速简便、 专属性强并且灵敏度高， 同时精密 度、 准确度与耐用性良好。 权利要求书1页 说明书12页 附图2页 CN 115453000 A 2022.12.09 CN 115453000 A 1.一种替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 分别取3,4 ‑二氯硝基苯、 3 ‑氯‑4‑氟硝基苯、 3 ‑氯‑2‑氟硝基苯、 4 ‑氯‑3‑氟硝基苯与对 氟硝基苯对照品， 制备对照品溶 液； 取替尼类药物中间体的待测品， 制备 供试品溶液； 分别将所述对照品溶 液与所述供 试品溶液进行高效液相色谱检测； 其中， 高效液相 色谱检测的条件包括： 流动相A为甲醇， 流动相B为醋酸铵水溶液， 采用 梯度洗脱； 所述梯度洗脱的程序包括： 0min～33min， 流动相A的体积百分数为a； 33min～ 33.1min， 流动相A的体积百分数从a变化至85％； 33.1min～40min， 流动相A的体积百分数保 持为85％； 40min～40.1min， 流动相A的体积百分数从85％变化至 a； 40.1min～50min， 流动 相A的体积百分数保持为a； a为5 3％±3％。 2.根据权利要求1所述的替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 其特征在于， 高效 液相色谱检测的条件还包括： 柱温为35℃～45℃； 流速为0.8mL/min～1.2mL/min； 检测波长 为271nm±5nm。 3.根据权利要求1所述的替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 其特征在于， 高效 液相色谱 采用的条件 还包括： 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱。 4.根据权利要求1所述的替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 其特征在于， 高效 液相色谱采用的色谱柱的尺寸包括： 柱长为200mm～300mm， 内径为4mm～5mm， 粒径为4 μm～6 μm。 5.根据权利要求1所述的替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 其特征在于， 所述 醋酸铵水 溶液中， 醋酸铵的质量百分数为0.4％～0.8％。 6.根据权利要求1所述的替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 其特征在于， 制备 对照品溶 液包括如下步骤： 分别将3,4 ‑二氯硝基苯、 3 ‑氯‑4‑氟硝基苯、 3 ‑氯‑2‑氟硝基苯、 4 ‑氯‑3‑氟硝基苯、 对氟 硝基苯对照品与二甲基亚砜混合。 7.根据权利要求1所述的替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 其特征在于， 制备 供试品溶液包括如下步骤： 将所述替尼类药物中间体的待测品与二甲基亚砜混合。 8.根据权利要求1～7任一项所述的替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 其特征 在于， 所述 替尼类药物中间体为3 ‑氯‑4‑氟苯胺。 9.根据权利要求1～7任一项所述的替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 其特征 在于， 分别将所述对照品溶液与所述供试品溶液进行高效液相色谱检测后还包括如下步 骤： 获取所述对照品溶液中所述毒性杂质分别对应的峰面积； 获取所述对照品溶液的浓 度； 以所述对照品溶液 的浓度为横坐标， 以所述对照品溶液中所述毒性杂质分别对应的峰 面积为纵坐标， 计算线性回归方程； 获取所述供试品溶液中所述毒性杂质分别对应的峰面积， 并代入所述线性 回归方程中 计算得到所述待测品中所述基因毒性杂质的含量。 10.权利要求1～9任一项所述的替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法在替尼类药 物中间体质量控制中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115453000 A 2替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方 法与应用 技术领域 [0001]本发明涉及药物分析技术领域， 特别是涉及一种替尼类药物中间体中毒性杂质的 检测方法与应用。 背景技术 [0002]替尼类药物是抗癌医学领域内的常用药品， 比如吉非替尼、 卡奈替尼等， 医药工业 中合成替尼类药物常见的重要中间体为3 ‑氯‑4‑氟苯胺。 3 ‑氯‑4‑氟苯胺合成路线如下所 示： [0003] [0004]3,4‑二氯硝基苯、 3 ‑氯‑4‑氟硝基苯为3 ‑氯‑4‑氟苯胺合成工艺中的得到的中间 体， 过量的3,4 ‑二氯硝基苯、 3 ‑氯‑4‑氟硝基苯均可能引入到3 ‑氯‑4‑氟苯胺中。 同时， 合成 路线中还可能生成副产物3 ‑氯‑2‑氟硝基苯、 4 ‑氯‑3‑氟硝基苯与对氟硝基苯， 这三种副产 物也非常有可能引入到最终的3 ‑氯‑4‑氟苯胺产品中。 上述各杂质的化学 结构如下 所示： [0005] [0006]由于硝基类化合物为风险警示结构， 一般按基因毒性杂质进行质量控制。 为确保 用药安全， 需要在替尼类药物中间体中对硝基类杂质的含量进行检测。 但是由于3,4 ‑二氯 硝基苯、 3 ‑氯‑4‑氟硝基苯、 3 ‑氯‑2‑氟硝基苯、 4 ‑氯‑3‑氟硝基苯与对氟硝基苯这五种硝基 化合物性质相似， 传统的检测方法难以将所有的杂质进行有效分离 。 发明内容 [0007]基于此， 本发明提供了一种替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 其操作快 速简便、 专属性强并且灵敏度高， 同时精密度、 准确度与耐用性良好。 [0008]本发明通过如下技 术方案实现。 [0009]一种替尼类药物中间体中毒性杂质的检测方法， 包括如下步骤： [0010]分别取3,4 ‑二氯硝基苯、 3 ‑氯‑4‑氟硝基苯、 3 ‑氯‑2‑氟硝基苯、 4 ‑氯‑3‑氟硝基苯 与对氟硝基苯对照品， 制备对照品溶 液； [0011]取替尼类药物中间体的待测品， 制备 供试品溶液； [0012]分别将所述对照品溶 液与所述供 试品溶液进行高效液相色谱检测；说　明　书 1/12 页 3 CN 115453000 A 3