(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211111337.0 (22)申请日 2022.09.13 (71)申请人 北京豪思生物科技股份有限公司 地址 102200 北京市昌平区回龙观镇科 学 园路7号院1号楼1层102-2 申请人 江苏豪思睦可生物科技有限公司 　 湖南豪思生物科技有限公司 (72)发明人 郑佳　张新星　栗琳　周继福　 应洪波　周立　丁沛瑜　苏营雪　 丁亮　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 刘桐亚 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01)G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 定量检测抗结核 药物浓度的试剂、 应用及试 剂盒 (57)摘要 本发明涉及制药技术领域， 尤其是涉及定量 检测抗结核药物浓度的试剂、 应用及试剂盒。 本 发明提供的试剂和试剂盒能够用于高效液相串 联质谱法高通量检测人血清中四种一线抗结核 药物， 一次检测可同时得到吡嗪酰胺、 异烟肼、 乙 胺丁醇和利福平四种一线抗结核药物， 具有灵敏 度高， 重复性好， 准确性高， 特异性好等特点。 检 测得到的吡嗪酰胺线性范围15～105μg/ml， 异 烟肼1～19 μg/ml， 乙胺丁醇1～14.5μg/ml， 利 福平0.4～13μg/ml， 相关系数均r≥0.9 90。 权利要求书2页 说明书33页 CN 115389677 A 2022.11.25 CN 115389677 A 1.定量检测抗结核药物浓度的第 一试剂， 其特征在于， 所述抗结核药物包括吡嗪酰胺、 异烟肼、 乙胺丁醇和利 福平； 所述第一试剂包括校准品、 低值质控品、 中值质控品、 高值质控品和样本萃取 液； 所述校准品包括至少1个浓度稀释梯度的吡嗪酰胺的BSA溶液、 至少1个浓度稀释梯度 的异烟肼的BSA溶液、 至少1个浓度稀释梯度的乙胺 丁醇的BSA溶液和至少1个浓度稀释梯度 的利福平的BSA溶 液； 所述低值质控品包括浓度为16.32～24.48 μg/mL的吡嗪酰胺的BSA溶液、 浓度为1.66～ 2.50μg/mL的异烟肼的BSA溶液、 浓度为1.45～2.17μg/mL的乙胺丁醇的BSA溶液和浓度为 0.93～1.39 μg/mL的利 福平的BSA溶 液； 所述中值质控品包括浓度为43.35～58.65 μg/mL的吡嗪酰胺的BSA溶液、 浓度为6.97～ 9.43μg/mL的异烟肼的BSA溶液、 浓度为5.44～7.36μg/mL的乙胺丁醇的BSA溶液和浓度为 4.62～6.26 μg/mL的利 福平的BSA溶 液； 所述高值质控品包括浓度为69.87～94.53μg/mL的吡嗪酰胺的BSA溶液、 浓度为12.27 ～16.61 μg/mL的异烟肼的BSA溶液、 浓度为9.42～12.74 μg/mL的乙胺丁醇的BSA溶液和浓度 为8.34～1 1.28 μg/mL的利 福平的BSA溶 液； 所述样本萃取液包括吡嗪酰胺、 异烟肼、 乙胺丁醇和利福平的同位素标记物的甲醇溶 液， 所述吡嗪酰胺的同位素标记物为吡嗪酰胺 ‑15N,D3， 所述异烟肼的同位素标记物为异烟 肼‑D4， 所述乙胺丁醇的同位素标记物为乙胺丁醇 ‑D4， 所述利福平的同位素标记物为利福 平‑D4。 2.根据权利要求1所述的第一试剂， 其特征在于， 所述校准品吡嗪酰胺 的BSA溶液的浓 度稀释梯度为6个， 其中吡嗪酰胺的浓度范围为15～10 5 μg/mL； 所述校准品异烟肼的BSA溶液的浓度稀释梯度为6个， 其中异烟肼的浓度范围为1～19 μ g/mL； 所述校准品乙胺丁醇的BSA溶液的浓度稀释梯度为6个， 其中乙胺丁醇的浓度范围为1 ～14.5 μg/mL； 所述校准品利福平的BSA溶液的浓度稀释梯度为6个， 其中利福平的浓度范围为0.4～ 13 μg/mL。 3.根据权利要求2所述的第一试剂， 其特征在于， 所述校准品吡嗪酰胺 的BSA溶液的浓 度稀释梯度为15 μg/mL、 3 3 μg/mL、 45 μg/mL、 57 μg/mL、 75 μg/mL和10 5 μg/mL； 所述校准品异烟肼的BSA溶液的浓度稀释梯度为1 μg/mL、 4.6 μg/mL、 7 μg/mL、 9.4 μg/mL、 13 μg/mL和19 μg/mL； 所述校准品乙胺丁醇的BSA溶液 的浓度稀释梯度为1μg/mL、 3.7μg/mL、 5.5μg/mL、 7.3μ g/mL、 10 μg/mL和14.5 μg/mL； 所述校准品利福平的BSA溶液的浓度稀释梯度为0.4 μg/mL、 2.92 μg/mL、 4.6 μg/mL、 6.28 μg/mL、 8.8 μg/mL和13 μg/mL。 4.根据权利要求1所述的第一试剂， 其特征在于， 所述低值质控品包括浓度为20.4μg/ mL的吡嗪酰胺的BSA溶液、 浓度为2.08 μg/mL的异烟肼的BSA溶液、 浓度为1.81μg/mL的乙胺 丁醇的BSA溶 液和浓度为1.16 μg/mL的利 福平的BSA溶 液； 所述中值质控品包括浓度为51μg/mL的吡嗪酰胺的BSA溶液、 浓度 为8.2 μg/mL的异烟肼权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115389677 A 2的BSA溶液、 浓度为6.4μg/mL的乙胺丁醇的BSA溶液和浓度为5.44μg/mL的利福平的BSA溶 液； 所述高值质控品包括浓度为82.2 μg/mL的吡嗪酰胺的BSA溶液、 浓度为14.44 μg/mL的异 烟肼的BSA溶液、 浓度为11.08 μg/mL的乙胺丁醇的BSA溶液和浓度为9.81μg/mL的利福平的 BSA溶液。 5.根据权利 要求2所述的第一试剂， 其特征在于， 所述样本萃取液包括吡嗪酰胺 ‑15N,D3 的甲醇溶液、 异烟肼 ‑D4的甲醇溶液、 乙胺丁醇 ‑D4的甲醇溶液和利福平‑D4的甲醇溶液； 所述吡嗪酰胺 ‑15N,D3的甲醇溶液中吡嗪酰胺 ‑15N,D3的浓度选自0.5～5μg/ml， 所述异 烟肼‑D4的甲醇溶液中异烟肼 ‑D4的浓度选自0.05～1 μg/ml， 所述乙胺丁醇 ‑D4的甲醇溶液中 乙胺丁醇 ‑D4的浓度选自0.01～0.05 μg/ml， 所述利福平 ‑D4的甲醇溶液中利福平 ‑D4的浓度 选自0.2～2 μg/ml。 6.权利要求1～5任一项所述的第一试剂， 其特征在于， 所述校准品、 低值质控品、 中值 质控品和高值质控品中还 含有乙二胺四乙酸 二钠、 柠檬酸和硫代硫酸钠。 7.非诊断目的的权利要求1～6任一项所述第一试剂在高效液相串联质谱法检测人血 清中抗结核药物成分浓度中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述应用包括抗结核药物有 效成分释放效 果评价。 9.用于高效液相串联质谱法检测人血清中抗结核药物成分浓度的第二试剂， 其特征在 于， 所述第二试剂包括第一试剂以及用于高效液相色谱的流动相A和流动相B； 所述流动相A为含有0.1％(v/v)甲酸的5mM的 甲酸铵水 溶液， 所述流动相B为甲醇溶 液。 10.用于高效液相串联质谱法检测人血清中抗结核药物成分浓度的试剂盒， 其特征在 于， 所述试剂盒包括权利要求1～6任一项所述第一试剂或权利要求9所述的第二试剂。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115389677 A 3