(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211141366.1 (22)申请日 2022.09.20 (71)申请人 贵州医科 大学 地址 550025 贵州省贵阳市花溪区花溪大 学城栋青路2号 (72)发明人 郑林　黄勇　晏婷　迟明艳　周杨　 巩仔鹏　李月婷　金阳　 (74)专利代理 机构 北京中睿智恒知识产权代理 事务所(普通 合伙) 16025 专利代理师 邓大为 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01) G01N 30/88(2006.01) G01N 5/00(2006.01) (54)发明名称 大果木姜子油的GC-MS指纹图谱和多指标含 量测定方法 (57)摘要 本发明公开了大果木姜子油的GC ‑MS指纹图 谱和多指标含量测定方法， 属于大果木姜子油质 量领域， 大果木姜子油的GC ‑MS指纹图谱和多指 标含量测定方法， 大果木姜子油的GC ‑MS指纹图 谱的测定方法， 包括以下测定方法： S1： 准确称取 大果木姜子2 0g， 置于烧瓶中， 分别考察药材粉碎 粒径、 料液比、 浸泡时间、 提取时间四个因素对出 油率的影响； S2： 将收集到的挥发油， 加入适量无 水硫酸钠密封过夜， 于次日以8000r/min离心 10min， 收集上层油层， 称重， 平行3次， 取均值计 算出油率； S3： 溶液制备并分析结果， 它可以实 现， 采用GC ‑MS技术对大果木姜子油中化学成分 进行研究， 初步明确其物质基础， 为后续质量控 制等研究奠定 基础。 权利要求书2页 说明书13页 附图6页 CN 115420832 A 2022.12.02 CN 115420832 A 1.大果木姜子油的GC ‑MS指纹图谱的测定方法， 其特 征在于： 包括以下测定方法： S1： 准确称取大果木姜子20g， 置于烧瓶 中， 分别考察药材粉碎粒径、 料液比、 浸泡时间、 提取时间四个因素对出油率的影响； S2： 将收集到的挥发油， 加入适量无水硫酸钠密封过夜， 于次日以8000r/min离心 10min， 收集上层油层， 称重， 平行3次， 取均值计算出油率； S3： 建立GC ‑MS指纹图谱； S4： 溶液制备并分析 结果。 2.根据权利要求1所述的大果木姜子油的GC ‑MS指纹图谱的测定方法， 其特征在于： 对 大果木姜子出油率的影响包括以下几种因素： 粉碎粒径对出油率的影响： 使用粉碎机将大果木姜子粉碎， 将粉碎的大果木姜子粉末 分别考察10、 30、 60、 80、 100目筛， 准确称取20g， 料液比1: 12， 浸泡0h， 提取5h， 比较出油率， 确定最佳粉碎粒径； 料液比对出油率的影响： 使用粉碎机将大果木姜子粉碎， 将粉碎的大果木姜子粉末过 60目筛， 准确称取20 g， 分别考察料液比1:6、 1:8、 1:10、 1:12、 1:14， 浸泡0h， 提取5h， 比较出 油率， 确定最佳 料液比； 浸泡时间对出油率的影响： 使用粉碎机将大果木姜子粉碎， 将粉碎的大果木姜子粉末 过60目筛， 准确称取20 g， 料液比1: 12， 分别考察浸泡0h、 0.5h、 1h、 1.5h、 2h， 提取5h， 比较出 油率， 确定最佳浸泡时间； 提取时间对出油率的影响： 使用粉碎机将大果木姜子粉碎， 将粉碎的大果木姜子粉末 过60目筛， 准确称取20g， 料液比1:12， 分别考察提取2h、 3h、 4h、 5h、 6h， 比较出油率， 确定最 佳提取时间。 3.根据权利要求2所述的大果木姜子油的GC ‑MS指纹图谱的测定方法， 其特征在于： 对 单因素试验的结果进 行大果木姜子油的提取试验， 准确称取20g粉碎后的大果木姜子， 计算 出油率， 平行3次； 其计算方法为： 4.根据权利要求3所述的大果木姜子油的GC ‑MS指纹图谱的测定方法， 其特征在于： 提 取出的大果木姜子油， 精密称取50mg至50mL容量瓶中， 加入乙酸乙酯稀释至刻度， 摇匀， 精 密量取1mL至 50mL容量瓶中， 加入乙酸乙酯稀释至刻度， 摇匀， 即得 供试品溶液。 5.根据权利要求1所述的大果木姜子油的GC ‑MS指纹图谱的测定方法， 其特征在于： 所 述GC‑MS指纹图谱的建立包括以下步骤： A1： GC‑MS条件： 色谱条件： 分流比5 0:1， 进样口温度2 20℃； 不分流进样； 进样量1 μL； 质谱条件： 离子源温度200℃； 接 口温度230℃； 电离方式为电子轰击离子(EI)； 检测电 压： 0.2KV； 溶剂 延迟3min； 质量数扫描范围： 3 0～400amu； SCAN全扫描模式； A2： 提取方法： 分别取22批大果木姜子干果， 粉碎， 过60目筛， 准确称取20g粉末， 分别迅速装入250mL权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115420832 A 2的圆底烧瓶中， 加 入超纯水160mL， 密封浸泡0.5h， 连接提取装置提取5h， 提取完后静置1h， 收集挥发油， 加入适量无水硫酸钠密封过夜， 于次日以8000r/min离心10min， 收集上层油 层， 避光， ‑20℃保存； A3： 溶液制备： 分别精密称定大果木姜子油0.1g， 置于20mL容量瓶 中得储备液， 精密量取1.5mL储备液 于20mL容量瓶中， 加入乙酸乙酯定容得 供试品溶液； A4： 实验得 出结论并建立指纹图谱。 6.大果木姜子油的多指标含量测定方法， 其特征在于： 所述多指标含量测定方法包括 以下步骤： S1： GC‑MS条件 色谱条件： 色谱柱： SH ‑Stabilwax毛细管柱； 进样口温度220℃； 分流比50:1； 进样量1μ L； 质谱条件： 离子源温度200℃； 接口温度230℃； 电离方式为电子轰击离子； 检测电压： 0.2KV； 溶剂 延迟3min； 质量数扫描范围： 3 0～400amu； SIM模式； S2： 对照品溶 液的制备； S3： 内标溶液的制备； S4： 供试品溶液的制备； S5： 考察分析并试验。 7.根据权利要求6所述的大果木姜子油的多指标含量测定方法， 其特征在于： 所述S2中 对照品溶液的制备方法： 精密称取左旋 ‑β‑蒎烯、 桧烯、 月桂烯、 (+) ‑柠檬烯、 桉油精、 γ ‑松 油烯对伞花烃、 萜品油烯、 2 ‑壬酮、 4‑侧柏醇、 乙酸龙脑酯、 β ‑石竹烯、 4 ‑萜烯醇、 ( ‑)‑桃金娘 烯醛、 4‑异丙基环己 ‑2‑烯‑1‑酮、 α‑松油醇、 枯名醛、 桃金娘烯醇、 2 ‑(4‑甲基苯基)丙 ‑2醇、 氧化石竹烯、 愈创醇对照品适量， 置于10mL容量瓶中， 加入乙酸乙酯溶解并稀释至刻度， 制 成左旋‑β‑蒎烯、 桧烯、 月桂烯、 (+) ‑柠檬烯、 桉油精、 γ ‑松油烯、 对伞花烃、 萜品油烯、 2 ‑壬 酮、 4‑侧柏醇、 乙酸龙脑酯、 β ‑石竹烯、 4 ‑萜烯醇、 ( ‑)‑桃金娘烯醛、 4 ‑异丙基环己 ‑2‑烯‑1‑ 酮、 α‑松油醇、 枯名醛、 桃金娘烯醇、 2 ‑(4‑甲基苯基)丙 ‑2醇、 氧化石竹烯、 愈创醇的储备液， 放置(‑20℃)冰箱保存备用。 8.根据权利要求6所述的大果木姜子油的多指标含量测定方法， 其特征在于： 所述S3 中 内标溶液的制备方法： 精密称取环己酮、 萘对照品， 置于10mL容量瓶中， 加乙酸乙酯溶解并 稀释至刻度， 制成环己酮(3.300mg ·mL‑1)、 萘(2.710mg ·mL‑1)的内标储备液。 分别精密量 取内标储备液适量至100mL容量瓶中， 用乙酸乙酯稀释至刻度， 配制成环己酮(150 μg ·mL‑ 1)、 萘(3 μg ·mL‑1)的内标 溶液， 放置( ‑20℃)冰箱保存备用。 9.根据权利要求6所述的大果木姜子油的多指标含量测定方法， 其特征在于： 所述S4中 供试品溶液的制备方法： 精密称 定大果木姜子油0.1 g， 置于20mL容量瓶中， 加乙酸乙酯溶解 并稀释至刻度， 精密量取1mL溶液置于10mL容量瓶中， 再分别精密加入1mL环己酮和萘内标 溶液加入乙酸乙酯稀释至刻度， 摇匀， 即得 供试品溶液， 平行2次。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115420832 A 3