(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211293312.7 (22)申请日 2022.10.21 (71)申请人 山东第一医科 大学 （山东省医学 科 学院） 地址 250000 山东省济南市历下区经十路 18877号 (72)发明人 侯海峰　董华蕾　孙冬梅　刘鹏程　 王小兵　 (74)专利代理 机构 济南泉城专利商标事务所 37218 专利代理师 陈娟 (51)Int.Cl. G01N 33/68(2006.01) G01N 33/574(2006.01) G01N 30/02(2006.01)G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01) G16H 10/20(2018.01) G16H 50/20(2018.01) G16H 50/30(2018.01) G16H 50/50(2018.01) (54)发明名称 基于血清中免疫球蛋白G Fc段N-糖基的食 管癌辅助诊断模型的建立方法及其应用 (57)摘要 本发明属于临床医学领域， 具体涉及一种基 于血清中免疫球蛋白G  Fc段N‑糖基的食管癌辅 助诊断模型的建立方法及其应用。 本发明所提供 的食管癌辅助诊断模型所基于的生物标志物为 免疫球蛋白G Fc段N‑糖基GP10,GP11,GP14,GP17 和GP23。 本发明提供的诊断模型基于血清中5个 初始免疫球蛋白G  N‑糖基水平进行构建， 模型简 单、 计算方便、 判断容易， 且模型对食管癌诊断的 准确度高、 灵敏度高、 特异性强， 远高于常规癌症 标志物CEA、 CA199的诊断。 本发明构建的食管癌 诊断模型为胃肠道健康的临床诊断提供了一种 有效、 可靠、 便捷的方法， 具有良好的胃肠 道健康 辅助诊断价 值。 权利要求书1页 说明书7页 附图1页 CN 115524502 A 2022.12.27 CN 115524502 A 1.一种食管癌诊断的生物标志物， 其特征在于， 所述生物标志物为免疫球蛋白G  Fc段 N‑糖基GP1,  GP2, GP3, GP4, GP5, GP6, GP7, GP10, GP8, GP9, GP10, GP11, GP12,  GP13, GP14, GP15, GP16, GP17, GP18, GP19, GP20, GP21, GP22, GP23 和 GP24。 2.根据权利要求1所述的生物标志物， 其特征在于， 所述生物标志物为免疫球 蛋白G Fc 段N‑糖基GP10, GP11, GP14, GP17 和 GP23。 3.一种基于权利要求1所述的生物标志物血清中免疫球蛋白G  Fc段N‑糖基的食管癌辅 助诊断模型的建立方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： （1） 基于UPLC法检测生物标志 物血清中免疫球蛋白G  Fc段N‑糖基的含量； （2） 通过Logistic回归建模， 基于 “GP10”，“GP11”，“GP14”，“GP17”，“GP23”免疫球蛋白G   N‑糖基建立食管癌诊断模型， 并确定模型截断值。 4.根据权利要求3所述的建立方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 具体过程为： 首先进行血 清IgG 的分离、 结合和洗脱； 再进行IgG  糖链酶切与变性、  去糖基化； 利用2 ‑氨基苯甲酰胺 （2‑AB） 荧光标记； 使用超高效液相色谱串 联质谱 （UPLC/MS） 进行糖基定量定性分析； 将糖基 峰析出的位置与糖基 峰高根据糖基数据库 （GlycoBase） 中标准糖基结构进行比对， 确 定测 出的糖基结构以及糖含量， 其检测结果以峰面积百分比的形式呈现。 5.根据权利要求3所述的建立方法， 其特 征在于， 所述模型截断值 为0.594。 6.一种如权利要求3 ‑5任一项所述的建立方法建立的食管癌辅助诊断模型的应用， 其 特征在于， 可作为用于评估胃肠道的健康状态、 食 管癌风险、 指导健康干预手段或者观测健 康干预后的效果的工具。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115524502 A 2基于血清中免疫球蛋白G  Fc段N‑糖基的食管癌辅助诊断模型 的建立方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明属于临床医学领域， 具体涉及一种基于血清中免疫球蛋白G  Fc段N‑糖基的 食管癌辅助诊断模型的建立方法及其应用。 背景技术 [0002]食管癌是全球癌症相关死亡率最高的原因之一， 每年导致40多万人死亡。 由于发 病率持续增加， 食管癌仍然是全球关注的公共卫生问题， 特别是在欠 发达地区， 食管癌的危 害更为严重。 我国是食管癌的高发国， 全球每年有约一半的食 管癌新病例发生中 国。 在我国 每年报告的所有恶性肿瘤中， 食 管癌的发病率排名第五位， 约为21.17/10万， 食 管癌的死亡 率排名第四位， 约为约为 15.58/10万。 食 管癌是一个发展较缓慢的癌症， 早期识别并及时开 展针对性的治疗对食管癌的防控至关重要。 系统研究表明， T1期的食管癌1年生存率可达 95.6%， 远高于T4期的1年生存率 （52.8%） ， 而T1期的食管癌5年生存率 （75.2%） ， 更是远高于 T4期的1年 生存率 （25.4%） 。 可 见， 早期筛查对 食管癌患者的预后意 义重大。 [0003]目前临床公认及沿用的食管癌早期筛查手段包括胃镜检查、 肿瘤标志物 （如CEA， CA19‑9等 ） 以及上消化道造影等检查项目。 其中胃镜检查已逐渐应用于食管癌的诊断， 但 胃镜检查的实施难度大， 对设备和操作人员的专 业能力要求高， 实施的便利性差， 费用高且 人群的可接受性低， 难以应用到广泛的人群筛查。 而肿瘤标志物和上消 化道造影尽管是低 门槛的无创性检查， 但是灵敏度和特异度低， 难以承担起人群筛查的任务。 因此， 亟待开发 一种可用于人群筛查的， 高通 量、 低费用的食管癌辅助诊断模型。 [0004]糖基化 （Glycosylation） 是普遍存在的脂质和蛋白质 翻译后修饰， 超过半数 的真 核生物发生蛋白质糖基修饰， 几乎所有的膜蛋白和分泌蛋白的生理功能都有糖基结构的参 与。 由于糖基化的非模版驱动、 单体众多并存在支链， 使得蛋白质的糖基化研究存在更多的 复杂性和多样性， 高通量的糖基检测和分析方法直到2008年才被开发出来， 大大落后于基 因组学、 转录组学和蛋白质组学研 究。 近期研究表 明， 免疫球蛋白G （IgG） 的  N‑糖基修饰参 与炎症性疾病、 自身免疫性疾病、 肿瘤和代谢类疾病等多种疾病的调控。 IgG是血液中最重 要的免疫球蛋白， 约占75%， 主要由脾、 淋巴结中的浆细胞合 成和分泌， 广泛参与固有免疫和 适应免疫。 IgG由抗原结合片断 （Fab段） 和结晶片断 （Fc段） 两部分构成。 每个IgG分子平均含 有2.8个N连接的糖基， 主要与Fc段第297个天门冬酰胺 （Asn297） 连接。 IgG的N糖基包括半乳 糖、 岩藻糖、 唾液酸和二等分乙酰葡萄胺， 主要结构是核心岩藻糖基化的复杂双天线型糖 链， 其末端含有0～2个半乳糖残基。 研究表明， 这些糖基化修饰， 在肿瘤的发病 过程中发挥 了重要作用。 现有技术中， 尚未有基于IgG  Fc段N‑糖基构建食管癌辅助诊断模型的相关记 载。 发明内容 [0005]针对现有技术中存在的问题， 本 发明提供了一种基于血清中免疫球蛋白G  Fc段N‑说　明　书 1/7 页 3 CN 115524502 A 3