(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211038805.6 (22)申请日 2022.08.29 (71)申请人 中国农业科 学院北京畜牧兽医研究 所 地址 100193 北京市海淀区 圆明园西路2号 中国农业科 学院北京畜牧兽医研究所 (72)发明人 杨悠悠　汤超华　张军民　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 关畅 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/08(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 基于气相色谱- 静电场轨道阱高分辨质谱进 行畜禽肉中风味化 合物差异鉴别的方法 (57)摘要 本发明公开了基于气相色谱 ‑静电场轨道阱 高分辨质 谱进行畜禽肉中风味化合物差异鉴别 的方法。 它包括如下步骤： 1)分离， 将待测畜禽肉 样本进行研磨处理， 得到的切碎的样品； 2)顶空 固相微萃取， 将所述切碎的样品进行顶空 固相微 萃取， 得到混合未知化合物； 3)鉴定， 将萃取得到 的混合未知化合物进行气相色谱 ‑静电场轨道阱 高分辨质谱， 得到GC ‑MS数据； 所述GC ‑MS数据通 过NIST和homeflav or库中的MS模式、 保留指数和 HRF处理识别， 得到所述待测畜禽肉样本所含的 化合物成分； 4)统计分析， 对3)中得到的化合物 成分进行统计 分析， 得到所述待测畜禽肉样本对 应的风味化合物。 本发明使用气相色谱法与高分 辨率轨道阱质谱法相结合， 并通过统计 分析工具 用于区分各种肉类类别并对畜禽肉进行真伪鉴 别。 权利要求书3页 说明书17页 附图4页 CN 115436510 A 2022.12.06 CN 115436510 A 1.一种基于气相色谱 ‑静电场轨道阱高分辨质谱进行畜禽肉中风味化合物差异鉴别的 方法， 包括如下步骤： 1)分离 将待测畜禽肉样本进行研磨处 理， 得到的切碎的样品； 2)顶空固相微萃取 将所述切碎的样品进行顶空固相微萃取， 得到混合未知化 合物； 3)鉴定 将萃取得到的混合未知化合物进行气相色谱 ‑静电场轨道阱高分辨质谱， 得到GC ‑MS数 据； 所述GC‑MS数据通过NIST和homeflavor库中的MS模式、 保留指数和HRF处理识别， 得到 所述待测畜禽肉样本所含的化 合物成分； 4)统计分析 对3)中得到的化合物成分进行统计分析， 得到所述待测畜禽肉样本对应的风味化合 物。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于： 所述待测畜禽肉样本包括鸭肉、 鸡肉、 牛 肉、 羊肉和猪肉中的至少一种； 所述待测畜禽肉样本的处理如下： 将待测畜禽肉去筋膜， 搅碎， 放入蒸煮袋， 并在80℃ 的水浴中蒸煮3 0分钟， 冷却后在液氮中研磨， 备用。 3.根据权利要求1或2所述的方法， 其特征在于： 所述顶空固相微萃取采用的纤维头类 型包括85 μm聚丙烯酸酯、 50 μm/30 μm二乙烯基苯/C arboxen/聚二甲基硅氧烷、 95 μm  Carbon  WR和30 μm PDMS中的至少一种。 4.根据权利要求1 ‑3中任何一项所述的方法， 其特征在于： 所述顶 空固相微萃取的流程 如下： 所述顶空固相微萃取的流程如 下： 所述切碎的样品加入2 ‑甲基‑3庚酮溶液， 装入PTFE ‑ 硅胶隔膜的磁性盖密封的容器中40～60℃孵育10～30min， 然后使用纤维头萃取， 萃取纤维 在进样口解吸附， 在连续分析之间， 萃取纤维在后进样口下老化。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于： 所述纤维头萃取的温度为37～65℃， 时间 为10～59mi n； 在所述进样口中解吸附的温度为23 0～270℃， 时间为1～8mi n； 所述后进样口老化的温度为23 0～270℃， 时间为10～3 0min。 6.根据权利要求1 ‑5中任何一项所述的方法， 其特征在于： 所述气相色谱 ‑静电场轨道 阱高分辨质谱的工作条件如下： 自动进样器： TriPlus  RSH； 质量分析仪： Trace  1310 GC的Q‑Exactive Orbitrap； 膜厚： 内径6 0m×0.25mm×0.25 μm； 色谱柱： VF ‑WAX ms； 恒定流速为1mL/mi n的氦气作为载气； 程序升温条件为： 40℃保持2分钟， 然后以4℃/分钟的速率升温至23 0℃， 保持5分钟； 传输线1和传输线2均设置为25 0℃；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115436510 A 2电离方式： 电子轰击电离70eV； 扫描方式： 全扫描； 分辨率： 60,000FWHM； 扫描范围： 3 0‑400m/z， 自动增益控制目标值 为1E6； MS离子源和传输线温度分别设置为280℃和25 0℃。 7.根据权利要求1 ‑6中任何一项所述的方法， 其特征在于： 步骤3)中， 所述数据的符合 如下任一即可判断所述待测畜禽肉样本所含的化 合物成分： a)HRF分数高于95； b)基于MS模式的匹配因子高于75 0； c)homeflavor库的保留指数差异小于20； d)NIST库的保留指数差异在5 0以内。 8.根据权利要求1 ‑7中任何一项所述的方法， 其特征在于： 所述统计分析通过如下方法 检验分析： 主成分分析、 t检验和偏最小二乘判别分析PLS ‑DA分析。 9.一种基于气相色谱 ‑静电场轨道阱高分辨质谱进行牛肉或羊肉真伪鉴别的方法， 包 括如下步骤： 1)分离 将待测畜禽肉样本进行研磨处 理， 得到的切碎的样品； 2)顶空固相微萃取 将所述切碎的样品进行顶空固相微萃取， 得到混合未知化 合物； 3)鉴定 将萃取得到的混合未知化合物进行气相色谱 ‑静电场轨道阱高分辨质谱， 得到GC ‑MS数 据； 所述GC‑MS数据通过NIST和homeflavor库中的MS模式、 保留指数和HRF处理识别， 得到 所述待测畜禽肉样本所含的化 合物成分； 4)统计分析 对3)中得到的化合物成分进行统计分析， 得到所述待测畜禽肉样本对应的风味化合 物； 5)将所述待测畜禽肉样本对应的风味化合物与已知牛肉或羊肉样本的风味化合物对 比差异化 合物的丰度倍数， 以鉴别牛肉或羊肉的真伪。 10.根据权利要求9中所述的方法， 其特征在于： 步骤5)中， 当进行牛肉真伪鉴别时， 所 述待测畜禽肉样本对应的风味化合物与已知牛肉样 本的风味化合物对比如下A1) ‑H1)差异 化合物， 当所述差异化合物的丰度倍数满足如下范围， 且p值均小于0.01时， 则 所述待测畜 禽肉样本可能为鸭肉， 结果判定为所述待测畜禽肉样本不是 牛肉和/或不是 纯牛肉： A1)2E,4E ‑癸二烯醛19.20～ 27.32； B1)2E‑庚烯醛6.91～ 9.77； C1)2‑戊基呋喃3.67～5.28； D1)1‑辛烯‑3‑醇4.34～6.3 6； E1)2‑正辛基呋喃17.41～ 25.62；权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115436510 A 3