(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210905447.8 (22)申请日 2022.07.29 (71)申请人 广东一方制药有限公司 地址 528244 广东省佛山市南海区里 水镇 旗峰工业 开发区 (72)发明人 周湘媛　马懿飞　卢晓莹　丘娴　 曹斯琼　杨小龙　李振雨　何民友　 魏梅　孙冬梅　陈向东　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 苏婕 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 决明子的指纹图谱构建与检测方法、 基础鉴 定的构建方法及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种决明子的指纹图谱构建 方法， 包括如下步骤： 取红链霉素 ‑6‑O‑β‑D‑龙 胆双糖苷对照品与橙黄决明素对照品， 制备混合 对照品溶液； 取决明子样品， 制备供试品溶液； 将 所述混合对照品溶液与所述供试品溶液分别进 行超高效液相色谱分析， 构建决明子的指纹图 谱； 其中， 超高效液相色谱分析的条件包括： 流动 相A为乙腈与甲醇的混合溶液， 流动相B为磷酸水 溶液； 采用梯度洗脱。 该方法具有操作 简单、 图谱 信息丰富、 特征性强并且重现性好的优势， 为决 明子药材的质量控制提供了较为全面、 有效的快 速评价方法。 权利要求书2页 说明书22页 附图18页 CN 115372503 A 2022.11.22 CN 115372503 A 1.一种决明子的指纹图谱构建方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 取红链霉素 ‑6‑O‑β‑D‑龙胆双糖苷对照品与橙黄决明素对照品， 制备混合对照品溶 液； 取决明子样品， 制备 供试品溶液； 将所述混合对照品溶液与 所述供试品溶液分别进行超高效液相色谱分析， 构建决明子 的指纹图谱； 其中， 超高效液相色谱分析的条件包括： 流动相A为乙腈与甲醇的混合溶液， 流动相B为 磷酸水溶液； 采用梯度洗脱； 所述梯度洗脱的程序为： 0min～8min， 流动相A的体积百分数为 24％； 8min～15min， 流动相A的体积百分数由24％变化至27％； 15min～2 0min， 流动相A的体 积百分数由27％变化至33％； 20min～25min， 流动相A的体积百分数由33％变化至50％； 25min～30min， 流动相A的体积百分数保持为50％； 30min～ 35min， 流动相A的体积百分数从 50％变化至65％； 35min～40min， 流动相A的体积百分数从65％变化至9 5％； 40min～45min， 流动相A的体积百分数保持为95％。 2.根据权利要求1所述的决明子的指纹图谱构建方法， 其特征在于， 所述磷酸水溶液 中， 磷酸的体积分数为0.1％～0.3％。 3.根据权利要求1所述的决明子的指纹图谱构建方法， 其特征在于， 所述流动相A中， 乙 腈与甲醇的体积比为 4:1。 4.根据权利要求1所述的决明子的指纹图谱构建方法， 其特征在于， 超高效液相色谱分 析的条件还包括： 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱； 柱温为28℃～32℃； 流速为0.28mL/ min～0.32mL/mi n； 波长为280nm～ 290nm。 5.根据权利要求1所述的决明子的指纹图谱构建方法， 其特征在于， 制备混合对照品溶 液包括如下步骤： 将所述红链霉素 ‑6‑O‑β‑D‑龙胆双糖苷对照品、 所述 橙黄决明素对照品与甲醇 混合。 6.根据权利要求1所述的决明子的指纹图谱构建方法， 其特征在于， 制备供试品溶液包 括如下步骤： 将所述决明子样品粉碎并过筛， 与70％甲醇 混合， 加热回流 提取， 然后过 滤， 取滤液。 7.根据权利要求1～6所述的决明子的指纹图谱构建方法， 其特征在于， 所述决明子样 品的药材来源包括钝叶决明与小决明 中的一种或多种。 8.权利要求1～7任一项所述的决明子的指纹图谱构建方法所构建获得的指纹图谱在 鉴别不同基原的决明子、 鉴别决明子与望江南或鉴别决明子生品与炮制品中的应用。 9.一种决明子的检测方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 取决明子样品， 制备待测溶 液； 将所述待测溶 液进行超高效液相色谱分析； 其中， 超高效液相色谱分析的条件包括： 流动相A为乙腈与甲醇的混合溶液， 流动相B为 磷酸水溶液； 采用梯度洗脱； 所述梯度洗脱的程序为： 0min～8min， 流动相A的体积百分数为 24％； 8min～15min， 流动相A的体积百分数由24％变化至27％； 15min～2 0min， 流动相A的体 积百分数由27％变化至33％； 20min～25min， 流动相A的体积百分数由33％变化至50％； 25min～30min， 流动相A的体积百分数保持为50％； 30min～ 35min， 流动相A的体积百分数从 50％变化至65％； 35min～40min， 流动相A的体积百分数从65％变化至9 5％； 40min～45min， 流动相A的体积百分数保持为95％。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115372503 A 210.根据权利要求9所述的决明子的检测方法， 其特征在于， 所述磷酸水溶液中， 磷酸的 体积分数为0.1％～0.3％。 11.根据权利要求9所述的决明子的检测方法， 其特征在于， 所述流动相A中， 乙腈与甲 醇的体积比为 4:1。 12.根据权利要求9～11任一项所述的决明子的检测方法， 其特征在于， 超高效液相色 谱分析的条件还包括： 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱； 柱温为28℃～32℃； 流速为 0.28mL/mi n～0.32mL/mi n； 波长为280nm～ 290nm。 13.一种决明子的高分辨质谱成分基础鉴定的构建方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 取决明子样品， 制备 供试品溶液； 将所述供 试品溶液进行超高效液相色谱与质谱联用分析； 其中， 超高效液相色谱分析的条件包括： 流动相A为乙腈与甲醇的混合溶液， 流动相B为 冰乙酸水溶液； 采用梯度洗脱； 所述梯度洗脱的程序为： 0 min～8min， 流动相A的体积百分数 为24％； 8min～15min， 流动相A的体积百分数由24％变化至27％； 15min～20min， 流动相A的 体积百分数由27％变化至33％； 20min～25min， 流动相 A的体积百分数由33％变化至50％； 25min～30min， 流动相A的体积百分数保持为50％； 30min～ 35min， 流动相A的体积百分数从 50％变化至65％； 35min～40min， 流动相A的体积百分数从65％变化至9 5％； 40min～45min， 流动相A的体积百分数保持为95％。 14.根据权利要求13所述的决明子的高分辨质谱成分基础鉴定的构建方法， 其特征在 于， 所述磷酸水 溶液中， 冰乙酸的体积分数为0.1％～0.3％。 15.根据权利要求13所述的决明子的高分辨质谱成分基础鉴定的构建方法， 其特征在 于， 所述流动相A中， 乙腈与甲醇的体积比为 4:1。 16.根据权利要求13所述的决明子的高分辨质谱成分基础鉴定的构建方法， 其特征在 于， 超高效液相色谱分析的条件还包括： 色谱柱为十 八烷基硅烷键合硅胶柱； 柱温为28℃～ 32℃； 流速为0.28mL/mi n～0.32mL/mi n； 波长为280nm～ 290nm。 17.根据权利要求13所述的决明子的高分辨质谱成分基础鉴定的构建方法， 其特征在 于， 制备供试品溶液包括如下步骤： 将所述决明子样品粉碎并过筛， 与70％甲醇 混合， 加热回流 提取， 然后过 滤， 取滤液。 18.根据权利要求13～17任一项所述的决明子的高分辨质谱成分基础鉴定的构建方 法， 其特征在于， 质谱分析的条件包括： 鞘气流速为30arb～40arb； 辅助气流速为8arb～ 12arb； 喷雾电压为3kV～ 3.5kV； S‑lens电压为45V～55V； 加热温度为32 0℃～380℃； 毛细管 温度为320℃～380℃； 采用正离子模式和/或负离子模式； 扫描范围为100m/z～1500m/z； 归一化碰撞能量为 20eV～40eV。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115372503 A 3