(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210997817.5 (22)申请日 2022.08.19 (71)申请人 辽宁中医药大学 地址 110847 辽宁省沈阳市皇姑区崇山 东 路79号 (72)发明人 孟宪生　于浩　李天娇　包永睿　 王帅　孟莹　郑莹　 (74)专利代理 机构 沈阳亚泰专利商标代理有限 公司 21107 专利代理师 史力伏 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/30(2006.01)G01N 30/32(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 侧柏叶药材的质量双标可视化质 量控制技 术 (57)摘要 本发明公开了一种侧柏叶药材的质 ‑量双标 可视化质量控制技术， 属于中药质量控制技术领 域。 本发明采用HPLC技术 建立侧柏叶对照药材的 特征图谱， 将其与供试药材图谱进行比对来辨别 药材的真伪， 即 “质”； 采用内标物质对特征峰化 学成分进行相对定量来区分药材的优劣， 即 “量”。 建立的侧柏叶药材 “质‑量”分析方法符合 方法学考察要求， 各供试药材与对照药材的相似 度均大于0.98； 规定了侧柏叶药材特征峰化学 成 分相对含量下限。 该方法利用度高、 重复性好， 能 够完善中药材质量控制体系， 减 轻企业质检部门 的经济负担， 以期推动中 医药事业可持续发展。 权利要求书2页 说明书5页 附图2页 CN 115326973 A 2022.11.11 CN 115326973 A 1.一种侧 柏叶药材质量控制标准的建立方法， 其特 征在于， 所述方法包括以下步骤： 步骤1 基于对照药 材的侧柏叶药材定性研究； 步骤2 基于内标物质的特 征峰化学成分相对定量研究； 步骤3 方法学考 察。 2.根据权利要求1所述的一种侧柏叶药材质量控制标准的建立方法， 其特征在于， 所述 步骤1的具体步骤 包括： （1） 溶液的制备： 取侧柏叶对照药材及 供试药材粉末， 精密加入50倍量的80%甲醇， 称定 重量， 超声30  min， 放冷， 补足失重， 摇匀， 滤过； 续滤液挥干， 80%甲醇定容， 摇匀， 过0.22  μm 滤膜， 即得； （2） 色谱条件与系统适用性试验： 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Agilent   Poroshell  120 SB‑C18 （4.6 mm×100 mm， 2.7 μm） ； 流动相： 0.1%甲酸水 （A） —乙腈 （B） ， 进 行梯度洗脱； 流速： 0.8  mL/min； 柱温： 3 0℃； DAD 检测器波长： 254  nm； 进样量： 5 μL； （3） 特征图谱的建立： 每份样品平行2次， 按色谱条件依次进样检测， 将254  nm波长下的 图谱数据由分析检测仪器中导出获得10批供试药材的HPLC叠加图谱； 10批供试药材使用中 位数进行自动匹配， 加以多点校正， 生成共有模式R， 与对照药 材特征图谱进行比对； （4） 相似度评价： 以特征峰的相似度明确侧柏叶药材真伪； 供试药材与对照药材的相似 度均大于 0.98； （5） 特征峰化学成分解析： 采用Q ‑TOF‑MS技术， 通过分析化合物的保留时间、 一级离子 质荷比以及二级离 子碎片信息， 并与相关文献报道信息进行匹配， 共鉴定出 7个化学成分； （6） 中药材 （饮片） 可视化的质 ‑量双标质量控制方法程序： 利用Visual  Basic编程语言 设计包含1个 OEL控件和4个Command控件的适用于侧柏叶药材 （饮片） 可视化的质 ‑量双标质 量控制程序。 3.根据权利 要求2所述的方法， 其特征在于， 所述 （5） 中鉴定出7个化学成分分别为： （8） 号峰为杨梅苷、 （9） 号峰为异槲皮苷、 （12） 号峰为槲皮苷、 （13） 号峰为杨梅素、 （14） 号峰为山 奈酚、 （16） 号峰为 穗花衫双黄酮和 （18） 号峰为扁柏双黄酮。 4.根据权利要1所述的侧柏叶药材质量控制标准的建立方法， 其特征在于， 所述步骤2 的具体步骤 包括： 以步骤1中确定的12号峰 “槲皮苷”作为内标物质， 通过内标物质化学成分准确定量， 计 算供试药材特征峰化学成分的相对含量； 取 “中位数‑标准差”作为特征峰化学成分相对于 内标物质化学成分的相对 含量下限。 5.根据权利要求1一种侧柏叶药材质量控制方法， 其特征在于， 所述步骤2 的特征峰均 为侧柏叶发挥其功效及药理作用的特 征活性化学成分。 6.根据权利要求1所述的一种侧柏叶药材质量控制标准的建立方法， 其特征在于， 所述 步骤3的具体步骤 包括： （1） 精密度实验： 精密吸取同一供试品溶液， 按色谱条件测定， 连续进样6次， 测定各色 谱峰相对保留时间、 相对峰面积， 计算相对标准偏差； 各色谱峰相对保留时间RSD不高于 0.15%， 相对峰面积RS D不高于1.6 6%， 表明供 试品溶液在24 h内稳定； （2） 稳定性试验： 精密吸取同一供试品溶液， 按色谱条件， 分别在0、 2、 4、 8、 12、 24  h进样 6次检测， 测定各色谱峰相对保留时间、 相对峰面积， 计算相对标准偏差； 各色谱峰相对保留权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115326973 A 2时间RSD不高于0.13%， 相对峰面积RS D值不高于1.9 %， 表明方法重复性良好； （3） 重复性实验： 按供试品溶液制备方法制备6份供试样品， 按色谱条件， 分别进样检 测， 测定各色谱峰相对保留时间、 相对峰面积， 计算相对标准偏差； 各色谱 峰相对保留时间 RSD不高于0.13%， 相对峰面积RS D值不高于1.9 %， 表明方法重复性良好； （4） 线性关系考察： 配制 “槲皮苷”的6个质量浓度溶液， 按色谱条件， 分别进样检测， 以 质量 （X） 为横坐标， 峰面积 （Y） 为 纵坐标， 绘制标准曲线并进 行线性回归， 得到线性回归方程 （Y=2461X＋4.05） 、 相关系数 （r=0.9999） 和线 性范围 （0.067~1.693 μg） ； 结果表明内标物质 在进样量范围内与峰面积呈良好的线性关系。 7.根据权利要求1所述的一种侧柏叶药材质量控制标准的建立方法， 其特征在于， 所述 方法通过侧柏叶药材特征图谱中的特征峰作为侧柏叶药材的定性标准， 能够明确鉴定药材 的真伪。 8.根据权利要求1所述的一种侧柏叶药材质量控制标准的建立方法， 其特征在于， 所述 方法通过建立的特征峰相对含量的计算方法确定的各特征峰相对含量的下限， 能够区分侧 柏叶的优劣。 9.根据权利要求1所述的一种侧柏叶药材质量控制标准的建立方法， 其特征在于， 所述 方法通过Visual  Basic编程语 言设计的可视化的质 ‑量双标质量控制程序适用于侧柏叶药 材 （饮片） 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115326973 A 3