(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210902340.8 (22)申请日 2022.07.29 (71)申请人 丹东药业 集团有限公司 地址 118303 辽宁省丹东市高新 技术产业 开发区A- 027号 (72)发明人 孟宪生　于洋　包永睿　王帅　 李天娇　张凌巍　马英捷　王丽媛　 (74)专利代理 机构 沈阳利泰专利商标代理有限 公司 21209 专利代理师 史进斗 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/34(2006.01)G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) G01N 21/33(2006.01) (54)发明名称 仙灵脾颗粒二维多息参比内标质 量控制方 法 (57)摘要 仙灵脾颗粒二维多息参比内标质 量控制方 法， 属于中药质量控制技术领域， 包括基于多批 次仙灵脾颗粒确定特征峰 的研究， 基于内标物质 的特征峰化学成分相对定量研究。 具体为： 内标 物溶液的制备、 混合对照品溶液的制备、 供试品 溶液的制备、 高效液相色谱法和二维多息特征图 谱的建立。 多批次仙灵脾颗粒， 取 “平均数‑标准 差”作为特征峰化学成分相对于内标物质化学成 分的相对含量下限。 本方法可以弥补目前仙灵脾 颗粒质量控制方法中只有单一的理化鉴定的不 足。 方法稳定性、 重复性 好， 特征明显。 权利要求书1页 说明书6页 附图6页 CN 115480001 A 2022.12.16 CN 115480001 A 1.仙灵脾颗粒二维多息参比内标质量控制方法， 其特 征在于， 所述方法包括以下步骤： 步骤1、 基于多批次仙灵脾颗粒确定特 征峰的研究。 2.根据权利要求1所述的仙灵脾颗粒二维多息参比内标质量控制方法， 其特征在于， 所 述方法包括以下步骤： 所述步骤1的具体步骤 包括： (1)内标物溶 液的制备： 取柚皮苷对照品， 加甲醇制成浓度为0.23 64mg/mL的储备 液； (2)混合对照品溶液的制备： 精密称取绿原酸、 金丝桃苷、 淫羊藿属苷A、 朝藿定A、 朝藿 定B、 朝藿定C、 淫羊藿苷、 宝藿苷 Ⅱ和柚皮苷对照品， 置于同一10mL容量瓶中， 加甲醇定容至 刻度摇匀， 即得到质量浓度分别为0.0135mg/mL、 0.0839mg/mL、 0.00 75mg/mL、 0.033 7mg/mL、 0.0318mg/mL、 0.020 3mg/mL、 0.0287mg/mL、 0.0 045mg/mL、 0.0215mg/mL的混合对照品溶 液； (3)供试品溶液的制备： 取多份研磨后的仙灵脾颗粒粉末各5g， 精密称定， 置具塞锥形 瓶中， 精密加入加入50mL的体积浓度的70％甲醇水溶液， 密塞， 称定重量， 超声处理1h， 放 冷， 称定重量， 用体积浓度70％甲醇水溶液补足缺失的重量， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 滤液蒸 至浸膏， 体积浓度70％甲醇水溶液复溶并定容至到10mL容量瓶中得仙灵脾颗粒样 品溶液， 另取5mL容量瓶， 准确加入1mL柚皮苷储备液， 再加仙灵脾颗粒样品溶液至刻度， 混匀， 经 0.22 μm微孔滤膜过 滤， 即得供试品溶液； (4)色谱条件与系统适用性试验： 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱， 色谱 柱规格为4.6 ×150mm， 2.7μm； 以体积浓度0.5％甲酸水溶液为流动相 A， 以乙腈为流动相B， 进行梯度洗脱； 梯度洗脱程序： 0～8min， 5％～7％B； 8～10min， 7％～9％B； 10～14min， 9％ ～14％B； 14～ 18min， 14％～ 15％B； 18～26min， 15 ％～22％B； 26～30min， 22％～24％B； 30 ～35min， 24％～30％B； 35～40min， 30％～37％B； 40～45min， 37％～52％B； 流速0.8mL/ min； 柱温30℃； DAD检测器在波长270nm、 327nm、 3 53nm下进行检测； 进样量5 μL； (5)特征图谱的建立： 每份样品按色谱条件依次进样检测， 将270nm、 327nm、 353nm波长 下的图谱数据由色谱工作站 导出并进 行多波长融合， 融合后的图谱导入中药色谱指纹图谱 相似度评价系统， 中位数法设定一批次1的仙灵脾颗粒的高效液相图谱为对照图谱， 时间窗 宽度设为0.1mi n， 得到多个批次的仙灵脾颗粒二维多息特 征图谱与对照图谱 共有模式图。 3.根据权利要求2所述的仙灵脾颗粒二维多息参比内标质量控制方法， 其特征在于， 所 述方法包括以下步骤： 超声处理功率20 0W， 频率40kHZ。 4.根据权利要求1所述的仙灵脾颗粒二维多息参比内标质量控制方法， 其特征在于， 所 述方法包括以下步骤： 还有步骤2包括： 多批次仙灵脾颗粒加柚皮苷， 取 “平均数‑标准差”作为特征峰化学成分相对于内标物 质化学成分的相对 含量下限。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115480001 A 2仙灵脾颗粒二维多息参比内标质量控制方 法 技术领域 [0001]本发明属于中药质量控制技术领域， 特别涉及仙灵脾颗粒二维多息参比内标质量 控制方法。 背景技术 [0002]中药配方颗粒是中药饮片一种现代应用形 式， 仙灵脾颗粒为淫羊藿单味药材所制 的中成药， 且多品种入药， 其功能主治为补肾强心、 壮阳通痹。 用于阳痿遗精、 筋骨痿软， 胸 闷头晕、 气短乏力及风湿痹痛等(也用于性机能减退的阳痿遗精， 也可用于冠心病， 更年期 高血压， 胸闷气短及风湿症)， 在临床上广泛应用， 原标准收载于部颁标准中药成方制剂第 十册， 只有一项理化 鉴别， 无含量测定， 质量可控性差 。 [0003]高效液相色谱法具有高速、 高效及高灵敏度的优点,可作为二维多息特征 图谱的 技术支撑。 《中国药典》 (2015年版)一部收载了24个品种的特征图谱。 《中国药典》 (2020年 版)较 《中 国药典》 (2015年版)增加了4个品种的特征图谱， 可见在中药及其成方制剂的复杂 体系中， 特 征图谱技 术在中药质量控制领域的应用得以显著增长， 未来 仍旧有增长的趋势。 发明内容 [0004]本发明提供仙灵脾颗粒二维多息参比内标质量控制方法， 为一种仙灵脾颗粒质量 控制方法。 本方法稳定性、 重复性好， 特征明显， 能够表征仙灵脾颗粒的特征 活性化学成分， 并且简单、 成本低， 可全面的反映仙灵脾颗粒质量。 [0005]仙灵脾颗粒二维多息参比内标质量控制方法， 包括以下步骤： [0006]步骤1、 基于多批次仙灵脾颗粒确定特 征峰的研究。 [0007]步骤2、 基于内标物质的特 征峰化学成分相对定量研究。 [0008]步骤3、 方法学考 察。 [0009]进一步地， 所述步骤1的具体步骤 包括： [0010](1)内标物溶液 的制备： 精密称取柚皮苷对照品0.00591g， 置25mL容量瓶中， 加甲 醇定容至刻度， 摇匀， 得到质量浓度为0.2364mg/mL的储 备液(S)， 置棕色容量瓶中， 放冰箱4 ℃保存。 [0011](2)混合对照品溶液的制备： 精密称取绿原酸、 金丝桃苷、 淫羊藿属苷A、 朝藿定A、 朝藿定B、 朝藿定C、 淫羊藿苷、 宝藿苷 Ⅱ和柚皮苷对照品适量， 置于同一10 mL容量瓶中， 加甲 醇定容至刻度摇匀， 即得到质量浓度分别为0.0135mg/mL、 0.0839mg/mL、 0.0075mg/mL、 0.0337mg/mL、 0.0318mg/mL、 0.0203mg/mL、 0.0287mg/mL、 0.0045mg/mL和0.0215mg/mL的混 合对照品溶 液。 [0012](3)供试品溶液的制备： 分别取10个批次的仙灵脾颗粒(研磨， 过60目筛)各5g， 精 密称定， 各自置具塞锥形瓶中， 分别精密加入50mL的体积浓度为70％甲醇水溶液， 密塞， 称 定重量， 超声处理(功率200W， 频率40kHZ)1h， 放冷， 称定重量， 用体积浓度为70％甲醇水溶 液补足缺 失的重量， 摇匀， 过滤， 取续滤液， 滤液蒸至浸膏， 体积浓度为70％甲醇甲醇水溶液说　明　书 1/6 页 3 CN 115480001 A 3