(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210932265.X (22)申请日 2022.08.04 (71)申请人 华润三九现代中药制药有限公司 地址 516000 广东省惠州市惠城区南岸路 199号 (72)发明人 江斌　刘华明　张辉　赵伟志　 谭沛　李璐　 (74)专利代理 机构 北京三聚阳光知识产权代理 有限公司 1 1250 专利代理师 周卫赛 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种鹅不食草的药物制剂的指纹图谱的构 建方法及含量测试方法 (57)摘要 本发明涉及中药制剂检测领域， 具体提供了 一种鹅不食草的药物制剂的指纹图谱的构建方 法及含量测试方法， 采用供试品溶液进行超效液 相色谱检测， 色谱条件包括， 采用Agilent   InfinityLabPoroshell  120SB‑Aq色谱柱， 以乙 腈为流动相A、 以0.2％的磷 酸溶液为流动相B， 按 照说明中所定义的程序进行洗脱。 本发明可以有 效且全面的对鹅不食草的药物制剂进行检测。 权利要求书3页 说明书27页 附图8页 CN 115389654 A 2022.11.25 CN 115389654 A 1.一种鹅不食草的药物制剂的指纹图谱的构建方法， 其特 征在于， 制备供试品溶液； 采用超高效液相色谱法对供试品溶液进行检测， 色谱条件包括， 采用Agilent   InfinityLab  Poroshell  120SB‑Aq色谱柱， 以乙腈为流动相A、 以含磷酸的水溶液为流动相 B， 按照如下程序进行梯度洗脱： 0‑15min， 流动相A与流动相B的体积比为3％： 97％ →8％： 92％， 15‑20min， 流动相A与流动相B的体积比为8％： 9 2％→12％： 88％， 20‑50min， 流动相A与流动相B的体积比为12％： 9 2→20％： 80％， 50‑60min， 流动相A与流动相B的体积比为20％： 8 8％→20％： 80％， 60‑70min， 流动相A与流动相B的体积比为20％： 80％ →25％： 75％， 70‑90min， 流动相A与流动相B的体积比为25％： 75％ →30％： 70％， 90‑100min， 流动相A与流动相B的体积比为3 0％： 70％ →35％： 65％； 洗脱时间<55 ‑65分钟， 检测波长为320 ‑330nm， 洗脱时间≥55 ‑65分钟， 检测波长为210 ‑ 230nm， 柱温为23 ‑27℃， 流速为0.19 ‑0.25mL/mi n。 2.根据权利要求1所述的构建方法， 其特征在于， 采用规格为2.1 ×150mm， 1.9μm的 Agilent InfinityLab  Poroshell 120SB‑Aq色谱柱； 和/或， 所述供试品溶液的进样量为1 ‑ 3 μL； 和/或， 流速为0.20 ‑0.25mL/min； 和/或， 含磷酸的水溶液中磷酸的体积百分数为0.1 ‑ 0.4％。 3.根据权利要求1或2所述的构建方法， 其特征在于， 所述供试品溶液的制备方法为： 称 取供试品， 加溶剂提取， 得到提取液， 固液分离， 取液体， 即为供试品溶液， 优选地， 所述供试 品溶液的制备 方法还满足如下A ‑E中的任意 一项或者多 项： A、 供试品的质量与溶剂的体积之比为0.3 ‑0.5： 10‑50； 质量与体积的关系为g/mL； B、 提取方式为回流 提取或者超声提取； C、 提取时间为≥10mi n， 优选为15 ‑60min； D、 所述固液分离 选自离心或者滤膜过 滤； E、 溶剂选自水、 甲醇和乙醇中的至少一种， 优选为水或者甲醇水 溶液。 4.根据权利要求1 ‑3中任一所述的构建方法， 其特征在于， 所述的构建方法还包括采用 咖啡酸、 绿原酸、 3,4 ‑O‑二咖啡酰奎宁酸、 3,5 ‑O‑二咖啡酰奎宁酸、 4,5 ‑O‑二咖啡酰奎宁酸、 隐绿原酸、 芦丁、 山金车内酯D、 小堆心菊素C和山柰酚 ‑3‑O‑芸香糖苷 中的至少一种加溶剂 制备对照品溶液 的步骤， 以及按照权利要求1 ‑4中任一所述的构建方法中的超高效液相色 谱法检测对照品溶液得到对照品图谱的步骤； 优选地， 所述溶剂选自甲醇、 乙醇和水中的至 少一种。 5.根据权利要求1 ‑4中任一所述的构建方法， 其特征在于， 所述鹅不食草的药物制 剂的 指纹图谱 具有26个共有特征峰， 以绿原酸、 3,5 ‑二‑O‑咖啡酰奎宁酸、 短叶老鹳草素A相对应 的峰分别 为S1峰、 S2峰、 S3峰， 峰1～峰12与S1峰的相对保留时间在规定值的 ±10％范围之 内， 规定值为： 0.15(峰1)、 0.25(峰2)、 0.34(峰3)、 0.43(峰4)、 0.51(峰5)、 0.61(峰6)、 0.89 (峰7)、 0.9 6(峰8)、 1.00(峰9)、 1.22(峰10)、 1.33(峰11)、 1.53(峰12)； 峰13～峰22与S2峰的 相对保留时间在规定值的 ±10％范围之内， 规定值为： 0.77(峰13)、 0.80(峰14)、 0.84(峰 15)、 0.93(峰16)、 0.94(峰17)、 1.00(峰18)、 1.07(峰19)、 1.10(峰2 0)、 1.22(峰21)、 1.24(峰权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115389654 A 222)； 峰23～峰26与S3峰的相对保留时间在规定值的 ±10％范围之内， 规定值为： 0.78(峰 23)、 0.86(峰24)、 0.97(峰25)、 1.0 0(峰26)。 6.一种鹅不食草的药物制剂的含量测试 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 制备供试品溶液和对照品溶 液； 采用超高效液相色谱法对供试品溶液和对照品溶液进行检测， 色谱条件包括， 采用 Agilent InfinityLab  Poroshell 120SB‑Aq色谱柱， 以乙腈为流动相A、 以含磷 酸的水溶液 为流动相B， 按照如下程序进行梯度洗脱： 0‑15min， 流动相A与流动相B的体积比为3％： 97％ →8％： 92％， 15‑20min， 流动相A与流动相B的体积比为8％： 9 2％→12％： 88％， 20‑50min， 流动相A与流动相B的体积比为12％： 9 2→20％： 80％， 50‑60min， 流动相A与流动相B的体积比为20％： 8 8％→20％： 80％， 60‑70min， 流动相A与流动相B的体积比为20％： 80％ →25％： 75％， 70‑90min， 流动相A与流动相B的体积比为25％： 75％ →30％： 70％， 90‑100min， 流动相A与流动相B的体积比为3 0％： 70％ →35％： 65％； 洗脱时间<55 ‑65分钟， 检测波长为320 ‑330nm， 洗脱时间≥55 ‑65分钟， 检测波长为210 ‑ 230nm， 柱温为23 ‑27℃， 流速为0.19 ‑0.25mL/mi n。 7.根据权利要求6所述的含量测定方法， 其特征在于， 采用规格为2.1 ×150mm， 1.9 μm的 Agilent InfinityLab  Poroshell  120SB‑Aq色谱柱； 和/或， 所述供试品溶液和/或对照品 溶液的进样量为1 ‑3 μL； 和/或， 流速为0.20 ‑0.25mL/min； 和/或， 含磷酸的水溶液中磷酸的 体积百分数为0.1 ‑0.4％。 8.根据权利要求6或7所述的含量测定方法， 其特征在于， 所述供试品溶液的制备方法 为： 称取供试品， 加溶剂提取， 得到提取液， 固液分离， 取液体， 即为供试品溶液， 优选地， 所 述供试品溶液的制备 方法还满足如下A ‑E中的任意 一项或者多 项： A、 供试品的质量与溶剂的体积之比为0.3 ‑0.5： 10‑50， 优选为0.4： 10 ‑50； 质量与体积 的关系为g/mL； B、 提取方式为回流 提取或者超声提取； C、 提取时间为≥10mi n， 优选为15 ‑60min； D、 所述固液分离 选自离心或者滤膜过 滤； E、 溶剂选自水、 甲醇和乙醇中的至少一种。 9.根据权利要求6 ‑8中任一所述的含量测定方法， 其特征在于， 采用绿原酸、 新绿原酸、 隐绿原酸、 芦丁、 3,4 ‑O‑二咖啡酰奎宁酸、 3,5 ‑O‑二咖啡酰奎宁酸、 4,5 ‑O‑二咖啡酰奎宁酸、 短叶老鹳草素A和咖啡酸中的至少一种加溶剂制备对照品溶液， 优选地， 所述溶剂选自甲 醇、 乙醇和水中的至少一种。 10.一种鹅不食草的药物制剂的质量检测方法， 其特征在于， 包括将待测鹅不食草产品 的指纹图谱与鹅不食草的药物制剂的对照 指纹图谱进 行比较的步骤和/或采用权利要求6 ‑ 9中任一所述的鹅不食草的药物制剂的含量测试方法测定待测鹅不食草产品的含量的步 骤； 所述待测鹅不食草产品的指纹图谱为使用待测鹅不食草产品按照权利要求1 ‑5中任一 所述的构建方法构建得到， 所述鹅不食草的药物制剂的对照指纹 图谱选自如下(1) ‑(3)中 的任意一项：权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115389654