(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211016858.8 (22)申请日 2022.08.24 (71)申请人 浙江惠松制药有限公司 地址 310000 浙江省杭州市经济技 术开发 区25号大街39号 (72)发明人 龚行楚　丁丰　郑猛　郑致远　 马全民　聂复礼　刘轮辉　邱训叶　 汪娟　温浩　 (74)专利代理 机构 杭州天勤知识产权代理有限 公司 33224 专利代理师 高燕 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的 含量测定方法 (57)摘要 本发明公开了一种鱼腥草芩蓝合剂中间体 核苷类成分的含量测定方法， 所述的鱼腥草芩蓝 合剂中间体核苷 类成分包含尿苷和鸟苷， 包括以 下步骤： (1)取鱼腥草芩蓝合剂中间体配制供试 品溶液； 取尿苷对照品和鸟苷对照品配制混合对 照品溶液； (2)将混合对照品溶液和供试品溶液 进行液相色谱分析测定， 液相色谱条件为： 色谱 柱： Waters  Atlantis  T3色谱柱； 以水作为流动 相A， 以乙腈作为流动相B进行梯度洗脱； (3)记 录 色谱图， 按外标法以峰面积计算， 得到供试品溶 液中核苷类成分含量。 本发明方法分析时间短、 仪器要求低、 易于实施、 准确可靠， 可以弥补现有 技术中对于药效成分和 中间体质量控制的不足 的缺陷。 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 CN 115372516 A 2022.11.22 CN 115372516 A 1.一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： (1)取鱼腥草芩蓝合剂中间体配制供试品溶液； 取尿苷对照品和鸟苷对照品配制混合 对照品溶 液； (2)将混合对照品溶液和供试品溶液进行液相色谱分析测定， 液相色谱条件为： 色谱 柱： Waters  Atlantis  T3色谱柱， 100mm ×2.1mm， 3 μm； 以水作为流动相A， 以乙腈作为流动相 B进行梯度洗脱； 洗脱程序： 0 ‑5min， 0％‑5％B； 5‑10min， 5％B； 10 ‑15min， 5％‑8％B； (3)记录色谱图， 按外标法以峰面积计算， 得到供 试品溶液中核苷类成分含量。 2.根据权利要求1所述的鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法， 其特征 在于， 所述的鱼腥草芩蓝合剂 中间体为鱼腥草芩蓝合剂制备过程中的水提浓缩液； 所述的 鱼腥草芩 蓝合剂中间体核苷类成分包 含尿苷和鸟苷。 3.根据权利要求1所述的鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法， 其特征 在于， 供试品溶液的制备方法为： 将鱼腥草芩蓝合剂中间体加入至体积百分比为5％的甲醇 溶液中， 摇匀， 离心， 过0.2 2 μm滤膜滤 过， 取续滤 液作为供 试品溶液。 4.根据权利要求1所述的鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法， 其特征 在于， 混合对照品溶液 的制备方法为： 将尿苷对照品和鸟苷对照品分别溶于体积百分比为 5％的甲醇溶液中得到尿苷溶液和鸟苷溶液， 混匀尿苷溶液和鸟苷溶液制成混合对照品溶 液。 5.根据权利要求1所述的鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法， 其特征 在于， 所述的液相色谱条件 还包括： 检测波长26 0nm， 进样体积10 ‑20 μL， 流速 0.3mL/mi n。 6.根据权利要求1或5所述的鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法， 其特 征在于， 所述的液相色谱条件还包括： 检测波长260nm， 进样体积10μL， 流速0.3mL/min， 柱 温： 25℃。 7.根据权利要求1所述的鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法， 其特征 在于， 液相色谱分析 过程中， 采用DAD检测器。 8.根据权利要求1 ‑7任一所述的鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法在 评价鱼腥草芩 蓝合剂产品质量中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115372516 A 2一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核 苷类成分的含量测定方 法 技术领域 [0001]本发明涉及中药的含量测定方法领域， 具体涉及 一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷 类成分的含量测定方法。 背景技术 [0002]鱼腥草芩蓝合剂为常见中药制剂， 由鱼腥草、 黄芩、 板蓝根、 连翘、 金银花五味中药 材经水提醇沉工艺精制而成， 具有清热解毒的功效。 临床常用于治疗外感风热引起的咽喉 肿痛、 急性咽炎、 扁桃体炎等疾病。 鱼腥草芩蓝合剂收录于国家药品监督管理局国家中成药 标准中， 然而现行标准中只有鱼腥草、 黄芩、 连翘和金银花的薄层色谱鉴别项和黄芩苷含量 的测定项。 [0003]目前中成药的质量控制体系由药材质控、 制 药过程质量控制和成品质检构成。 制 药过程质量控制中包括重要中间体质量控制、 辅料质量控制、 过程参数控制、 过程状态控制 和制药设备状态控制等多个方面。 现有技术中， 有文献公开了利用Symmetry  Shield RP18 色谱柱(4.6mm ×250mm， 5 μm)， 以乙腈 –0.1％磷酸溶液为流动相， 梯度洗脱同时测定鱼腥草 芩蓝合剂中绿原酸、 连翘酯苷A、 黄芩苷、 槲皮苷、 汉黄芩苷、 槲皮素和汉黄芩素含量的高效 液相色谱法(昝珂,周颖,郑成.高效液相色谱法同时测定 鱼腥草芩蓝合剂中7种成分[J].化 学分析计量,2 021.)， 还有文献 公开了利用Kro masil‑100 C18色谱柱(4.6mm ×250mm， 5 μm)， 流动相为甲醇 ‑0.2％磷酸， 梯度洗脱同时测定鱼腥草芩蓝合剂中绿原酸， 黄芩苷和 黄芩素 的含量的高效液相色谱法(邓茂芳,程维明.HPLC同时测定鱼腥草芩蓝合剂中3种活性成分 的含量[J].中国现代应用药学,2015,32(5):3.)。 但是， 上述方法均是对鱼腥草芩蓝合剂的 成品进行检测 和质量控制， 并不 适用于鱼腥草芩 蓝合剂中间体的质量控制。 [0004]水提浓缩液是鱼腥草芩蓝合剂生产中的重要中间体， 其化学成分含量波动体现了 药材批次间质量差异和提取浓缩等工艺对化学成分的综合影响。 同时， 水提浓缩液又是醇 沉工艺的原料， 其质量波动会对醇沉效果产生影响。 所以， 有必 要开发鱼腥草芩蓝合剂水提 浓缩液的液相色谱质量检测方法。 [0005]现有技术中报道了几种中成药中间体的质量控制方法， 如公开号为CN113237913A 的中国专利文献公开了一种丹参注射液工艺中间体的1H NMR一测多评法， 该方法通过测定 外标样品与和丹参注射液工 艺中间体制得的供试样品， 测定其1H NMR图谱， 进行1H NMR指纹 图谱构建与分析， 完成含量测定与全面质量评价， 该发明可同时测定多类别化合物(包括核 苷类化合物)， 检测速度快， 但是对仪器的要求高； 公开号为CN114563496A的中国专利文献 公开了一种生姜姜半夏渗漉液中成分的定量指纹图谱分析方法， 生姜姜半夏渗漉液是小柴 胡胶囊的重要中间体， 该方法通过高效液相色谱方法分析对照品混合溶液和供试品溶液， 得到生姜姜半夏渗漉液中成分的定量指纹图谱。 但该方法中渗漉液是动态浸出 的醇提液， 组分和水提浓 缩液差别较大， 且该 方法的分析时间较长 。说　明　书 1/6 页 3 CN 115372516 A 3