(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221094979 2.1 (22)申请日 2022.08.09 (71)申请人 河北一品生物医药有限公司 地址 050000 河北省石家庄市高新区太行 南大街501号B-1栋8层 (72)发明人 王菊　赵东明　郑培培　赵翠然　 闫海同　王晨光　王建明　 (74)专利代理 机构 北京德和衡律师事务所 11405 专利代理师 李国聪　甄伊宁 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种高效液相色谱法检测L-哌啶甲酸盐酸 盐有关物质的方法 (57)摘要 本发明涉及医药制剂技术领域， 公开了一种 高效液相色谱法检测L ‑哌啶甲酸盐酸盐有关物 质的方法， 同时分析检测L ‑哌啶甲酸盐酸盐中6 种有关物质： D ‑酒石酸、 吡啶‑2‑甲酸、 吡啶 ‑4‑甲 酸、 吡啶‑3‑甲酸、 哌啶 ‑4‑甲酸和哌啶 ‑3‑甲酸的 方法。 权利要求书2页 说明书10页 附图3页 CN 115356411 A 2022.11.18 CN 115356411 A 1.一种高效液相色谱法检测L ‑哌啶甲酸盐酸盐有关物质的方法， 包括如下步骤： a.取 L‑哌啶甲酸盐酸盐， 用水、 流动相、 磷酸溶液或有机溶剂的水溶液， 配制成含L ‑哌啶甲酸盐 酸盐溶液； b.取步骤a所得溶液注入高效液相色谱仪中进 行高效液相色谱检测， 其特征在于 步骤b中所述高效液相色谱检测的流动相由离子对试剂 ‑无机盐混合溶液和色谱纯有机溶 剂组成， 所述 流动相的pH值 为1.8～2.0。 2.如权利要求1所述的方法， 其特征在于步骤b中所述离子对试剂 ‑无机盐混合溶液和 色谱纯有机溶剂的体积比例为83:17～87:13， 优选85:15， 所述色谱 纯有机溶剂优选色谱 纯 乙腈。 3.如权利要求1所述的方法， 其特征在于所述无机盐选自磷酸二氢钾、 磷酸二氢铵、 磷 酸氢二钾 和/或磷酸氢二铵， 优选磷酸 二氢铵， 所述离 子对试剂为 辛烷磺酸钠。 4.如权利要求1所述的方法， 其特征在于步骤a中L ‑哌啶甲酸盐酸盐溶液浓度为1～ 5mg/ml， 优选2mg/ml。 5.如权利要求1所述的方法， 其特征在于步骤a中所述有机溶剂的水溶液选自腈类的水 溶液， 优选13％～17％乙腈水 溶液， 最优选15％乙腈水 溶液， 或者步骤a中优选磷酸溶 液。 6.如权利要求1所述的方法， 其特征在于步骤b中所述高效液相色谱仪中的高效液相色 谱柱为亲水性的色谱柱， 优选以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱， 最优选Shim ‑pack GIST， 4.6×250mm， 5 μm。 7.如权利要求1所述的方法， 其特征在于步骤b中高效液相色谱仪柱温为20～60℃， 优 选25℃。 8.如权利要求1所述的方法， 其特征在于步骤b中所述高效液相色谱检测为紫外检测， 检测波长2 00～400n m， 优选210n m， 流动相流速为0.5～1.4 ml/min， 优选0.9～1.1ml/min， 最 优选1ml/mi n。 9.在一些实施方式中， 步骤b中所述高效液相色谱检测的色谱条件如下： 色谱柱： Shim ‑ pack GIST， 4.6×250mm， 5 μm； 检测器： UV 检测器， 检测波长210nm； 流动相流速： 0.9～1.1ml/ min； 柱温： 22～30℃； 流动相： 离子对试剂 ‑无机盐混合溶液(每1000ml离子对试剂 ‑无机盐 混合溶液中含磷酸二氢铵0.01mol、 含辛烷磺酸钠0.03mol) ‑乙腈(83: 17～87:13)， 用磷酸 调pH值为1.8～2.0。 10.一种高效液相色谱法检测L ‑哌啶甲酸盐酸盐有关物质的方法， 包括如下步骤： a.取 L‑哌啶甲酸盐酸盐， 用水、 流动相、 磷酸溶液或有机溶剂的水溶液， 配制成含L ‑哌啶甲酸盐 酸盐溶液； b.取步骤a所 得溶液注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测， 其中 步骤b的色谱条件为： 仪器： 岛津高效液相色谱仪LC ‑20ADXR； 色谱柱： Shim ‑pack GIST， 4.6×250mm， 5 μm； 检测器： UV 检测器， 检测波长210n m； 流速： 1ml/min； 柱温： 25℃； 流动相： 离 子对试剂 ‑无机盐混合溶液(每1000ml该离子对试剂 ‑无机盐混合溶液中含磷酸二氢铵 0.01mol、 辛烷磺酸钠0.03mol) ‑乙腈(离子对试剂 ‑无机盐混合溶液和乙腈体积比为85: 15)， 用磷酸调pH值 为1.9； 试验步骤为： 稀释液(空白溶 液)： 15％乙腈溶 液； 有关物质对照品贮备液： 称取D ‑酒石酸、 吡啶 ‑2‑甲酸、 吡啶 ‑4‑甲酸、 吡啶 ‑3‑甲酸、 哌 啶‑4‑甲酸、 哌啶 ‑3‑甲酸、 L‑哌啶甲酸对照品各约200mg， 分别置不同的100ml量瓶中， 加权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115356411 A 215％乙腈溶 液溶解并稀释至刻度， 摇匀； 杂质峰鉴别溶液： 精密量取对照 品贮备液中吡啶 ‑2‑甲酸、 吡啶 ‑4‑甲酸、 吡啶 ‑3‑甲酸 对照品贮备液各1ml和D ‑酒石酸、 哌啶 ‑4‑甲酸、 哌啶 ‑3‑甲酸对照品贮备液各4ml分别置不 同的50ml量瓶中， 用15％乙腈溶 液稀释至刻度， 摇匀； 供试品溶液： 称取L ‑哌啶甲酸盐酸盐约200mg， 精密称定， 置100ml量瓶中， 加15％乙腈 溶液溶解并稀释至刻度， 摇匀， 作为供 试品溶液； 分别精密量取空白溶液、 供试品溶液和各杂质峰鉴别溶液各20μl， 采用上述色谱条件 进样检测， 记录色谱图， 按有关物质峰面积外标法计算L ‑哌啶甲酸盐酸盐中有关物质的含 量。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115356411 A 3