(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210971552.1 (22)申请日 2022.08.12 (71)申请人 山东宏济堂制药集团股份有限公司 地址 250103 山东省济南市历城区经十东 路30766号宏济堂中药研究院 (72)发明人 张京华　吴娜娜　曹桂云　李樱　 孟兆青　张爱均　 (74)专利代理 机构 济南千慧专利事务所(普通 合伙企业) 37232 专利代理师 秦嘉 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一种采用一测多评法测定白花蛇舌草标准 汤剂冻干粉或配方颗粒中5种成分含量的方法 (57)摘要 本申请公开了一种采用一测多评法测定白 花蛇舌草标准汤剂冻干粉或配方颗粒中5种成分 含量的方法， 属于白花蛇舌草含量检测技术领 域。 该方法， 先分别制备去乙酰车叶草酸、 去乙酰 车叶草酸甲酯、 原儿茶酸、 车叶草苷酸、 对香豆酸 的对照品溶液， 采用HPLC检测得到5种对照品的 回归方程， 以对香豆酸为内参物， 计算其余四种 组分的相对 校正因子； 并对白花蛇舌草标准汤剂 冻干粉或配方颗粒的供试品溶液， 使用对香豆酸 为对照品， 根据相对校正因子， 计算得到去乙酰 车叶草酸、 去乙酰车叶草酸甲酯、 原儿茶酸和车 叶草苷酸的含量。 该方法为白花蛇舌草配方颗粒 的质量控制标准提供了依据， 便于白花蛇舌草配 方颗粒生产和检测的进行。 权利要求书2页 说明书13页 附图1页 CN 115308331 A 2022.11.08 CN 115308331 A 1.一种采用一测多评法测定白花蛇舌草标准汤剂冻干粉或配方颗粒中5种成分含量的 方法， 其特 征在于， 包括下述 步骤： (1)精密称定去乙酰车叶草酸、 去乙酰车叶草酸甲酯、 原儿茶酸、 车叶草苷酸、 对香豆 酸， 分别制备5种对照品溶 液； (2)精密吸取步骤(1)制 备的5种对照 品溶液， 分别采用HPLC检测， 得到5种对照 品的回 归方程， 以对香豆酸为内参物， 计算去乙酰车叶草酸、 去乙酰车叶草酸甲酯、 原儿茶酸和车 叶草苷酸的相对校正因子； (3)取白花蛇舌草标准汤剂或配方颗粒制备供试品溶液， 制备对香豆酸的对照品溶液， 采用HPLC检测得到 色谱图， 以对香豆酸对照品的峰面积为对照， 按照步骤(2)中的相对校正 因子， 分别计算得到去乙酰车叶草酸、 去乙酰车叶草酸甲酯、 原儿茶酸和车叶草苷酸的含 量。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述相对校正因子的计算公式为式( Ⅰ)所 示： 其中， Ws为对香豆酸的浓度， As为对香豆酸的峰面积， Wk为待测组分的浓度， Ak为待测组 分的峰面积； s为对香豆 酸， k为待测组分， fs为对香豆 酸的校正因子， fk为待测组分的校正因 子。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述对香豆酸的保留时间差为0.00， 相对 校正因子为1.0 0； 所述去乙酰车叶草 酸的保留时间差为 ‑22.16， 相对校正因子为1.72； 所述去乙酰车叶草 酸甲酯的保留时间差为 ‑15.01， 相对校正因子为0.96； 所述原儿茶酸的保留时间差为 ‑14.01， 相对校正因子为0.7 7； 所述车叶草苷酸的保留时间差为 ‑11.28， 相对校正因子为1.3 0。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 计算所得的去乙酰车叶草酸的 相对校正因子的RSD为0.77％， 去乙酰车叶草酸甲酯的相对校正因子的RSD为0.88％， 原儿 茶酸的相对校正因子的RS D为1.48％， 车叶草苷酸的相对校正因子的RS D为0.78％。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述HPLC检测的条件为： 以十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂， 以乙腈为流动相A， 以0.1％甲酸溶液为流动相B， 进 行梯度洗脱， 检测波 长240nm， 流速为每分钟1ml， 柱温为3 5℃。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特 征在于， 所述梯度洗脱具体条件为： 0～32分钟， 流动相A： 2％～ 26％， 流动相B： 98％～74％； 32～40分钟， 流动相A： 26％～80％， 流动相B： 74％～ 20％。 7.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)中， 所述供试品溶液的制备方法 为： 将白花蛇舌草标准汤剂冻干粉或配方颗粒研磨为细粉， 精密称定0.2g， 置具塞锥形瓶 中， 加入30％甲醇25ml， 称定重量， 超声处理45分钟， 冷却， 用30％甲醇补足减失的重量， 摇 匀， 滤过， 取续滤 液， 即得所述供试品溶液。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115308331 A 28.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)中， 将对香豆酸溶于甲醇中， 得到 浓度为25 μg/ml的对香豆酸对照品溶 液。 9.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 将去乙酰车叶草酸、 去乙酰车 叶草酸甲酯、 原儿茶酸、 车叶草苷酸、 对香豆酸5种对照品溶于甲醇中， 分别得到浓度为 1.313mg/ml的去乙酰车叶草酸对照品溶液、 0.9418mg/ml的去乙酰车叶草酸甲酯对照品溶 液、 0.9934mg/ml的原儿茶酸对照品溶液、 0.6835mg/ml的车叶草苷酸对照品溶液、 1.0145mg/ml的对香豆酸对照品溶 液。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 去乙酰车叶草酸的回归方程 为y＝12.506x+0.8846， 去乙酰车叶草酸甲酯的回归 方程为y＝14.83x ‑0.9566， 原儿茶酸的 回归方程为y＝16.486x+0.658， 车叶草苷酸的回归方程为y＝13.03x+3.8627， 对香豆酸的 回归方程 为y＝14.2 25x+3.07 79。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115308331 A 3