(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210868252.0 (22)申请日 2022.07.22 (71)申请人 杭州师范大学 地址 311121 浙江省杭州市余杭区余杭塘 路2318号 (72)发明人 曹君　石敏珍　 (74)专利代理 机构 杭州君度专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 33240 专利代理师 朱亚冠 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01) G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种酶辅助的机械生物提取植物多糖的方 法 (57)摘要 本发明公开一种酶辅助的机械生物提取植 物多糖的方法。 将石斛经粉碎机碾碎成粉状， 将 上述粉末和由纤维素酶和果胶酶组成的混合酶 置于球磨机的球磨室中研磨5～15min后， 得到混 合粉末； 将混合粉末转移到反应容器， 以纯水作 为提取溶剂， 磁力搅拌提取2.5～7.5min后， 得到 含有多糖的上清液。 本发明方法首次将酶解提取 和机械提取结合， 提出酶辅助的机械生物提取方 法， 并且应用在植物中多糖提取 领域。 权利要求书1页 说明书9页 附图4页 CN 115232222 A 2022.10.25 CN 115232222 A 1.一种酶辅助的机 械生物提取植物多糖的方法， 其特 征在于包括以下步骤： 步骤(1)： 将石斛经粉碎机碾碎成粉状， 将上述粉末和由纤维素酶和果胶酶组成的混合 酶置于球磨机的球磨室中研磨5～15min后， 得到混合粉末； 其中所述纤维素酶和果胶酶的 质量比为1～3： 1， 所述石斛与混合酶的质量比为5 00： 50～200； 步骤(2)： 将混合粉末转移到反应容器， 以纯水作为提取溶剂， 磁力搅拌提取2.5～ 7.5min后， 得到含有 多糖的上清液。 2.根据权利要求1所述一种酶辅助的机械生物提取植物多糖的方法， 其特征在于步骤 (1)所述纤维素酶和果胶酶的质量比为2:1。 3.根据权利要求1所述一种酶辅助的机械生物提取植物多糖的方法， 其特征在于步骤 (1)所述石斛与混合酶的质量比为5 00： 200。 4.根据权利要求1所述一种酶辅助的机械生物提取植物多糖的方法， 其特征在于步骤 (1)所述研磨时间为10mi n。 5.根据权利要求1所述一种酶辅助的机械生物提取植物多糖的方法， 其特征在于步骤 (2)所述提取时间为5mi n。 6.根据权利要求1所述一种酶辅助的机械生物提取植物多糖的方法， 其特征在于提取 溶剂与石斛的质量体积比为5～10mL： 5 00mg。 7.根据权利要求6所述一种酶辅助的机械生物提取植物多糖的方法， 其特征在于提取 溶剂与石斛的质量体积比为10mL： 5 00mg。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115232222 A 2一种酶辅助的机械生物提取植物多糖的方 法 技术领域 [0001]本发明属于植物中多糖的提取制备领域， 具体为一种酶辅助的机械生物提取植物 多糖的方法。 背景技术 [0002]多糖是一种分子量较高、 结构多样的重要碳水化合物。 它可以由具有不 同立体化 学性质的单糖组成， 由α和β 构型的羟基连接， 也可以由含有 数千个单糖残基的聚合物组成。 天然产物中的多糖具有来源广泛、 毒性低、 药理活性高、 不良反应少等独特优势。 它们被认 为是一种重要的功能成分， 具有丰富的药理作用， 如抗氧化、 抗辐射、 抗衰老、 抗凝血、 增强 免疫力等。 此外， 多糖除了具有生物作用外， 还与体内物质的转化代谢密切相关， 产生人体 必需的氨基酸、 核苷酸、 脂肪酸等， 是细胞识别的能量物质和信息分子。 正是 由于多糖的上 述独特性质， 从天然产物中提取多糖引起了研究者的高度重视。 传统的多糖提取方法多采 用热水提取， 存在提取时间长、 效率低、 提取率低等缺点明显。 为了克服传统方法存在的缺 点， 超声提取， 微波提取， 酶解提取等提取方法被逐渐应用于多糖提取。 尽管这些方法在一 定程度上 取得了进步， 但开发更有效的方法仍然是必要的， 特别是对复杂的基质样品而言。 [0003]机械萃取是近年来备受关注的一种新型萃取方法， 它有效地增强了机械力， 增强 了样品间的传质和接触， 大大提高了萃 取效率。 机械提取工艺通常包括三个步骤:首先用机 械力对原料进 行研磨； 其次， 将预活化样品与固体试剂放在一起， 在球磨 机中进行机械压力 研磨； 最后， 将得到的混合粉末用于后续的提取工艺。 目前常机械提取常与一些其他提取方 法联用， 比如， 机械辅助无定形分散萃取、 机械化学辅助萃取、 机械辅助浊点萃取等。 然而， 酶辅助机械生物提取在以往的研究中很少被提及， 它具有反应条件温和、 使用有机溶剂少、 提取效率高的优点， 在简化 提取过程方面有很大的潜力。 [0004]铁皮石斛是一种多年生植物， 属于兰科的铁皮石斛的重要属。 铁皮石斛的叶片为 亮绿色， 呈带状， 交替生在茎节上。 茎长10 ‑60厘米， 直径1.3厘米， 肉质， 可育。 目前铁皮石斛 在中国、 日本、 澳大利亚和美国等地广泛种植。 石斛中含有丰富的珍贵物质， 其中包括生物 碱、 联苯、 黄酮类化合物和多糖， 使其表现出多种生物作用， 如抗氧化、 抗肺炎症、 肝保护和 免疫刺激。 其中， 多糖具有降血脂、 降血压、 降血糖等功效， 具有增强免疫、 抗疲劳、 抗菌、 抗 癌、 抗氧化等作用。 因此， 从石斛 中提取多糖引起了许多研究者的兴趣。 近年来， 对种石斛多 糖提出了多种提取方法， 如热水提取、 超声辅助提取、 酶辅助提取和冻融冷压提取。 然而， 文 献报道的提取方法往往存在一些明显的缺点， 如耗时长、 耗能大、 效率低、 使用有机溶剂等。 因此， 探索一种省时、 高效、 简便、 环保的石斛多糖提取 方法具有重要意 义。 [0005]本发明综合酶提取和机械生物提取两种方法并与 高效液相色谱/质谱结合， 提取 石斛中的多糖， 同时测定其中的单糖组成。 发明内容 [0006]本发明的目的在于针对现有技术的不足， 提出一种将酶解提取和机械提取相结合说　明　书 1/9 页 3 CN 115232222 A 3