(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210877643.9 (22)申请日 2022.07.25 (71)申请人 湖北绿科乐 华生物科技有限公司 地址 438000 湖北省黄冈市团风县团风 镇 江宇路1号 (72)发明人 李双全　胡志琦　童志峰　何月　 韦优　 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方 法 (57)摘要 本发明公开了一种酵母源饲料中谷胱甘肽 含量的测定方法， 包括仪器准备、 试剂准备和含 量测定三个方面。 本发明利用以下原理： 同一时 刻进入色谐柱的各组分， 由于在流动相和固定相 之间溶解、 吸附、 渗透或离子交换等作用的不同， 随流动相在色谱柱两相之间进行及复多次的分 配， 由于各组分在色谱柱中的移动速度不同， 经 过一定长度的色谱柱后， 彼此分离开来， 按顺序 流出色谱柱。 进入信号检测器， 在记录仪上或数 据处理装置上显示出各组分的谱峰数值， 根据保 留时间对照定性， 根据峰面积计算样品中谷胱甘 肽含量， 从而可对谷胱甘肽的含量进行精确测 定， 以便得到所需的结果。 权利要求书2页 说明书6页 附图2页 CN 115452966 A 2022.12.09 CN 115452966 A 1.一种酵母 源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法， 其特 征在于， 主 要包括以下几个方面： 一、 仪器准备， 包括： （1） 高效液相色谱仪 （配备柱温箱)； （2） 流动相真空抽脱气装置及0.45um  滤膜； （3） 色谱柱； （4） 分析天平， 精度0.1mg； （5） 微量进样器； 二、 试剂准备， 包括： （1） 水； （2） 乙腈， 色谱纯； （3） 还原型谷胱甘肽标准品； （4） 磷酸 二氢钠； （5） 辛烷磺酸钠； 三、 含量测定， 包括以下步骤： （1） 标准溶 液的配制； （2） 样液的制备； （3） 色谱条件； （4） 绘制标准曲线； （5） 样品的测定 对于含量测定中样品的测定， 将制备好的样液进样， 根据标准品的保留时间定性样品 中的还原型谷胱甘肤的色谱峰； （6） 结果计算 根据样品的峰面积， 计算谷胱甘肽组分的含量； （7） 精密度 在重复性条件下获得两次测定结果的绝对差值应不超过算 术平均值的10%。 2.根据权利要求1所述的一种酵母源饲 料中谷胱甘肽含量的测定方法， 其特征在于： 对 于仪器准备中的色谱柱， 选用C18柱， 其填料粒径为5 μm， 柱尺寸为4.6mmx250mm  或分析效果 相似的其 他色谱柱。 3.根据权利要求1所述的一种酵母源饲 料中谷胱甘肽含量的测定方法， 其特征在于： 对 于试剂准备中的还原型谷胱甘肽标准品、 磷酸二氢钠和辛烷磺酸钠， 其纯度应均为95%以 上。 4.根据权利要求1所述的一种酵母源饲 料中谷胱甘肽含量的测定方法， 其特征在于： 对 于含量测定中标准溶 液的配制， 主 要包括以下步骤： ①准确称取10.0mg谷胱甘肽对照品， 用超纯水溶解， 并定容至50mL刻度， 依度为200ug/ mL， 混匀备用； ②分别取谷胱甘肽对照品储备液0.0、 2.5、 5.0、 7.5、 12.5mL （200ug/mL)于50mL容量瓶 中， 加超纯 水定容至刻度混匀， 相当于 0、 10、 20、 3 0、 50ug/mL， 作内标准系列应用液。 5.根据权利要求1所述的一种酵母源饲 料中谷胱甘肽含量的测定方法， 其特征在于： 对 于含量测定中样液的制备， 主 要包括以下步骤：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115452966 A 2①准确称取2 ‑2.5g样品后粉碎于15mL离心管内； ②加超纯水5mL， 混匀， 超声 波提取10mi n， 离心， 取 上清液； ③重复上述操作7 ‑8次， 所有上清液汇聚至100mL容量瓶中， 用超纯水定容至100mL， 过 0.45um滤膜作为样品分析 液。 6.根据权利要求1所述的一种酵母源饲 料中谷胱甘肽含量的测定方法， 其特征在于： 对 于含量测定中的色谱条件， 对于 Cu色谱柱， 主 要包括： ①流动相： 磷酸二氢钠和辛烷磺酸钠混合溶液 （磷酸二氢钠3.0g， 辛烷磺酸钠1.0g， 加 超纯水溶解并定容至 500ml， 用磷酸调节pH为3.0） ： 乙腈=96： 4(v： v)； ②检测波长： 210nm； ③流速： 1.0mL/mi n； ④柱温： 25℃； ⑤进样量： 20ul。 7.根据权利要求1所述的一种酵母源饲 料中谷胱甘肽含量的测定方法， 其特征在于： 对 于含量测定中的绘制标准 曲线， 将配好的每种谷胱甘肽的标准溶液系列分别进样后， 以标 样浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标作标准曲线， 线性相关系数应为0.9 990以上。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115452966 A 3