(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211083561.3 (22)申请日 2022.09.05 (71)申请人 广东海天创新 技术有限公司 地址 528000 广东省佛山市禅城区文沙路 16号中区十八座6层 申请人 佛山市海天 （高 明） 调味食品有限公 司　 佛山市海天调味食品股份有限公司 (72)发明人 林顺　万吉林　童星　刘希　 (74)专利代理 机构 广州三环 专利商标代理有限 公司 44202 专利代理师 许东辉 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01)G01N 30/90(2006.01) G01N 30/94(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种酱油中酱油酮的定量分析方法 (57)摘要 本发明公开了一种酱油中酱油酮的定量分 析方法， 属于化学检测技术领域。 本发明方法包 括： 将酱油样品采用二氯甲烷萃取后， 氮吹浓缩， 得浓缩液A； 所述酱油样品与二氯甲烷的体积比 为1： (0.2 5～0.3)； 浓缩液A采用展 开剂进行薄层 层析处理后进行复溶处理， 得层析处理品B； 所述 展开剂为乙酸乙酯和丙酮的混合液， 两者的体积 比为(7.5:2.5)～(8.5:1.5)； 配制酱油酮的标准 溶液， 将层析处理品B和标准溶液进行UHPLC ‑DAD 检测， 对酱油样品中的酱油酮进行定量分析。 该 测试方法可针对酱油酮单一物质进行准确定量， 同时前处理及检测过程操作简单， 无需额外施加 环境或使用设备， 前处理及分析时间短， 经济性 价比高。 权利要求书1页 说明书8页 附图4页 CN 115326995 A 2022.11.11 CN 115326995 A 1.一种酱油中酱油酮的定量分析 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)将酱油样品采用二氯甲烷萃取后， 氮吹浓缩， 得浓缩液A； 所述酱油样品与二氯甲烷 的体积比为1： (0.25～0.3)； (2)浓缩液A采用展开剂进行薄层层析处理后进行复溶处理， 得层析处理品B； 所述展开 剂为乙酸乙酯和丙酮的混合液， 两者的体积比为(7.5:2.5)～(8.5:1.5)； (3)配制酱油酮的标准溶液， 将层 析处理品B和标准溶液进行UHPLC ‑DAD检测， 对酱油样 品中的酱油酮进行定量分析。 2.如权利要求1所述酱油中酱油酮的定量分析方法， 其特征在于， 所述酱油样品包括特 级酱油样品、 一级酱油样品、 二级酱油样品和三级酱油样品。 3.如权利要求1所述酱油中酱油酮的定量分析方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中酱油 样品与浓 缩液A的体积之比为(90 0～1100)： 1。 4.如权利要求1所述酱油中酱油酮的定量分析方法， 其特征在于， 所述步骤(2)中薄层 层析处理所用层析板为GF254硅胶薄层层析板， 所述复溶处理用的溶液为甲醇的水溶液， 所 得层析处 理品B还经 过0.22 μm有机膜过 滤。 5.如权利要求1所述酱油中酱油酮的定量分析方法， 其特征在于， 所述步骤(3)中 UHPLC‑DAD检测所用色谱柱为ZORBAX  Eclipse Plus C18色谱柱， 色谱柱规格为1.8μm   2.1mm×150mm， 色谱柱 柱温为35℃。 6.如权利要求5所述酱油中酱油酮的定量分析方法， 其特征在于， 所述UHPLC ‑DAD检测 时的流动相条件为： 以质量含量为0.1～0.15wt％的甲酸水溶液为流动相A， 以甲醇为流动 相B进行洗脱。 7.如权利要求6所述酱油中酱油酮的定量分析方法， 其特征在于， 所述洗脱条件为： 0～ 10min， 流动相A和流动相B的体积比为80:20， 流动相流速为0.3～0.35mL/min， 层析处理品 的进样量 为1.5～2 μL。 8.如权利要求6所述酱油中酱油酮的定量分析方法， 其特征在于， 所述UHPLC ‑DAD检测 所用DAD检测波长为23 5nm。 9.如权利要求1所述酱油中酱油酮的定量分析方法， 其特征在于， 所述步骤(3)中 UHPLC‑DAD检测包括酱油酮的标准曲线的绘制， 具体步骤为： 将1000mg/L的酱油酮的标准溶 液稀释并配置浓度为500mg/mL、 2 50mg/mL、 12 5mg/mL、 62.5mg/mL以及7.81mg/mL的酱油酮的 工作溶液， 经UHPLC ‑DAD检测并绘制标准曲线。 10.如权利要求1～9任一项所述酱油中酱油酮的定量分析方法在酱油生产及保藏、 使 用过程中的质量控制中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115326995 A 2一种酱油中酱油酮的定量分析方 法 技术领域 [0001]本发明涉及化学检测技 术领域， 具体涉及一种酱油中酱油酮的定量分析 方法。 背景技术 [0002]酱油酮(环高呋喃酮)具有典型的焦糖香气， 被认为是酱油中的关键香气活性物 质， 因此对酱油中酱油酮的快速准确定量可以辅助进行酱油品质的判定和监控。 一般情况 下， 酱油酮在酱油中的含量约为0.1～50mg/L， 而目前主要用于检测酱油中酱油酮等香气成 分的手段包括LLE(液液萃取)、 SDE(同时蒸馏萃取)、 SPME(顶空固相微萃取)和SAFE(溶剂辅 助蒸馏)等前处理方法结合GCMS(气质联用)的检测技术。 然而由于酱油 酮含量少， 极性大， SDE和SPME结合GCMS技术很难检测出酱油酮成分， 而LEE结合GCMS虽然可以对酱油酮进行定 性， 但响应信号差， 分析耗时长； SAFE前处理手段虽然可以有效提纯酱油 酮， 但处理过程繁 琐， 耗时长且需要特定的SAFE设备， 难以做到高性价比高效检测。 另一方面， GCMS检测技术 主要适合用于多组分的定性定量分析， 耗时很长， 同样难以针对酱油酮这一单独物质进行 快速定量， 而酱油中除了酱油酮外， 还包含了各种 无机和有机基质， 干扰物种类多， 同时酱 油酮本身的极性 强， 热稳定性差， 因此若不进行高效提纯， 很难提升酱油酮在定量时的信号 强度。 [0003]综上所述， 现有技术对于酒品中酱油酮的定量分析难以同时做到设备要求低、 操 作简练高效、 测定 干扰小及准确性高的特点。 发明内容 [0004]基于现有技术存在的缺陷， 本发明的目的在于提供了一种酱油中酱油酮的定量分 析方法， 该方法通过LEE法结合氮吹处理对酱油中的有机活性物质进 行富集浓缩， 随后对浓 缩液采用薄层层析法进行二次提纯以去除大部分杂质干扰， 最终采用UHPLC ‑DAD进行酱油 酮的定量分析， 该测试方法可以针对酱油酮这一物质进行准确定量， 同时前处理及检测过 程操作简单， 无需额外施加环境或使用设备， 前处 理及分析时间短， 经济性 价比高。 [0005]为了达到上述目的， 本发明采取的技 术方案为： [0006]一种酱油中酱油酮的定量分析 方法， 包括以下步骤： [0007](1)将酱油样品采用二氯甲烷萃取后， 氮吹浓缩， 得浓缩液A； 所述酱油样品与二氯 甲烷的体积比为1： (0.25～0.3)； [0008](2)浓缩液A采用展开剂进行薄层层析处理后进行 复溶处理， 得层析处理品B； 所述 展开剂为乙酸乙酯和丙酮的混合液， 两者的体积比为(7.5:2.5)～(8.5:1.5)； [0009](3)配制酱油酮的标准溶液， 将层析处理品B和标准溶液进行UHPLC ‑DAD检测， 对酱 油样品中的酱油酮进行定量分析。 [0010]优选地， 所述酱油样品包括特级酱油样品、 一级酱油样品、 二级酱油样品和三级酱 油样品。 [0011]本发明所述酱油中酱油酮的定量分析方法中， 首先通过二氯甲烷以LEE法进行酱说　明　书 1/8 页 3 CN 115326995 A 3