(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210971421.3 (22)申请日 2022.08.12 (71)申请人 西南民族大 学 地址 610000 四川省成 都市武侯区一环路 南四段16号 (72)发明人 史海涛　彭婧　郝京京　曾晨　 王永　李键　李强　李胜利　柏雪　 黄艳玲　林亚秋　杨发龙　熊显荣　 王茜　 (74)专利代理 机构 成都知棋知识产权代理事务 所(普通合伙) 51325 专利代理师 马晓静 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01) G01N 33/569(2006.01) A01K 67/02(2006.01) A61B 5/15(2006.01) (54)发明名称 一种诊断反刍动物AFB1中毒血液代谢标志 物及测定方法 (57)摘要 本发明公开一种诊断反刍动物AFB1中毒血 液代谢标志物， 包括诊断AFB1低剂量中毒的血液 代谢标志物指标和诊断AFB1高剂量中毒的血液 代谢标志物指标， 测定方法包括步骤一、 选取模 型动物分组饲养， 步骤二、 血液样品采集和处理， 步骤三、 代谢组学分析， 步骤四、 数据处理分析和 鉴定， 步骤五、 获得分析结果并得到代谢标志物 含量； 本发 明提出了两组与反刍动物血液内的含 量与AFB1摄入剂量密切相关的代谢标志物， 通过 检测血液中这些代谢物的含量能够准确诊断反 刍动物AFB1中毒， 组合使用时准确性更高， 实现 反刍动物AFB1中毒的早期诊断、 早期干 预和及时 治疗， 对促进我国节粮型畜牧业的健康发展具有 重要意义。 权利要求书2页 说明书6页 附图2页 CN 115372508 A 2022.11.22 CN 115372508 A 1.一种诊断反刍动物AFB1中毒血液代谢标志物， 其特征在于： 包括诊断AFB1低剂量中 毒的血液代谢标志物指标和诊断AFB1高剂量中毒的血液代谢标志物指标， 所述诊断AFB1低 剂量中毒的血液代谢标志物指标包括正葵酸、 尿酸、 寻霉素A、 钙二醇、 卡马西平邻 苯醌、 N‑ 甲基色胺、 利多卡因和N ‑谷酰胺脯氨酸指标中的一种； 所述诊断AFB1高剂量中毒的血液代 谢标志物指标包括次黄 嘌呤、 豆叶氨酸、 烟酰胺核苷酸、 多巴醌、 1 ‑甲基组氨酸、 三乙醇胺、 葡糖苷酸胆固醇和胆固醇硫酸酯 指标中的一种。 2.根据权利要求1所述的一种 诊断反刍动物AFB1中毒血液代谢标志物， 其特征在于： 所 述诊断AFB1低 剂量中毒的血液代谢标志物指标还包括正葵酸和尿酸、 正葵酸和寻霉素A、 正 葵酸和钙二醇、 正葵酸和N ‑甲基色胺、 正葵酸和利多卡因及正葵酸和N ‑谷酰胺脯氨酸中的 一种。 3.根据权利要求1所述的一种 诊断反刍动物AFB1中毒血液代谢标志物， 其特征在于： 所 述诊断AFB1 高剂量中毒的血液代谢标志物指标还包括三乙醇胺和次黄嘌 呤、 三乙醇胺和豆 叶氨酸、 三乙醇胺和烟酰胺核苷酸、 三乙醇胺和多巴醌、 三乙醇胺和1 ‑甲基组氨酸、 三乙醇 胺和葡糖苷酸胆固醇及三乙醇胺和胆固醇硫酸酯中的一种。 4.根据权利要求1所述的一种诊断反刍动物AFB1中毒血液代谢标志物 的测定方法， 其 特征在于， 包括以下步骤： 步骤一、 选取模型动物饲养， 选取18只各方面条件相近的反刍动物随机均分为对照组、 低剂量AFB1日粮组和高剂量AFB1日粮组进行两周预 试验期和两周正式试验期饲养； 步骤二、 血液样品采集， 分别在预试验期第14天和正式试验期第14天晨饲3小时后用真 空采血管在每只羊身上采集2管静脉 血， 每管为5ml， 并进行处 理低温保存； 步骤三、 非靶向代谢组学分析， 吸取100μL置于4℃环境下解冻的血浆样品， 使用色谱 柱、 超高效液相色谱仪和高分辨质谱仪并加入辅剂进行检测； 步骤四、 数据处理分析， 使用质谱分析软件采集的原始数据利用ProgenesisQI软件对 数据进行峰提取、 峰对齐的处理操作， 并基于在 线METLIN数据库进行鉴定， 同时进行理论碎 片识别， 获得分析 结果； 步骤五、 获取代谢产物， 根据分析结果获得8个仅在低剂量AFB1日粮组及高剂量AFB1日 粮组存在显著差异的代谢物， 即为AFB1中毒血 液代谢标志物。 5.根据权利要求4所述的一种诊断反刍动物AFB1中毒血液代谢标志物 的测定方法， 其 特征在于： 所述步骤一中对照组使用基础日粮饲养， 低剂量AFB1日粮组使用口服剂量为50 μ g/kg的日粮饲养， 高剂量AFB1日粮组使用口服剂量 为500 μg/kg的日粮饲养 。 6.根据权利要求4所述的一种诊断反刍动物AFB1中毒血液代谢标志物 的测定方法， 其 特征在于： 所述步骤一中使用的日粮饲料均无肉眼可见 的霉菌污染， 并使用黄曲霉毒素检 测试剂盒进行黄曲霉毒素筛查； 选取的动物在试验前统一注射 伊维菌素。 7.根据权利要求4所述的一种诊断反刍动物AFB1中毒血液代谢标志物 的测定方法， 其 特征在于： 所述步骤二中血液采样后将其中一管使用EDTA进行处理， EDTA抗凝血样立即送 检血常规； 另一管使用肝素钠 进行处理， 肝素钠抗凝处理样品置于离心机以3000r/ min离心 15min， 然后取 上层血浆在 ‑20℃冰箱和液氮中保存。 8.根据权利要求4所述的一种诊断反刍动物AFB1中毒血液代谢标志物 的测定方法， 其 特征在于： 所述步骤三加入的辅剂为甲醇、 乙腈、 甲酸和L ‑2‑氯苯丙氨酸， 所述甲醇、 乙腈和权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115372508 A 2甲酸均为 LC‑MS级， 所述 L‑2‑氯苯丙氨酸纯度大于98％。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115372508 A 3