(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210969924.7 (22)申请日 2022.08.12 (71)申请人 暨南大学 地址 510632 广东省广州市天河区黄埔大 道西601号 (72)发明人 王一飞　刘涛　曾禧铭　叶翠芳　 (74)专利代理 机构 广州科沃园专利代理有限公 司 44416 专利代理师 徐翔 (51)Int.Cl. C07D 311/30(2006.01) C07D 311/40(2006.01) C07D 319/20(2006.01) G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01)G01N 30/86(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (54)发明名称 一种蜂房活性成分的制备和分析方法 (57)摘要 本发明公开了一种蜂房活性成分的制备和 分析方法， 首先将蜂房晾干后打粉， 进行有机溶 剂提取； 然后提取物进行有机溶剂萃取； 对萃取 物分离， 分离纯化， 得到单体化合物并经核磁共 振鉴定结构。 通过DPPH自由基清除实验和LPS诱 导的RAW 264.7细胞炎症NO抑制实验， 检测出具 有抗氧化活性和抗炎活性的化合物； 采用高效液 相色谱分析了黄脚胡蜂酯部位的指纹图谱并开 发了活性 成分的分析方法， 评估了不同蜂房与黄 脚胡蜂蜂房的成分相似度。 以酰胺类化合物为蜂 房质量控制成分， 对虎贞清风胶囊进行质量分 析。 本发明开发了蜂房的抗氧化和消炎镇痛活性 成分的制备与分析方法， 可应用于蜂房质量分析 和预防、 治 疗痛风性关节炎的药物开发。 权利要求书2页 说明书12页 附图12页 CN 115403550 A 2022.11.29 CN 115403550 A 1.一种蜂房活性成分的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)取晾干的蜂房， 采用有机溶剂结合超声提取， 收集 提取液经浓缩得到提取物； (2)将提取物用有机溶剂萃取， 收集浓 缩得到萃取物； (3)运用活性指导， 采用柱色谱层析、 高效液相 制备纯化得到活性 化合物。 2.根据权利要求1所述的蜂房活性成分的制备 方法， 其特 征在于， 在所述步骤(1)中， 首先需要将晾干的蜂房粉碎后过20目药筛， 然后加入8倍体积的有 机溶剂50％甲醇水 溶液进行浸泡24h后超声1h， 共提取三次， 浓 缩后得到提取物。 3.根据权利要求1所述的蜂房活性成分的制备 方法， 其特 征在于， 在所述步骤(2)中， 将提取物溶于8倍重量的纯水中， 用有机溶剂乙酸乙酯进行萃取， 得 到乙酸乙酯萃取部位和水部位。 4.根据权利要求1所述的蜂房活性成分的制备 方法， 其特 征在于， 对所述步骤(3)中获得的活性化合物进行DPPH清除实验和LPS诱导的RAW  264.7细胞炎 症NO抑制实验， 检测出 具有抗氧化活性和抗炎活性的化 合物。 5.根据权利要求1所述的蜂房活性成分的制备方法， 其特征在于， 步骤(3)中所述活性 化合物分别为： 山奈酚(1)， 槲皮素(2)， trans ‑2‑(3',4'‑dihydroxyphenyl) ‑3‑ acetylami no‑7‑(N‑acetyl‑2"‑aminoethyl)‑1,4‑ben zodioxane(3)， trans‑2‑(3',4'‑dihydrox yphenyl) ‑3‑acetylamino ‑6‑(N‑acetyl‑2"‑aminoethyl) ‑ 1,4‑ben zodioxane(4)， trans‑2‑(3',4'‑dihydroxyphenyl) ‑3‑acetylamino ‑7‑(N‑acetyl‑2"‑ aminoethylene) ‑1,4‑benzodioxane(5)； 化合物1‑5的结构式分别为： 6.一种蜂房活性成分的分析 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)取晾干的蜂房， 采用有机溶剂结合超声提取， 收集 提取液经浓缩得到提取物； (2)将提取物用有机溶剂萃取， 收集浓 缩得到萃取物； (3)运用活性指导， 采用柱色谱层析、 高效液相 制备纯化得到活性 化合物；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115403550 A 2(4)结合不同蜂房的特征成分和蜂房代表性药物虎贞清风胶囊的有效成分， 建立蜂房 的HPLC质量分析 方法。 7.根据权利要求6所述的蜂房活性成分的分析 方法， 其特 征在于， 在所述步骤(1)中， 首先需要将晾干的蜂房粉碎后过20目药筛， 然后加入8倍体积的有 机溶剂50％甲醇水 溶液进行浸泡24h后超声1h， 共提取三次， 浓 缩后得到提取物。 8.根据权利要求6所述的针对蜂房活性成分的分析 方法， 其特 征在于， 在所述步骤(2)中， 将提取物溶于8倍重量的纯水中， 用有机溶剂乙酸乙酯进行萃取， 得 到乙酸乙酯萃取部位和水部位。 9.根据权利要求6所述的针对蜂房活性成分的分析 方法， 其特 征在于， 对所述步骤(3)中获得的活性化合物进行DPPH清除实验和LPS诱导的RAW  264.7细胞炎 症NO抑制实验， 检测出具有抗氧化活性和抗炎活性的化合物1 ‑5， 分别为： 山奈酚(1)， 槲皮 素(2)， trans‑2‑(3',4'‑dihydrox yphenyl) ‑3‑acetylamino ‑7‑(N‑acetyl‑2"‑aminoethyl) ‑ 1,4‑ben zodioxane(3)， trans‑2‑(3',4'‑dihydrox yphenyl) ‑3‑acetylamino ‑6‑(N‑acetyl‑2"‑aminoethyl) ‑ 1,4‑ben zodioxane(4)， trans‑2‑(3',4'‑dihydroxyphenyl) ‑3‑acetylamino ‑7‑(N‑acetyl‑2"‑ aminoethylene) ‑1,4‑benzodioxane(5)。 10.根据权利要求8所述的针对蜂房活性成分的分析 方法， 其特 征在于， 在所述步骤(4)中， 获取所述步骤(2)中的获得的乙酸乙酯萃取部位成分的指纹图谱， 并对活性成分进行确证； 通过相同的前处理步骤， 对不同蜂房进行酯部位指纹图谱相似性评估， 其中将酰胺类 化合物 trans‑2‑(3',4'‑dihydrox yphenyl) ‑3‑acetylamino ‑6‑(N‑acetyl‑2"‑aminoethyl) ‑ 1,4‑ben zodioxane作为质量控制成分； 在所述步骤(4)种采用不同批号虎贞清风胶囊进行质量分析， 验证确定分析 方法。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115403550 A 3