(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221085894 4.7 (22)申请日 2022.07.20 (71)申请人 江苏省食品药品监 督检验研究院 地址 210019 江苏省南京市 建邺区康文路 17号 (72)发明人 袁耀佐　赵恂　魏嘉利　张锦琳　 张玫　 (74)专利代理 机构 北京德崇智捷知识产权代理 有限公司 1 1467 专利代理师 王斌 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/64(2006.01) (54)发明名称 一种蛋黄卵磷脂有关物质的检测方法 (57)摘要 本发明提供了一种蛋黄卵磷脂有关物质的 检测方法， 涉及药物分析技术领域。 本发明采用 高效液相色谱法进行检测， 色谱条件为： 亲水相 互作用色谱柱， 流动相A： 乙酸铵水溶液 ‑乙腈 （80： 20， v/v， 其中含有5mmol/L的乙酸铵） ， 流动 相B： 乙腈， 梯度洗脱， 电喷雾检测器。 本发明提供 的方法能够实现待测组分之间的有效分离， 准确 度、 重复性、 精密度和耐用性均良好， 为蛋黄卵磷 脂产品的质量控制提供了新方法。 权利要求书1页 说明书13页 附图6页 CN 115166095 A 2022.10.11 CN 115166095 A 1.一种蛋黄卵磷脂有关物质的检测方法， 其特征在于， 采用高效液相色谱对样品进行 检测， 所述高效液相色谱的条件包括： 色谱柱： 亲水相互作用色谱柱； 流动相包括流动相A和 流动相B； 流动相A为乙酸铵水溶液 ‑乙腈为80： 20， v/v， 其中含有5mmol/L的乙酸铵； 流动相B 为乙腈； 洗脱方式为梯度洗脱， 洗脱程序如下： 0min： 7%流动相A， 93%流动相B； 0 ‑36min： 流动 相A逐渐升至21%， 流动相B逐渐降至79%； 36 ‑37min： 流动相 A逐渐降至7%， 流动相B逐渐升至 93%； 37‑47min： 7%流动相A， 93%流动相B。 2.如权利要求1所述蛋黄卵磷脂 中有关物质的检测方法， 其特征在于， 蛋黄卵磷脂的有 关物质包括磷脂酰肌醇、 溶 血磷脂酰乙醇胺、 鞘磷脂、 溶 血磷脂酰胆碱 。 3.如权利要求1所述蛋黄卵磷脂 中有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述样品包括蛋 黄卵磷脂和注射用蛋黄卵磷脂 。 4.如权利要求1所述蛋黄卵磷脂 中有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述方法中供试 品溶液、 系统适用性溶 液和对照品溶 液均采用二氯甲烷 ‑甲醇2:1,v/v配制。 5.如权利要求1所述蛋黄卵磷脂 中有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述色谱柱规格 包括Waters Xbridge HILIC， 4.6mm×250mm， 5 μm。 6.如权利要求1所述蛋黄卵磷脂 中有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述流动相流速 为1.0~1.2 mL/min。 7.如权利要求1所述蛋黄卵磷脂 中有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述色谱柱温度 为35‑40℃。 8.如权利要求1所述蛋黄卵磷脂 中有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述方法的检测 器为电喷雾检测器； 所述电喷雾检测器的雾化器温度为3 5‑65℃。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115166095 A 2一种蛋黄卵磷脂有关物质的检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于药物分析技术领域， 具体而言， 本发明涉及一种利用高效液相色谱法 测定蛋黄卵磷脂中有关物质的方法。 背景技术 [0002]蛋黄卵磷脂是从鸡蛋中提取的两亲性物质， 具有乳化性好、 生物利用度高、 致敏性 低等优点， 可作为药用辅料在脂质体、 脂肪乳、 聚合物胶束等剂型中使用， 已有多种产品上 市。 [0003]蛋黄卵磷脂是天然来源的物质， 组成复杂， 蛋黄卵磷脂的主要成分(式1 ‑2)和有关 物质(式3 ‑6)的结构差异较小， 现有的提取工艺难以除去蛋黄卵磷脂中的有关物质， 主要 有： 磷脂酰肌 醇、 溶血磷脂酰乙醇胺、 鞘磷脂、 溶血磷脂酰胆碱， 上述物质可能会导致红细胞 溶解和炎症反应。 [0004]蛋黄卵磷脂的生产厂家众多， 各厂家使用了不同的鸡蛋来源和提取手段导致了市 面上该产品的差异 性。 目前的有关物质分析方法在分离效果、 重复性、 耐用性等方面存在不 同的问题。 [0005](1)分离问题： [0006]磷脂为弱极性物质， 常用正相色谱进行分离。 由于蛋黄卵磷脂待测组分的结构相 似、 理化性质差异不大， 难以通过常规的液相方法实现待测物质的完全分离。 此外， 蛋黄卵 磷脂中还含有磷脂酰甘油、 磷脂酰丝氨酸等组分干扰待测物质的分析。 《中国药典》 法定方 法采用硅胶柱分析蛋黄卵磷脂的有关物质， 色谱图见图4。 该方法无法实现P E与PI的基线分 离， 样品中的未知杂质与PI、 LPE的分离不佳。 [0007](2)检测问题： [0008]由于磷脂 的紫外吸收较弱， 无法使用紫外检测器， 现行方法中主要使用蒸发光散 射检测器(ELSD)进行检测 。 由于蛋黄卵磷脂成分复杂、 样 品黏度较高， 当测 定较多样 品时， 雾化器和漂移管易被污染使基线噪音变大， 导致灵敏度降低， 需要 经常对仪器进 行维护。 此 外， 使用ELSD定量时， 需要对浓度和峰面积取对数后拟合标准曲线， 用标准曲线法定量， 实 验操作较为繁琐； 由于ELSD的状态较不稳定， 长时间测 定样品时， 需要每天做随行标 曲， 影 响实验效率。 [0009]上述问题主要与蛋黄卵磷脂样品的复杂性和蒸发光散射检测器的特性有关。 首 先， 蛋黄卵磷脂样品中含有多种磷脂， 部 分种类的磷脂结构相似、 极性差异小， 难以分离。 样 品中还含有盐、 脂肪酸等物质干扰待测组分的检测； 由于鸡蛋来源和提纯工艺的不同， 市面 上不同企业生产的蛋黄卵磷脂产品差异较大。 此外， ELSD的检测原理为： 通过雾化器将色谱 柱洗脱物雾化， 雾化后的细小液滴进入高温漂移管后蒸发除去流动相， 余下 的不挥发性溶 质颗粒在激光的照射下产生散射光， 通过检测散射光的强度即获得被测组分的浓度信号。 由于蛋黄卵磷脂的黏度大， 待测样品的浓度较高， 因此易 导致雾化器和漂移管的污染。 [0010]因此， 开发一种分离效果更好、 耐用性佳的方法对有关物质分析方法， 对提高用药说　明　书 1/13 页 3 CN 115166095 A 3