(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210902458.0 (22)申请日 2022.07.28 (71)申请人 江西毅植 生物科技有限公司 地址 330000 江西省南昌市南昌 高新技术 产业开发区紫阳大道2977号绿地新 都 会39#商业楼1 102室 申请人 江西红土地 化工有限公司 　 毅植农业科技有限公司 (72)发明人 李功军　周学强　彭成洲　戴权　 周志锋　李德鸿　 (74)专利代理 机构 广州科沃园专利代理有限公 司 44416 专利代理师 张帅 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01)G01N 30/06(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一种虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法 (57)摘要 本发明属于农药检测技术领域， 具体涉及一 种虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法； 本发明 采用HPLC测定方法对虫螨腈代谢产物四溴吡咯 进行检测和分析， 使用Hypersil  C18为填料的不 锈钢柱， 甲醇 ‑0.1％乙酸铵水溶液作为流动相等 度洗脱进行 组分分离， 并通过外标法对该组分进 行定量分析。 本发明的虫螨腈中的代谢产物四溴 吡咯检测方法具有较好的线性关系， 该检测方法 操作简便， 结果可靠， 拥有较好的线性关系、 精密 度和回收率， 可作为虫螨腈的代谢产物四溴吡咯 的质量控制手段。 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 CN 115290780 A 2022.11.04 CN 115290780 A 1.一种虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法， 其特征在于， 以高效液相色谱法进行检 测， 采用Hypersi l C18色谱柱， 甲醇和乙酸铵水 溶液作为流动相进行等度洗脱。 2.根据权利要求1所述的虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法， 其特征在于， 所述乙酸 铵水溶液中乙酸铵含量为0.1％， 所述甲醇和0.1％乙酸铵水溶液的体积比为(40 ‑70):(10‑ 60)。 3.根据权利要求2所述的虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法， 其特征在于， 所述甲醇 和0.1％乙酸铵水 溶液体积比为6 5： 35。 4.根据权利要求1～3任一项所述的虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法， 其特征在 于， 所述检测方法的步骤如下： S1、 标样溶 液的配制 称取四溴吡咯标样， 加流动相溶解并稀释， 摇匀静置备用， 进样前 经滤膜过滤； S2、 试样溶 液的配制 称取虫螨腈试样， 加流动相溶解并稀释， 超声波振荡后摇匀静置备用， 进样前经滤膜过 滤； S3、 HPLC测定 高效液相色谱仪开机， 待仪器基线稳定后， 连续注入数针标样溶液， 直至相邻 两针四溴 吡咯的峰面积相对变化小于1.2％， 按照标样溶液、 试样溶液、 试样溶液、 标样溶液的顺序进 行测定； S4、 含量的计算 称取虫螨腈试样将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中四溴吡咯的峰 面积分别计算平均值， 采用外标法计算试样中四溴吡咯质量分数， 两次平行测定结果代谢 产物四溴吡咯相对偏差应不大于 0.1％， 取算 术平均值作为测定结果。 5.根据权利要求4所述的虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法， 其特征在于， 所述步骤 S1、 S2中的滤膜孔径为0.45 μm。 6.根据权利要求4所述的虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法， 其特征在于， 所述步骤 S3 HPLC测定过程中的色谱柱 柱温为28 ‑34℃±2℃。 7.根据权利要求6所述的虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法， 其特征在于， 所述步骤 S3 HPLC测定过程中的色谱柱 柱温为30℃±2℃。 8.根据权利要求4所述的虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法， 其特征在于， 所述步骤 S3 HPLC测定过程中的流动相流速为1.0mL/mi n。 9.根据权利要求4所述的虫螨腈代谢产物四溴吡咯的检测方法， 其特征在于， 所述步骤 S3 HPLC测定过程中的检测波长为280nm。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115290780 A 2一种虫螨腈 代谢产物四溴吡咯的检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于本发明属于农药检测技术领域， 具体涉及一种虫螨腈代谢产物四溴吡 咯的检测方法。 技术背景 [0002]虫螨腈作为美国氰胺公司(现归属巴斯夫公司)于 1985年从链霉菌、 放线菌等微生 物中分离、 修饰、 合成的吡 咯类杀虫、 杀螨剂 。 长期的试验研究以及田间应用结果显示， 虫螨 腈对鳞翅目、 同翅目和鞘翅目等 目中的70多种害虫有着很好的防治效果。 虫螨腈因其独特 的作用机理， 对于抗性强且难以防治的老熟幼虫效果显著， 主要用于棉铃虫、 菜青虫、 斜纹 夜蛾、 苹果红蜘蛛等害虫害螨。 截至2020年底， 我国批准虫螨腈的登记可食用作物包括黄 瓜、 姜、 节瓜、 芥蓝、 韭菜、 茶叶、 大白菜、 豆角、 甘蓝、 大葱、 十字花科 蔬菜、 小白菜、 豇豆、 柑橘 梨、 苹果、 茄子， 且在甘蓝上登记产品的数量占总登记产品数量的70％以上。 研究发现虫螨 腈共有8个代谢物， 目前研究最多的属代谢产物之一的溴代吡 咯腈， 其是经毒理学评估唯一 有毒理学意义的代谢物， 因其毒性是虫螨腈的10倍而受到关注， 因此将其纳入虫螨腈杂质 农残中。 然而， 在虫螨 腈的代谢产物四溴吡咯含量也对农作 物产生影响， 对虫螨 腈农残也有 一定影响， 其分子结构如下： [0003] [0004]四溴吡咯可作用于海洋环境中的微生物而诱导生物的附着和变态(莫嘉豪.南海 孔石藻可培养细菌多样性及代谢产物四溴吡咯研究[J].生物资源,2020(4):9.)， 因此， 需 要对虫螨腈中代谢产 物四溴吡 咯含量进 行控制， 虽然 该文献对四溴吡 咯采用了HPLC的分析 方法， 通过C18色谱柱， 水 ‑乙腈作为流动相进行梯度洗脱， 且在210nm处进行分析， 但 其并未 对该检测方法进行方法学分析， 仅记载了四溴吡咯是否检出 的可能性， 并未对该检测方法 的灵敏度、 精确度、 回收性进 行分析和研究； 吴红对溴虫腈的制备过程中间产 物溴代吡 咯腈 的有效成分进行色谱分析， 采用甲醇 ‑水＝78:22(v/v)作为流动相， 获得的标准偏差≤ 0.47， 变异系数<0.36， 平均回收率为101.35％(吴红,焦九英,蒋松钰,等.溴代吡咯腈高效 液相色谱分析[J].科技信息,2013(9):2)， 该方法对于溴代吡咯腈的有效成分分析具有良 好的准确度和精密度， 但其并未涉及溴虫腈(虫螨腈)与四溴吡咯的分离方法， 由于溴虫腈 (虫螨腈)和四溴吡咯同属于溴代吡咯化合物， 两者的化学结构差异较大， 且高效液相色谱 是灵敏度非常高的精密仪器， 因化合物的极性等理化性质影响分离和检测的精密度和准确 度， 该文献并不能揭示虫螨腈与四溴吡咯的分离方法以及 效果； 国外文献也曾报道过发现 四溴吡咯对于海洋 生物的影响(Sneed  J M,Sharp K H,Ritchie K B,et al.The chemical  cue tetrabromopyrrole  from a biofilm bacterium  induces settlement  of multiple   Caribbean corals[J].Proceedings  of the Royal Society B Biological  Sciences,说　明　书 1/6 页 3 CN 115290780 A 3