(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210945034.2 (22)申请日 2022.08.08 (71)申请人 陕西中医药大学 地址 712000 陕西省咸阳市秦都区渭阳中 路1号 (72)发明人 董泰玮　邹俊波　秦媛　张小飞　 史亚军　孙静　问思华　杨焕　 (74)专利代理 机构 成都高远知识产权代理事务 所(普通合伙) 51222 专利代理师 全学荣　张娟 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/74(2006.01)G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种维血宁合剂的HPLC 检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种维血宁合剂及其中间品 的HPLC检测方法， 它包括如下步骤： 1)对照品溶 液制备； 2)供试品溶液制备； 3)分别吸取对照品 溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪。 本发明 首次采用HPLC建立维血宁合剂中表儿茶素、 木犀 草素、 染料木素、 芒柄花素、 槲皮素、 虎杖苷、 儿茶 素和白藜芦醇8种成分的含量测定方法， 并且采 用外标法和一测多评法对比维血宁合剂的含量 差异， 验证实验方法的可行性。 同时， 通过建立3 批维血宁合剂提取液、 清膏、 成 品的指纹图谱， 并 识别出27个共有峰， 建立从 “中间体‑成品”的质 量管理体系， 完善了维血宁合剂的质量控制方 法。 权利要求书2页 说明书17页 附图1页 CN 115326955 A 2022.11.11 CN 115326955 A 1.一种维血宁合剂及其中间 品的HPLC检测方法， 其特 征在于： 它包括如下步骤： 1)对照品溶液制备： 取儿茶素、 表儿茶素、 染料木素、 芒柄花素、 槲皮素、 虎杖苷、 白藜芦 醇和/或木犀草素对照品， 加甲醇溶解稀释成溶 液， 即得对照品溶 液； 2)供试品溶液制备： 取待检样品， 加甲醇溶 液溶解， 过滤， 取滤液作为供 试品溶液； 3)分别吸取对照品溶 液和供试品溶液注入高效液相色谱仪； 色谱条件如下： 色谱柱： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 流动相： 以甲醇为流动相A， 以0.2％磷酸 水为流动相B； 梯度洗脱 程序0～5min， 75％B； 5～15min， 75％B →65％B； 15～2 5min， 65％B → 55％B； 25～35min， 55％B →40％B； 35～45min， 40％B →30％B； 45～ 55min， 30％B →20％B； 55 ～60min， 20％B→65％B； 60～62min， 65％B→75％B。 2.根据权利 要求1所述的HPLC检测方法， 其特征在于： 步骤1)所述对照品与甲醇的质量 体积比为0.5～ 250 μg： 1ml。 3.根据权利 要求1所述的HPLC检测方法， 其特征在于： 步骤2)所述待检样品和甲醇的体 积比为1～5ml： 1～5 0ml。 4.根据权利要求3所述的HPLC检测方法， 其特征在于： 所述待检样品为维血宁合剂或其 中间品。 5.根据权利要求4所述的HPLC检测方法， 其特征在于： 所述中间品为维血宁合剂的原料 药提取液或原料 药提取液浓缩的清膏。 6.根据权利要求1所述的HPLC检测方法， 其特征在于： 步骤3)所述色谱条件中色谱柱： Acclaim120  C18， 250mm ×4.6mm,5 μm， 柱温30℃， 进样量10～50 μL， 流速为1ml/min， 检测波 长： 210nm。 7.根据权利要求1～6任意一项所述的HPLC检测方法， 其特征在于： 所述维血宁合剂及 其中间品的指纹图谱中有应有27个共有 特征峰， 所述共有 特征峰包含与儿茶素、 表儿茶素、 染料木素、 芒柄花素、 槲皮素、 虎杖苷、 白藜 芦醇和木犀草素相应的色谱峰。 8.一种维血宁合剂及其中间品指标成分的含量测定方法， 其特征在于： 它包括如下步 骤： 1)取维血宁合剂或其中间品， 以及儿茶素、 表儿茶素、 染料木素、 芒柄花素、 槲皮素、 虎 杖苷、 白藜 芦醇和/或木犀草素对照品， 按权利要求1～6任一项所述方法检测； 2)按外标法以峰面积计算维血宁合剂 或其中间品中儿茶素、 表儿茶素、 染料木素、 芒柄 花素、 槲皮素、 虎杖苷、 白藜 芦醇和/或木犀草素的含量。 或： 1)取维血宁合剂或其中间品， 以及儿茶素、 表儿茶素、 染料木素、 芒柄花素、 槲皮素、 虎 杖苷、 白藜 芦醇、 木犀草素对照品中的任意 一种， 按权利要求1～6任一项所述方法检测； 2)先按外标法以峰面积计算维血宁合剂 或其中间品中对照品对应成分含量， 再使用相 对校正因子计算维血宁合剂或其中间 品中其余成分的含量。 9.根据权利要求8所述含量测定方法， 其特征在于： 所述相对校正因子按照下述方法得 到： 取儿茶素、 表儿茶素、 染料木素、 芒柄花素、 槲皮素、 虎杖苷、 白藜芦醇和木犀草素对照 品， 根据权利要求1～3、 6任意一项所述方法检测， 择一对照品为内参物， 根据如下公式计 算：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115326955 A 2fs/i＝fs/fi＝As×Ci/(Ai×Cs)； 式中As为内参物s峰面积， Cs为内参物s浓度， Ai为组分i 峰面积， Ci为组分i浓度。 10.根据权利要求9所述的含量测定方法， 其特征在于： 所述内参物为虎杖苷时， 虎杖苷 与儿茶素的相对矫正因子为0.3754， 虎杖苷与表儿茶素的相对矫正因子为0.3486， 虎杖苷 与染料木素的相对矫正因子为0.5887， 虎杖苷与芒柄花素的相对矫正因子为0.6599， 虎杖 苷与槲皮素的相对矫正因子为0.5972， 虎杖苷与白藜芦醇 的相对矫正因子为0.5853， 虎杖 苷与木犀草素的相对矫 正因子为0.5176 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115326955 A 3