(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210838032.3 (22)申请日 2022.07.18 (71)申请人 镇江威特 药业有限责任公司 地址 212000 江苏省镇江市镇江新区大港 华阳路268号 (72)发明人 曹超　黄文江　贺文庆　 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 一种硫酸粘菌素含量的检测方法 (57)摘要 本发明提供了一种硫酸粘菌素含量的检测 方法， 包括如下步骤： (1)精密称定硫酸粘菌素， 用流动相稀释样品至一定浓度， 过滤， 取适量滤 液进行高效液相色谱分析； (2)高效液相色谱条 件： 色谱柱： 选用十八烷基硅胶为填充剂 的色谱 柱， 型号与规格为ODS ‑BP250*4.6， 5μm； (3)配制 标准品溶液并对标准品溶液进行高效液相色谱 分析； (4)测定峰面积， 计算样品的含量。 本发明 提供的一种硫酸粘菌素含量的检测方法， 不同于 抗生素效价法的操作繁琐， 检测消耗的时间过 长， 通过高效液相色谱分析， 操作 简单、 数据准确 且检测用时少。 权利要求书1页 说明书2页 CN 115128191 A 2022.09.30 CN 115128191 A 1.一种硫酸粘菌素含量的检测方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： S1、 精密称定样品， 用流动相稀释样品至一定浓度， 过滤， 取适量滤液进行高效液相色 谱分析； S2、 高效液相 色谱条件： 色谱柱： 选用十八烷基硅胶为填充剂的色谱柱， 型号与规格为 ODS‑BP250*4.6， 5 μm； 流动相： 由无 水硫酸钠和乙腈混合组成， 加入酸 性物质调节流动相PH 至2‑3； 流速： 0.5 ‑1.5ml/mi n； 紫外检测器波长： 20 0nm‑300nm； 进样体积： 15 ‑25 μL； S3、 标准品溶液配制(精密称取对照品适量， 用流动相西事成每1ml含硫酸粘菌素0.5mg 的溶液)， 并对标准品溶 液进行高效液相色谱分析； S4、 测定峰面积， 计算样品的含量。 2.根据权利要求1所述的一种硫酸粘菌素含量的检测方法， 其特征在于， S2中流动相体 积配比为无 水硫酸钠： 乙腈 ＝70： 30。 3.根据权利要求1所述的一种硫酸粘菌素含量的检测方法， 其特征在于， S1中所述的一 定浓度为含 硫酸粘菌素0.5mg/ml。 4.根据权利要求1所述的一种硫酸粘菌素含量的检测方法， 其特征在于， S2中所述的无 水硫酸钠的浓度为0.1mo l/L。 5.根据权利要求1所述的一种硫酸粘菌素含量的检测方法， 其特征在于， S2中所述的紫 外检测器波长为214 nm， 进样体积为20 μL。 6.根据权利要求1所述的一种硫酸粘菌素含量的检测方法， 其特征在于， S2中所述的酸 性物质为磷酸。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115128191 A 2一种硫酸粘菌素含量的检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于药物分析 领域， 更具体的是 涉及一种硫酸粘菌素含量的检测方法。 背景技术 [0002]硫酸粘菌素(ColistinSulphate， 又称硫酸粘杆菌素、 硫酸抗敌素、 克利斯汀 (Colistin)、 多粘菌素E(PolymyxinE)、 抗敌素等,)分子式为C52H98N16O13·2H2SO4， 分子量为 1352。 纯品为白色或类白色粉末， 易溶于水。 预混剂为浅褐色或褐色颗粒或粉末。 ,易溶于 水,耐热,消化道 不易吸收,排泄迅速,毒性小,无副作用,不易产生 耐药性菌株,是最安全的 畜禽促生长抗生素之一。 硫酸粘菌素是碱性多肽类抗生素， 主要用于防治敏感菌的感染和 促进畜禽生长。 硫酸粘菌素可以与细胞膜脂蛋白游离磷酸盐结合， 使得细胞膜表面张力减 小、 通透性增加， 导致胞浆外流， 细胞死亡。 硫酸粘菌素对革兰氏阴性菌(尤其大肠杆菌、 沙 门氏菌、 绿脓杆菌和嗜血杆菌等)有强抑制作用， 对革兰氏阳性菌(除金黄葡萄球菌和溶血 性链球菌外)  和真菌无作用。 硫酸粘菌素口服难以吸收， 毒性较低， 不易造成药物残留， 不 易产生耐药性。 [0003]目前 《中华人名共和国兽药典》 以及 《中华人名共和国药典》 中规定的硫酸粘菌 的 检测方法均为抗生素效价法， 该方法存在的检测操作繁琐， 检测耗时过长的特征， 不适宜企 业生产产品及时检测的要求。 发明内容 [0004]为解决现有技 术的不足， 现提供一种硫酸粘菌素含量的检测方法， 包括如下步骤： [0005]包括如下步骤： [0006]S1、 精密称定样品， 用流动相稀释样品至一定浓度， 过滤， 取适量滤液进行高效液 相色谱分析； [0007]S2、 高效液相色谱条件： 色谱柱： 选用十八烷基硅胶为填充剂的色谱柱， 型号与规 格为 ODS‑BP250*4.6， 5 μm； [0008]流动相： 由无 水硫酸钠和乙腈混合组成， 加入酸 性物质调节流动相PH 至2‑3； [0009]流速： 0.5 ‑1.5ml/mi n； [0010]紫外检测器波长： 20 0nm‑300nm； [0011]进样体积： 15 ‑25 μL； [0012]S3、 标准品溶液配制(精密称取对照品适量， 用流动相西事成每1ml含硫酸粘菌素 0.5mg 的溶液)， 并对标准品溶 液进行高效液相色谱分析； [0013]S4、 测定峰面积， 计算样品的含量。 [0014]优选的， S2中流动相体积配比为无 水硫酸钠： 乙腈 ＝70： 30。 [0015]优选的， S1中所述的一定浓度为含 硫酸粘菌素0.5mg/ml。 [0016]优选的， S2中所述的无 水硫酸钠的浓度为0.1mo l/L。 [0017]优选的， S2中所述的紫外检测器波长为214 nm， 进样体积为20 μL。说　明　书 1/2 页 3 CN 115128191 A 3