(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211001980.8 (22)申请日 2022.08.22 (71)申请人 珠海润都制药股份有限公司 地址 519090 广东省珠海市金湾区三灶镇 机场北路6号 申请人 润都制药 （荆门） 有限公司 (72)发明人 张敏　李达胜　汤伟彬　蔡强　 兰柳琴　 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯 的检验方法 (57)摘要 本发明属于药物分析技术领域， 具体涉及一 种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检测 方法， 为解决盐酸甲砜霉素甘氨 酸酯中氯甲酸乙 酯的检测问题， 提供了一种便捷、 高效、 准确的检 测方法， 该方法通过衍生试剂二乙胺进行柱前衍 生化， 衍生后生成N,N ‑二乙基乙氧基甲酰胺， 在 GC‑MS/MS中进行检测， 能检测盐酸甲砜霉素甘氨 酸酯中氯甲酸乙酯的含量， 从而有效保障用药安 全， 便于盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量控制， 该 方法便捷、 高效、 准确， 在系统适用性、 重复性、 专 属性、 准确度方面完全符合中国药 典方法验证的 指导原则， 可用于盐酸甲砜霉素甘氨 酸酯的质量 控制。 权利要求书1页 说明书11页 附图5页 CN 115452973 A 2022.12.09 CN 115452973 A 1.一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检验方法， 其特征在于， 所述检测方法 包括以下步骤： （1） 配制溶 液， 分别配制空白溶 液、 灵敏度溶 液、 对照品溶 液和供试品溶液； （2） 测定方法： 采用GC ‑MS/MS测定盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的含量， 待系统 稳定后， 分别进空白溶 液、 灵敏度溶 液、 对照品溶 液和供试品溶液， 记录色谱图； 色谱条件如下： 色谱柱： 以6%氰丙基/苯基和94%聚二甲基硅氧烷为 固定液的毛细管柱， 柱温： 初始柱温 为80℃， 保持2min， 以30℃/min的速率升温至140℃， 保持1min， 再以50℃/min的速率升温至 220℃， 保持7min； 进样口温度： 2 50℃， 载气流速： 2.0ml/min， 分流比： 1:1， 载气： He， 进样量： 1 μl， 洗针液A： 二氯甲烷， 洗针液B： 乙腈； 质谱条件如下： 离子源温度： 230℃， 气相色谱 ‑质谱接口温度： 240℃， 离子源电压： 70eV， 检测模式： MRM， 增益因子： 5， 溶剂切除时间： 0~3.5min， 质量杆温度： 150℃， MRM参数设 置： 。 2.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述空白溶液： 取离心管， 加入衍生 剂、 乙腈和ISTD溶 液， 混匀， 再加入二氯甲烷， 混匀， 静置10mi n， 取下层； 所述ISTD溶液为： 移取N ‑亚硝基甲基乙基胺标准溶液适量至量瓶中， 加乙腈稀释至刻 度， 摇匀； 所述对照品溶液： 取氯甲酸乙酯对照品适量置于量瓶中， 加入 乙腈稀释至刻度， 摇匀， 配制成浓度合适的对照品储 备液； 取离心管， 加入衍生剂、 对照品储备液和ISTD溶液， 混匀， 再加入二氯甲烷， 混匀， 静置10mi n， 取下层； 所述灵敏度溶液： 取对照品储备液适量， 置于量瓶中， 加乙腈稀释至刻度， 摇匀， 配制成 浓度合适的灵敏度储备液； 取离心管， 加入衍生剂、 灵敏度储 备液和ISTD溶液， 混匀， 再加入 二氯甲烷， 混匀， 静置10mi n， 取下层； 所述供试品溶液： 取供试品适量， 精密称定， 置离心管中， 加入衍生剂、 乙腈和ISTD溶 液， 振摇至供 试品完全溶解， 再加入二氯甲烷， 混匀， 静置10mi n， 取下层； 所述色谱柱为Agi lent DB‑624， 30m×0.32mm， 1.8µm或效能相当的毛细管柱。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115452973 A 2一种盐酸甲 砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检验方 法 技术领域 [0001]本发明属于药物分析技术领域， 具体涉及 一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙 酯的检测方法。 背景技术 [0002]盐酸甲砜霉素甘氨酸酯是甲砜霉素的衍生物， 是氯霉素的同类物， 抗菌谱和抗菌 作用与氯霉素相似， 其水溶性好， 当溶液的pH值增高或受到体内酶的作用后， 迅速释放出甲 砜霉素而发挥作用， 盐酸甲砜霉素甘氨酸酯拓宽了甲砜霉素 的临床应用， 克服了其水溶性 差的劣势。 [0003]氯甲酸乙酯， 化学结构： ， 是盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的合成物料， 可 能残留在盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中， 氯甲酸乙酯酰卤类基因毒性杂质， 因此， 在盐酸甲砜霉 素甘氨酸酯生产过程中需要严格控制其含量， 参考ICH  M7毒理学阈值TTC  =1.5µg/day， 盐 酸甲砜霉素甘氨酸酯片中盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的最大日剂量为1g/ day， 用限度=TTC/最 大日剂量的公式计算得到氯甲酸乙酯的限度为1.5p pm。 [0004]目前文献报道的氯甲酸乙酯的检测方法多为气相色谱法， 本发明公开了采用GC ‑ MS/MS测定盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检测方法， 通过衍生试剂二乙胺进行柱 前衍生化， 衍生后生 成N,N‑二乙基乙氧基甲酰胺， 使用GC ‑MS/MS方法进行检测， 为解决盐酸 甲砜霉素甘氨酸酯 中氯甲酸乙酯的检测问题， 提供了一种便捷、 高效、 准确的检测方法， 该 方法能检测盐酸甲砜霉素甘氨酸酯 中氯甲酸乙酯的含量， 从而有效保障用药安全， 便于盐 酸甲砜霉素甘 氨酸酯的质量控制。 发明内容 [0005]本发明提供一种采用GC ‑MS/MS测定盐酸 甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检测 方法， 为解决盐酸甲砜霉素甘氨酸酯 中氯甲酸乙酯的检测问题， 提供了一种便捷、 高效、 准 确的检测方法， 该方法能检测盐酸甲砜霉素甘氨酸酯 中氯甲酸乙酯的含量， 从而有效保障 用药安全， 便于盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量控制， 该方法便捷、 高效、 准确， 在系统适用 性、 重复性、 专属性、 准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则， 可用于盐酸甲砜 霉素甘氨酸酯的质量控制。 [0006]为实现上述目的， 本发明提供如下技 术方案： 一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检验方法， 所述检测方法包括以下步 骤： （1） 配制溶 液， 分别配制空白溶 液、 灵敏度溶 液、 对照品溶 液和供试品溶液； （2） 测定方法： 采用GC ‑MS/MS测定盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的含量， 待 系统稳定后， 分别进空白溶 液、 灵敏度溶 液、 对照品溶 液和供试品溶液， 记录色谱图； 色谱条件如下:色谱柱： 以6%氰丙基/苯基和94%聚二 甲基硅氧烷为固定液的毛细说　明　书 1/11 页 3 CN 115452973 A 3