(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210921676.9 (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 兆科 （广州） 眼科 药物有限公司 地址 511462 广东省广州市南沙区珠 江工 业园美德三路1号自编A区5层5 01房 (72)发明人 谢志军　 (74)专利代理 机构 北京东正专利代理事务所 (普通合伙) 11312 专利代理师 蔡仲德 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/32(2006.01) G01N 30/54(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一种环孢素A制剂中有关物质的分析方法及 其应用 (57)摘要 本发明公开了一种全新的环孢素A制剂中有 关物质的分析方法， 其色谱条件如下： 检测波长： 210‑230nm柱温： 50 ‑60℃流速： 0.8 ‑1.5ml/min流 动相A： 乙腈(0.085％磷酸)； 流动相B： 异丙醇 (0.085％磷 酸)； 流动相C： 水(0.1 ％磷酸)本发明 的分析检测方法， 能很好的同时解决辅料干扰和 众多有关物质的分离度问题， 也为本类制剂的有 关物质的质量标准制定提供了一种有效的方法。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 115266996 A 2022.11.01 CN 115266996 A 1.一种环孢素A制 剂中有关物质的分析方法， 其特征在于， 所述分析方法为高压液相色 谱法， 其条件为： 采用以十 八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱； 流动相包括流动相A、 流 动相B、 流动相C； 所述流动相A为磷酸 ‑乙腈溶液， 其中磷酸的浓度为0.05％～0.1％； 所述流 动相B为磷酸 ‑异丙醇溶液， 其中磷酸的浓度为0.05％～0.1％； 所述流动相C为磷酸水溶液， 其中磷酸的浓度为0.0 5％～0.2％。 2.如权利要求1所述环孢素A制剂中有关物质的分析方法， 其特征在于， 所述高压液相 色谱法的检测波长为210 ‑230nm。 3.如权利要求1所述环孢素A制剂中有关物质的析方法， 其特征在于， 所述高压液相色 谱法的柱温为5 0～60℃。 4.如权利要求1所述环孢素A制剂中有关物质的分析方法， 其特征在于， 所述高压液相 色谱法的流速为0.8～1.5ml/mi n。 5.如权利要求1所述环孢素A制剂中有关物质的分析方法， 其特征在于， 所述高压液相 色谱法的色谱柱为Waters色谱柱、 Agilent色谱柱、 Thermo色谱柱、 Phenomenex色谱柱、 Shimatsu色谱柱或Y MC色谱柱中的一种或几种。 6.如权利要求1所述环孢素A制剂中有关物质的分析方法， 其特征在于， 所述高压液相 色谱法采用梯度检测， 其洗脱条件为： 0‑20min： 流动相由5 0％的流动相A和5 0％的流动相C组成， 流速为1.0 0ml/min； 20min之后至100min： 流动相由35％的流动相A、 20％的流动相B和45％的流动相C组成， 流速为1.5 0ml/min； 100min之后： 流动相由5 0％的流动相A和5 0％的流动相C组成， 流速为1.0 0ml/min。 7.如权利要求1所述环孢素A制剂中有关物质的分析方法， 其特征在于， 所述有关物质 包括聚氧乙烯(3 5)蓖麻油。 8.如权利要求1所述环孢素A制剂中有关物质的分析方法， 其特征在于， 所述有关物质 包括环孢素B、 环 孢素C、 环 孢素D、 环 孢素H， 异 环孢素A、 异 环孢素H的一种或几种。 9.如权利要求1所述环孢素A制剂中有关物质的分析方法， 其特征在于， 所述制剂为凝 胶制剂。 10.一种权利要求1 ‑9任一项所述环孢素A制 剂中有关物质的分析方法在制备药物上可 接受纯度的环 孢素A制剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115266996 A 2一种环孢素A制剂中有关物质的分析方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分析化学以及医药领域， 特别涉及一种环孢素A制剂中有关物质分析 方法及其应用。 背景技术 [0002]环孢素A(cyclosprine,CyA)是由11个氨基酸 组成的环状多肽， 是土壤中一种真菌 的活性代谢物。 环孢素A为白色或类白色粉末， 无臭无味。 在甲醇、 乙醇或乙腈中极易溶解， 在醋酸乙酯中易溶， 在丙酮或乙醚中溶解， 在水中几乎不溶。 临床是一般采用聚氧乙烯蓖麻 油、 蓖麻油或吐温等 非离子表面活性剂进行增溶。 环孢素A中目前已经知道的杂质有6种， 分 别是环孢素B、 环 孢素C、 环 孢素D、 环 孢素H， 异 环孢素A、 异 环孢素H。 [0003]干眼病(dry  eye disease， DED)又名角结膜干燥症(KCS)， 是指任何原因造成的泪 液质或量异常或动力学异常， 导致泪膜稳定性下降， 并伴有眼部不适和(或)眼表组织病变 特征的多种疾病的总称。 它是目前最 为常见的眼表疾病， 主 要治疗方法是使用人工泪液。 [0004]环孢素A是一种免疫抑制剂， 它可抑制干眼症相关的眼睛炎症， 进而促进患者的眼 泪分泌。 但也有研究表明， 环孢素可以通过神经激动作用而促进眼泪的分泌。 此外， 环孢素 还可以抑制结膜杯状细胞 的凋亡。 因此， 环孢素治疗干眼症的作用机制可能包括了免疫抑 制作用、 促进眼泪分泌以及抑制结膜杯状细胞的凋亡。 [0005]目前上市的环孢 素A制剂主要是注射液、 乳剂、 胶囊等， 美国FDA于2002年12月批准 ALLERGAN公司的环孢素眼用乳剂(规格为0.05％； 商品名： )上市， 是由环孢素 加适宜的增溶剂、 凝胶基质、 保湿剂、 pH调节剂和注 射用水制成的凝胶剂， 每天给药一次， 单 眼每次30mg， 用于治疗中度至 重度泪液缺乏型干眼病。 [0006]目前已经在中国药典 公开了环 孢素A原料的检测方法， 其具体为： [0007]色谱柱： C18色谱柱(15 0×4.6mm， 5um)； [0008]流动相： 乙腈 ‑水‑叔丁基甲醚 ‑磷酸(430:520:50:1)； [0009]流速： 1.0ml/mi n； [0010]柱温： 70℃； [0011]波长： 220nm； [0012]进样量： 80ul。 [0013]上述检测方法的问题是， 同时检测多个杂质的专属性不好， 杂质于主峰的分离度 欠佳， 个别杂质峰出峰过早， 空白辅料干扰出峰早的杂质检测。 且混标检测后， 前面的两个 杂质分离度很差(远小于1.5)， 而且主峰后的杂质根本无法实现基线分离， 无法同时对多个 已知杂质进 行检测。 因此需建立一个新的有关物质检测方法， 从而能够检测和分离以上6个 已知杂质(环 孢素B、 环 孢素C、 环 孢素D、 环 孢素H， 异 环孢素A、 异 环孢素H)及其 他未知杂质。 [0014]环孢素眼用凝胶属于化学药 品2.2类改良型新药。 根据化学药 品2.2类新药的申报 要求以及 《化学药物制剂研究基本技术指导原则》 等文件要求， 对制剂的有关物质控制十分 严格， 但目前国内外专利和药典法案等， 胶 囊、 注射液等 都有没有对有关物质提出有效检测说　明　书 1/5 页 3 CN 115266996 A 3