(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210865615.5 (22)申请日 2022.07.21 (71)申请人 上海烟草 集团有限责任公司 地址 200082 上海市杨 浦区长阳路717号 (72)发明人 王天南　陈敏　董惠忠　李俊杰　 吴达　刘百战　 (74)专利代理 机构 上海光华专利事务所(普通 合伙) 31219 专利代理师 金彦　许亦琳 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/46(2006.01) (54)发明名称 一种烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷 的分析方法及二维液相色谱质谱联用系统 (57)摘要 本发明提供一种烟草羟基香叶基芳樟醇二 萜烯醇糖苷的分析方法及二维液相色谱质谱联 用系统。 该方法包括如下步骤： 对烟叶进行前处 理， 采用二维液相色谱质谱 联用法对 前处理所得 待测样品进行定性定量分析： 通过第一维液相色 谱分离出目标组分， 目标组分经补液稀释后进行 捕集， 再将捕集成分洗脱后由第二维液相色谱进 行分离， 通过质谱进行定性定量分析。 该系统包 括第一维液相色谱、 补偿泵、 连通接口、 切换阀、 捕集柱、 第二维液相色谱、 质谱和紫外检测器。 本 发明灵敏度高、 准确性好， 实现7种HGL ‑DTGs半定 量测定。 权利要求书2页 说明书7页 附图1页 CN 115184503 A 2022.10.14 CN 115184503 A 1.一种烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法， 其特征在于， 包括如下步骤： 对烟叶进 行前处理， 采用二 维液相色谱质谱联用法对前处理所得待测样品进 行定性定量分 析： 通过第一 维液相色谱分离出目标 组分， 目标 组分经补液稀释后进 行捕集， 再将捕集 成分 洗脱后由第二维液相色谱进行分离， 通过质谱进行定性定量分析。 2.如权利要求1所述的烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法， 其特征在于， 所述前处 理包括如下步骤： 1)将所述烟叶在液氮下粉碎和磨粉； 2)将步骤1)得到的烟叶在有机溶剂中进行振荡， 离心后过膜， 即得待测样品。 3.如权利要求1所述的烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法， 其特征在于， 还包括如下技 术特征中的至少一项： a)所述第一维液相色谱的条件为： 第一维液相色谱： 反相液相色谱； 第一维色谱柱： CAPCELL PAK MGIIIC18； 流速： 0.05～1mL/min； 柱温： 2 0～60℃； 进样量： 1～2 0.0 μL； 第一维 流动相A相： 水+0.0 5～2％甲酸； 第一维流动相B相： 甲醇+0.0 5～2％甲酸； 梯度淋洗； b)所述第二维液相色谱的条件为： 第二维液相色谱： 反相液相色谱； 第二维色谱柱： Agilent ZORBAX 300SB C18； 流速： 0.05～1mL/min； 柱温： 2 0～60℃； 第二维流动相A相： 水+ 0.05～2％甲酸； 第二维流动相B相： 乙腈+0.0 5～2％甲酸； 梯度淋洗 。 4.如权利要求3所述的烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法， 其特征在于， 特征a)中， 所述梯度淋洗的具体程序为： 0～5min， 第一维流动相A相： 第一维流动相B相体积比为70： 3 0； 5～20min， 第一维流动相A相： 第一维流动相B相体积比为70： 3 0～5： 95； 20～25min， 第一维流动相A相： 第一维流动相B相体积比为5： 95； 25～26min， 第一维流动相A相： 第一维流动相B相体积比为5： 95～70： 3 0； 26～50min， 第一维流动相A相： 第一维流动相B相体积比为70： 3 0。 5.如权利要求3所述的烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法， 其特征在于， 特征b)中， 所述梯度淋洗的具体程序为： 0～22min， 第二维流动相A相： 第二维流动相B相体积比为95： 5； 22～27min， 第二维流动相A相： 第二维流动相B相体积比为95： 5～70： 3 0； 27～37mi n， 第二维流动相A相： 第二维流动相B相体积比为70： 3 0～40： 60； 37～37.1mi n， 第二维流动相A相： 第二维流动相B相体积比为 40： 60～5： 95； 37.1～45mi n， 第二维流动相A相： 第二维流动相B相体积比为5： 95； 45～45.1mi n， 第二维流动相A相： 第二维流动相B相体积比为5： 95～ 95： 5； 45.1～50min， 第二维流动相A相： 第二维流动相B相体积比为95： 5 。 6.如权利要求1所述的烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法， 其特征在于， 所述捕集的条件为： 捕集柱： Thermo  scientific  Acclaim Polar Advantage II； 补液： 水； 柱温： 20～6 0℃； 切割时间： 16.8mi n～21.8min； 补液流速0～15min， 0.1～1mL/min； 16～22min， 0.1～1.0mL/min； 23～30min， 0.1～权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115184503 A 21mL/min。 7.如权利要求1所述的烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法， 其特征在于， 所述质谱的条件为： 电喷雾离子源， 负 离子扫描， 多反应检测MRM模式； 电喷雾电压： ‑3000～ 6000V； 离子源温度： 200～600℃； 离子对的驻留监测时间： 10～100ms； 雾化气压力： 20～ 60Psi； 辅助气压力： 20～6 0Psi； 质谱扫描时间： 27～37mi n。 8.如权利要求1所述的烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法， 其特征在于， 烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷包括Lyciumoside  I、 Nicotianoside  I、 Nicotianoside  III、 Nicotianoside  IV、 Nicotianoside  V、 Nicotianoside  VI和 Nicotianoside VII。 9.一种二维液相色谱质谱联用系统， 其特征在于， 包括第一维液相色谱(1)、 补偿泵 (2)、 连通接口(3)、 切换阀(4)、 捕集柱(5)、 第二维液相色谱(6)、 质谱(7)和紫外检测器(8)； 所述第一维液相色谱(1)包括连通的第一维泵(11)和第一维色谱柱(12)， 所述第二维 液相色谱(6)包括连通的第二维泵(61)和第二维色谱柱(62)； 所述连通接 口(3)经管线分别与所述第一维色谱柱(12)的出样端、 所述补偿泵(2)、 和 所述切换阀(4)连通； 所述第二维色谱柱(62)的出样端与所述质谱(7)连通； 所述切换阀(4)分别与所述第二维泵(61)、 所述第二维色谱柱(62)的进样端、 所述捕集 柱(5)的进样端和出样端和所述 紫外检测器(8)连通。 10.如权利要求9所述的二维液相色谱质谱联用系统， 其特征在于， 所述切换阀(4)至少 设有第1接口(41)、 第2接口(42)、 第3接口(43)、 第4接口(44)、 第5接口(45)和第6接口(46)， 所述第一接口(41)与所述捕集柱(5)的进样端 连通， 所述第2接口(42)与所述第二 维色谱柱 (62)的进样端连通， 所述第3接口(43)与所述第二维泵(61)连通， 所述第4接口(44)与所述 捕集柱(5)的出样端连通， 所述第5接口(45)与所述紫外检测器(8)连通， 所述第6接口(46) 与所述连通接口(3)连通。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115184503 A 3