(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211033135.9 (22)申请日 2022.08.26 (71)申请人 上海和黄药业有限公司 地址 201401 上海市奉贤区肖业路38 8号 (72)发明人 沈丹萍　张正光　温方方　姜鹏　 詹常森　 (74)专利代理 机构 上海光华专利事务所(普通 合伙) 31219 专利代理师 许亦琳　余明伟 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/86(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01)G01N 30/32(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一种测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法及 应用 (57)摘要 本发明提供一种测定甘露消毒丸UPLC指纹 图谱方法。 本发 明还提供了上述测定甘露消毒丸 UPLC指纹图谱方法在甘露消毒丸中成分的质量 检测中的用途及其质量检测方法。 本发明进一步 提供了上述甘露消毒丸中6种成分含量的测定方 法。 本发明更进一步提供了一种甘露消毒丸中多 味药材指纹图谱的筛选方法。 本发 明提供的一种 测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法及应用， 建立 了甘露消毒丸的超高效液相指纹图谱， 能够对甘 露消毒丸中6个化学成分进行了定量分析， 并对 甘露消毒丸中各单味药材色谱峰进行了归属确 证， 能够从原料源头进行有效监测， 严格控制原 药材的质量， 可用于生产过程的质量控制， 从而 保证临床用药的安全 有效性。 权利要求书3页 说明书12页 附图2页 CN 115267010 A 2022.11.01 CN 115267010 A 1.一种测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法， 包括以下步骤： 1)供试品溶液的制备： 将甘露消毒丸样品加入溶剂溶解， 超声提取后冷却， 过滤， 即得 供试品溶液； 2)对照品溶液的制 备： 将绿原酸、 连翘酯苷A、 3,5 ‑O‑二咖啡酸酰基奎宁酸、 黄芩苷、 汉 黄芩苷、 黄芩素对照品， 加入溶剂溶解并定容， 配成对照品溶 液； 3)测定： 采用相同色谱条件的超高效液相色谱法分别测定供试品溶液和对照品溶液， 获得供试品溶液的指纹图谱和对照品溶液的指纹图谱， 将供试品溶液的指纹图谱与对照品 溶液的指纹图谱进行比较， 对供试品溶液指纹图谱中的指标成分进行归属定位， 从而获得 甘露消毒丸UPLC指纹图谱。 2.根据权利 要求1所述的一种测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法， 其特征在于， 步骤1) 或2)中， 包括以下 条件中任一项或多 项： A1)步骤1)或2)中， 所述溶剂为甲醇； A2)步骤1)中， 所述甘露消毒丸加入的质量与溶剂加入的体积之比为0.8:15～25， g/ mL； A3)步骤1)中， 所述超声提取的时间为20～40分钟。 3.根据权利 要求1所述的一种测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法， 其特征在于， 步骤3) 中， 所述超高效液相色谱法的色谱条件为： 色谱柱为T3 色谱柱； 检测器为光电二极管阵列检 测器； 检测波长为260～270nm； 柱温为30～40℃； 流速为0.3～ 0.5mL/min； 进样量为0.6～2 μ L； 流动相为乙腈 ‑0.05～0.15％磷酸水溶液， 其中， A相为乙腈， B相为0.05～0.15％磷酸水 溶液； 分析时间为 45min； 梯度洗脱。 4.根据权利要求3所述的一种测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法， 其特征在于， 所述梯 度洗脱的具体程序为： 0～10min， A相： B相体积比为10： 90 ‑15： 85； 10～13mi n， A相： B相体积比为15： 85 ‑20： 80； 13～16mi n， A相： B相体积比为20： 80 ‑20： 80； 16～20min， A相： B相体积比为20： 80 ‑25： 75； 20～26min， A相： B相体积比为25： 75 ‑30： 70； 26～28min， A相： B相体积比为3 0： 70‑40： 60； 28～32mi n， A相： B相体积比为 40： 60‑40： 60； 32～35min， A相： B相体积比为 40： 60‑95： 5； 35～40min， A相： B相体积比为95： 5 ‑95： 5； 40～41mi n， A相： B相体积比为95： 5 ‑10： 90； 41～45mi n， A相： B相体积比为10： 90 ‑10： 90。 5.根据权利要求1 ‑4任一所述的一种测定甘 露消毒丸UPLC指纹图谱方法在甘露消毒丸 中成分的质量检测中的用途。 6.一种甘露消毒 丸的质量检测方法， 包括采用权利要求1 ‑4任一所述的测定甘露消毒 丸UPLC指纹图谱方法获得甘露消毒丸指纹图谱， 将得到的甘露消毒丸指纹图谱与相同指纹 图谱检测条件下获得的甘露消毒丸的标准指纹图谱进行相似度比较。 7.根据权利要求6所述的一种甘 露消毒丸的质量检测方法， 其特征在于， 采用与权利要 求1‑4任一所述的测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法相同的条件得到甘露消毒丸的标准指权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115267010 A 2纹图谱， 所述甘露消毒丸的标准指纹 图谱包括17个共有指纹峰， 以9号峰为参照峰(S峰， 相 对保留时间为1.000)， 其他 16个共有指纹峰的相对保留时间依次为1号峰(相对保留时间为 0.165±0.005)、 2号峰(相对保留时间为0.630 ±0.019)、 3号峰(相对保留时间为0.707 ± 0.021)、 4号峰(相对保留时间为0.721 ±0.021)、 5号峰(相对保留时间为0.746 ±0.022)、 6 号峰(相对保留时间为0.782 ±0.023)、 7号峰(相对保留时间为0.831 ±0.025)、 8号峰(相对 保留时间为0.846 ±0.025)、 10号峰(相对保留时间为1.116 ±0.033)、 11号峰(相对保留时 间为1.154 ±0.035)、 12号峰(相对保留时间为1.177 ±0.035)、 13号峰(相对保留时间为 1.198±0.036)、 14号峰(相对保留时间为1.2 51±0.037)、 15号峰(相对保留时间为1.423 ± 0.043)、 16号峰(相对保留时间为1.4 48±0.043)、 17号峰(相对保留时间为1.704 ±0.051)。 8.一种甘露消毒丸中6种成分含量的测定方法， 包括以下步骤： a)供试品溶液的制备： 与权利要求1 ‑4任一所述的测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法 的步骤1)相同； b)对照品溶液的制备： 与权利要求1 ‑4任一所述的测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法 的步骤2)相同； c)测定： 采用与权利要求1 ‑4任一所述的测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法中相同色 谱条件的超高效液相色谱法， 分别测定步骤a)的供试品溶液和步骤b)的对照品溶液， 并采 用外标法计算供 试品溶液中6种成分的含量。 9.一种甘露消毒丸中多味药 材指纹图谱的筛 选方法， 包括下列步骤： A)单味药材样品溶液的制备： 将甘露消毒丸中藿香、 连翘、 川贝母、 茵陈、 射干、 豆蔻、 木 通、 黄芩、 滑石、 石菖蒲、 薄荷11味药材样 品中任一种或多种， 按权利要求1 ‑4任一所述的测 定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法的步骤1)进行制备， 分别获得至少一种单味药材样品溶 液； B)测定： 采用与权利要求1 ‑4任一所述的测定甘露消毒丸UPLC指纹图谱方法的步骤3) 中相同色谱 条件的超高效液相色谱(UPLC)法测定单味药材样品溶液， 获得单味药材样品溶 液的指纹图谱； C)标准指纹图谱 的取得： 采用 与权利要求1 ‑4任一所述的测定甘露消毒丸UPLC指纹图 谱方法相同的步骤， 得到甘露消毒丸的标准指纹图谱； D)质量检测： 将单味药材样品溶液的指纹图谱， 与甘露消毒丸的标准指纹图谱进行比 较， 通过相对保留时间， 指认出单味药材样品溶液在甘露消毒丸的标准指纹图谱中的相应 特征峰， 从而对单味药 材样品溶 液的指纹图谱中的特 征峰进行归属定位。 10.根据权利要求9所述的一种甘 露消毒丸中多味药材指纹图谱的筛选方法， 其特征在 于， 步骤D)中， 包括以下 条件中任一项或多 项： B1)连翘样品溶 液的指纹图谱 包括1个共有指纹峰， 所述1个共有指纹峰为3号峰； B2)茵陈样品溶液的指纹图谱包括3个共有指纹峰， 所述3个共有指纹峰为1号峰、 5号 峰、 6号峰； B3)射干样品溶液的指纹图谱包括4个共有指纹峰， 所述4个共有指纹峰为4号峰、 7号 峰、 8号峰、 16号峰； B4)黄芩样品溶液的指纹图谱包括10个共有指纹峰， 所述10个共有指纹峰为2号峰、 3号 峰、 5号峰、 10号峰、 1 1号峰、 12号峰、 13号峰、 14 号峰、 15号峰、 17号峰；权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115267010 A 3