(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211013714.7 (22)申请日 2022.08.23 (71)申请人 南京市六合区中 医院 地址 211500 江苏省南京市六合区龙池街 道新棠路181号 (72)发明人 刘德明　赵林钢　吴磊　高紫薇　 (74)专利代理 机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 专利代理师 唐惠芬 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种治疗膝骨性关节炎的中药复方组合物 及其质量检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种治疗骨性关节炎的中药 复方组合物及其质量检测方法， 其由苏木、 红花、 燀桃仁、 艾叶、 桂枝、 防风、 络石藤、 威灵仙、 木瓜、 牛膝、 透骨草、 伸筋草及海桐皮组成。 本发明根据 骨性关节炎的发病特点， 根据中医药辨证论治原 则， 通过大量实验筛选出最佳的原料组成和用量 份数比， 组配得到的中药复方可明显通过温热来 刺激局部， 促进血液循环， 达到抗炎消肿的作用， 具有很好的治疗骨性关节炎的作用。 本发明通过 大量实验筛选检测方法， 通过采用薄层色谱定性 鉴别和高效液相色谱法进行定量检测， 可全面客 观的对方中红花和防风的含量进行检测和分析， 且方法学检测表明， 本发明提供的高效液相色谱 法， 精密度高、 重复性、 准确度和稳定性 好。 权利要求书3页 说明书10页 附图3页 CN 115389660 A 2022.11.25 CN 115389660 A 1.一种治疗膝骨性关节炎的中药复方组合物， 其特征在于， 它包括苏木、 红花、 燀桃仁、 艾叶、 桂枝、 防风、 络石 藤、 威灵仙、 木瓜、 牛膝、 透骨草、 伸筋草和海桐皮。 2.根据权利要求1所述的一种 治疗膝骨性关节炎的中药复方组合物， 其特征在于， 它由 苏木10～30份， 红花8～24份， 燀桃仁10～30份， 艾叶12～36份， 桂枝10～30份， 防风10～30 份， 络石藤10～30份， 威灵仙10～30份， 木瓜10～30份， 牛膝10～30份， 透骨草10～30份， 伸 筋草10～3 0份， 海桐皮10～3 0份组成。 3.根据权利要求2所述的一种 治疗膝骨性关节炎的中药复方组合物， 其特征在于， 它由 苏木10份， 红花8份， 燀桃仁10份， 艾叶12 份， 桂枝10份， 防风10份， 络石藤10份， 威灵仙10份， 木瓜10份， 牛膝10份， 透骨草10份， 伸筋草10份， 海桐皮10份组成。 4.权利要求1～3任一项所述的治疗膝骨性关节炎的中药复方组合物的制备方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 按重量份数取苏木、 红花、 燀桃仁、 艾叶、 桂枝、 防风、 络石藤、 威灵仙、 木瓜、 牛膝、 透骨 草、 伸筋草及海桐皮， 加水提取， 合并提取 液， 即得。 5.根据权利要求4所述的治疗膝骨性关节炎的中药复方组合物的制备方法， 其特征在 于， 按重量份数取苏木、 红花、 燀桃仁、 艾叶、 桂枝、 防风、 络石藤、 威灵仙、 木瓜、 牛膝、 透骨 草、 伸筋草及海桐皮， 第一次加药材重量6倍体积量的水， 浸泡45min， 煎煮60min， 滤过； 第二 次加药材重量4倍体积量的水， 煎煮40min， 滤过； 合并二次滤液， 减压浓缩至60℃相对密度 约1.05， 直管式 高速离心机离心， 转速： 16 000r/min， 流量： 4～6L/mi n， 得滤液， 即得。 6.权利要求1～3任一项所述的治疗膝骨性关节炎的中药复方组合物的质量检测方法， 其特征在于， 包括薄层色谱定性检测 和高效液相定量检测； 所述的薄层色谱定性检测包括以下步骤： (1)桃仁薄层色谱鉴别， 具体步骤如下： 1)取权利要求5制备得到的中药复方组合物的提取液， 用乙酸乙酯萃取多次， 合并 乙酸 乙酯萃取 液， 浓缩至2mL， 作为中药复方组合物供 试品溶液； 取缺桃仁的中药复方组合物， 按权利要求5方法制备 得到缺桃仁的阴性供 试品； 2)另取桃仁对照药材粉末， 加入石油 醚加热回流1h， 滤过， 弃去石油 醚液， 药渣再用适 量石油醚洗涤， 滤过， 药渣挥干， 再加适量甲醇， 加热回流1小时， 放冷， 滤过， 作为桃仁对照 药材溶液； 3)吸取上述三种溶液， 分别点于 同一硅胶G薄层板上， 以三氯甲烷 ‑乙酸乙酯 ‑甲醇‑水 的下层溶液为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以磷钼酸硫酸溶液， 加热至斑点显色清晰， 阴性 未见干扰； (2)苏木薄层色谱鉴别， 具体步骤如下： 1)取权利要求5制备得到的中药复方组合物的提取液， 水浴蒸干， 残渣加甲醇使溶解， 作为供试品溶液； 取缺苏木的中药复方组合物， 按权利要求5的方法制备 得到苏木阴性供 试品溶液； 2)另取苏木对照药材粉末， 加甲醇， 超声提取， 滤过， 滤液浓缩至干， 残渣加甲醇溶解， 即得苏木对照药 材溶液； 3)吸取上述3种溶液各， 分别点于 同一硅胶G薄层板上， 以三氯甲烷 ‑丙酮‑甲酸为展开 剂， 展开， 取出， 晾干， 于干燥器内放置， 置于紫外光灯下检视， 供试品溶液色谱中， 在与对照权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115389660 A 2药材溶液色谱相应位置上， 荧 光下显相同颜色的斑点， 阴性未 见干扰； (3)防风薄层色谱鉴别， 具体步骤如下： 1)取权利要求5制备得到的中药复方组合物的提取液， 用水饱和正丁醇萃取， 合并萃取 液， 再用水萃取， 弃去水液， 合并正丁醇萃取液， 水浴蒸干， 残渣加甲醇溶解， 作为供试品溶 液； 取缺防风的中药复方组合物， 按权利要求5的方法制备 得到防风阴性供 试品溶液； 2)另取防风对照药材， 加甲醇， 超声提取， 滤过， 滤液浓缩至干， 残渣加甲醇溶解， 即得 防风对照药 材溶液； 3)吸取上述3种溶液， 分别点于同一硅胶GF254薄层板上， 以氯仿 ‑乙酸乙酯 ‑甲醇‑甲酸 为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 置紫外光灯下检视， 供试品溶液色谱中， 在与对照药材溶液色 谱相应位置上， 荧 光下显相同颜色的斑点， 阴性未 见干扰； (4)桂枝薄层色谱鉴别， 具体步骤如下： 1)取权利要求5制备得到的中药复方组合物的提取液， 用乙醚振摇提取， 合并乙醚液， 蒸干， 残渣加三氯甲烷使溶解， 作为供 试品溶液； 取缺桂枝的中药复方组合物， 按权利要求5的方法制备 得到桂枝阴性供 试品溶液； 2)另取桂枝对照药材， 加乙醚浸泡， 滤过， 蒸干， 残渣加三氯甲烷使溶解， 作为桂枝对照 药材溶液； 3)吸取上述3种溶液各， 分别点于 同一硅胶G薄层板上， 以石油 醚‑乙酸乙酯为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以2％香 草醛硫酸乙醇溶 液， 加热至斑点显色清晰， 阴性未 见干扰。 7.根据权利要求6所述的治疗膝骨性关节炎的中药复方组合物的质量检测方法， 其特 征在于， 步骤(1)桃仁薄层色谱鉴别， 以体积比为15∶40∶22∶10的三氯甲烷 ‑乙酸乙酯 ‑甲醇‑水 为展开剂； 步骤(2)苏木薄层色谱鉴别， 以体积比为8： 4： 1的三氯甲烷 ‑丙酮‑甲酸为展开剂； 步骤(3)防风薄层色谱鉴别， 以体积比为12： 4： 3： 0.2氯仿 ‑乙酸乙酯 ‑甲醇‑甲酸为展开 剂； 步骤(4)桂枝薄层色谱鉴别， 以体积比为17： 3的6 0～90℃石油醚 ‑乙酸乙酯为展开剂。 8.根据权利要求6所述的治疗膝骨性关节炎的中药复方组合物的质量检测方法， 其特 征在于， 所述的高效液相定量检测包括以下步骤： 1)对照品溶液的制备： 精密称定羟基红花黄色素A和5 ‑O‑甲基维斯阿米醇苷对照品， 加 甲醇溶解， 超声处理， 定容， 摇匀， 制成质量浓度分别为427ug ·mL‑1和41.6ug·mL‑1的对照 品溶液； 2)供试品溶液的制备： 按重量份数取苏木、 红花、 燀桃仁、 艾叶、 桂枝、 防风、 络石藤、 威 灵仙、 木瓜、 牛膝、 透骨草、 伸筋 草及海桐皮， 加水煎煮 提取1～3次， 每次1～2小时， 合并提取 液； 精密称取中药复方 组合物提取液至蒸发皿中， 蒸干， 残渣加甲醇溶解， 定容至量瓶中， 摇 匀， 过0.2 2 μm滤膜， 取续滤 液， 即得； 3)标准曲线 的绘制： 取上述步骤1)的对照品溶液， 用甲醇逐级稀释得到6个浓度， 精密 吸取并分别进样10 μL， 注入高效液相色谱仪中测定； 以对照品的浓度X为横坐标， 峰面积 Y为 纵坐标， 得羟基红花黄色素A的回归方程为Y＝18.672X+24.163， r2＝0.9991； 5 ‑O‑甲基维斯权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115389660 A 3