(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211021729.8 (22)申请日 2022.08.24 (71)申请人 江苏奥迈生物科技有限公司 地址 211225 江苏省南京市溧水区白马镇 食品园大道 2号 (72)发明人 孙育荣　汪成飞　王燕　 (74)专利代理 机构 昆明合众智 信知识产权事务 所 53113 专利代理师 史凯 (51)Int.Cl. G01N 30/06(2006.01) G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效 性的方法 (57)摘要 本发明公开了一种模拟猪消化饲用霉菌毒 素脱毒剂有效性的方法， 包括如下步骤： S1、 制备 猪人工胃液； S2、 制备猪人工肠液； S3、 选择母猪 配合饲料500g， 粉碎至30目， 充分混合均匀； S4、 检测配合饲料中黄曲霉毒素B1、 玉米赤霉烯酮以 及脱氧雪腐镰刀菌烯醇三个毒素含量； S5、 用高 效液相色谱仪检测上清液中AFB1含量； S6、 用高 效液相色谱仪检测上清液中ZEN含量； S7、 用高效 液相色谱仪检测上清液中DON含量。 本发明提出 的霉菌毒素脱毒剂评价方法， 考虑了饲料复杂成 分、 消化酶、 胆汁等的干扰， 更接近脱毒剂产品在 动物体内实际应用场景。 本发明提出的霉菌毒素 脱毒剂评价方法， 可以帮助技术人员在实验室初 步筛选更有价值的产品， 不用完全依赖动物实 验。 权利要求书2页 说明书4页 CN 115372526 A 2022.11.22 CN 115372526 A 1.一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱 毒剂有效性的方法， 其特 征在于： 包括如下步骤： S1、 制备猪人工胃液： 2g氯化钠， 3.2g胃蛋白酶， 溶于适量的超纯水中， 加入7ml  36.5％ HCL， 超纯水定容至10 00ml， 用0.1mo l/L NaOH调pH 至3.0； S2、 制备猪人工肠液： 将6.8克KH2PO4溶解在500ml水中， 0.1mol/L  Na OH调pH至6.8， 加 入10克胰蛋白酶， 3克胆汁盐， 加水定容至1000ml， 用0.1mol/L  NaOH和36.5％HCL调节pH为 6.8； S3、 选择母猪 配合饲料5 00g， 粉碎至 30目， 充分 混合均匀； S4、 检测配合饲料中黄曲霉毒素B1、 玉米赤霉烯酮以及脱氧雪腐镰刀菌烯醇三个毒素 含量， 其中黄曲霉毒素B1为AFB1， 玉米赤霉烯酮为ZEN， 脱氧雪腐镰刀菌烯醇为DON； S5、 称取2份步骤S3得到的样品， 10g/份， 各自加入AFB1标准品， 将2份样品中AFB1浓度 均调整为20p pb， 对照组和实验组各1份； 实验组加入0.01g脱 毒剂产品， 对照组加入0.01g纯 水； 两组分别加30ml猪人工胃液， 置于恒温摇床， 38℃， 200rpm， 孵育2h， 再加入45ml猪人工 肠液， 并调pH至6.5， 38℃， 2 00rpm， 孵育2 h； 12000转离心 5min， 上清液过0.22 μm滤膜， 用高效 液相色谱仪检测上清液中AFB1含量； S6、 称取2份步骤S3得到的样品， 10g/份， 各自加入ZEN标准品， 将2份样品中ZEN浓度均 调整为10 00ppb， 对照组和实验组各1份； 实验组加入0.01g脱 毒剂产品， 对照组加入0.01g纯 水； 两组分别加30ml猪人工胃液， 置于恒温摇床， 38℃， 200rpm， 孵育2h， 再加入45ml猪人工 肠液， 并调pH至6.5， 38℃， 2 00rpm， 孵育2 h； 12000转离心 5min， 上清液过0.22 μm滤膜， 用高效 液相色谱仪检测上清液中ZEN含量； S7、 称取2份步骤S3得到的样品， 10g/份， 各自加入DON标准品， 将2份样品中DON浓度均 调整为3000ppb， 对照组和实验组各1份； 实验组加入0.01g脱 毒剂产品， 对照组加入0.01g纯 水； 两组分别加30ml猪人工胃液， 置于恒温摇床， 38℃， 200rpm， 孵育2h， 再加入45ml猪人工 肠液， 并调pH至6.5， 38℃， 2 00rpm， 孵育2 h； 12000转离心 5min， 上清液过0.22 μm滤膜， 用高效 液相色谱仪检测上清液中DON含量。 2.权利要求1所述的一种 模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有 效性的方法， 其特征在于： 所述步骤S4中， 检测 配合饲料中黄曲霉毒素B1、 玉米赤霉烯酮以及脱氧雪腐镰刀菌烯醇三 个毒素含量具体方法参照 《GB/T  36858‑2018饲料中黄曲霉毒素B1的测定高效液相色谱 法》 、 《GB/T  28716‑2012饲料中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和柱净化 ‑高效液相色谱法》 、 《GB/T 30956‑2014饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化－高效液相色谱 法》 。 3.权利要求1所述的一种 模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有 效性的方法， 其特征在于： 所述步骤S5中， AFB1去除率＝(对照组上清液AFB1含量 ‑实验组上清液AFB1含量)/对照组上 清液AFB1含量。 4.权利要求1所述的一种 模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有 效性的方法， 其特征在于： 所述步骤S6中， ZEN去除率＝(对照组上清液ZEN含量 ‑实验组上清液ZEN含量)/对照组上清 液ZEN含量。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115372526 A 25.权利要求1所述的一种 模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有 效性的方法， 其特征在于： 所述步骤S7中， DON去除率＝(对照组上清液DON含量 ‑实验组上清液DON含量)/对照组上清 液DON含量。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115372526 A 3