(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210997228.7 (22)申请日 2022.08.19 (71)申请人 江阴天江药业有限公司 地址 214429 江苏省无锡市江阴高新区新 胜路1号 (72)发明人 袁健　陈盛君　李松　祝倩倩　 王协和　王慧敏　张敏　顾芹英　 李媚　王琪　 (74)专利代理 机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 专利代理师 刘红阳 (51)Int.Cl. G01N 30/90(2006.01) G01N 30/94(2006.01) G01N 30/95(2006.01)G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一种寻骨风样品的质量控制方法 (57)摘要 本发明公开了一种寻骨风样品的质量控制 方法， 包括以下步骤： (1)制备参照物溶液和供试 品溶液； 以芦 丁和马兜铃酸 Ⅰ为对照品参照物， 分 别制备对照品参照物溶液； (2)分别吸取参照物 溶液与供试品溶液进行超高效液相色谱分析， 构 建待测样品的特征图谱， 其特征图谱包括至少9 个特征峰， 特征峰中存在一特征峰对应芦丁对照 品参照物峰， 存在一特征峰对应马兜铃酸 Ⅰ对照 品参照物峰； (3)通过步骤(2)中获得的特征图 谱， 进行待测样品的定性分析； 以芦丁为含量测 定指标， 以马兜铃酸 Ⅰ为限量测定指标， 进行待测 样品的定量分析。 本发明方法操作简单， 经过方 法学验证， 重现性、 稳定性好， 回收率可靠， 检测 成本低， 检测效率高。 权利要求书1页 说明书34页 附图14页 CN 115308352 A 2022.11.08 CN 115308352 A 1.一种寻骨风样品的质量控制方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)选取寻骨风样品， 并制备供试品溶液； 以寻骨风为对照药材， 制备对照药材的参照 物溶液； 以芦丁和马兜铃酸 Ⅰ为对照品参照物， 分别制备对照品参照物溶 液； (2)分别吸取参照物溶液与供试品溶液进行超高效液相色谱分析， 构建待测样品的特 征图谱， 其特征图谱包括至少9个特征峰， 特征峰中存在一特征峰对应芦丁对照品参照物 峰， 存在一特 征峰对应马兜铃酸 Ⅰ对照品参照物峰； (3)通过步骤(2)中获得的特征图谱， 进行待测样品的定性分析； 以芦丁为含量测定指 标， 以马兜铃酸 Ⅰ为限量测定指标， 进行待测样品的定量分析。 2.根据权利要求1所述的寻骨风样品的质量控制方法， 其特征在于， 还包括通过薄层色 谱法对待测样品进行定性分析， 使用寻骨风对照药材作为参照， 判断薄层板上待测样品与 对照药材的斑点是否一一对应； 若是， 则进行步骤(1)～(3)， 若否则待测样品为不合格样 品。 3.根据权利要求2所述的寻骨风样品的质量控制方法， 其特征在于， 展开剂包括甲苯、 丙酮和甲酸。 4.根据权利要求1所述的寻骨风样品的质量控制方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 制备参 照物溶液或/和供 试品溶液的提取剂为水或体积浓度为10％～70％的 甲醇水溶液。 5.根据权利要求4所述的寻骨风样品的质量控制方法， 其特征在于， 制备参照物溶液 中， 每克寻骨风相应的提取剂使用量 为5ml～5 0ml， 提取时间为15～6 0分钟。 6.根据权利要求1所述的寻骨风样品的质量控制方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 芦丁对 照品参照物溶 液浓度为20～80 μg/ml； 马兜铃酸 Ⅰ对照品参照物溶 液浓度为3～15 μg/ml。 7.根据权利要求1所述的寻骨风样品的质量控制方法， 其特征在于， 所述超高效液相色 谱分析的条件如下： 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以乙腈为流动相A， 以 0.05％～0.2％磷酸溶液为流动相B， 采用梯度洗脱： 0～ 3min， 5％A， 3～2 0min， 5→25％A， 20 ～25min， 25→43％A， 25～3 0min， 43→60％A。 8.根据权利要求7所述的寻骨风样品的质量控制方法， 其特征在于， 检测波长为220～ 320nm； 流速为每分钟0.25ml～0.3 5ml； 柱温为3 0℃～40℃； 采用紫外检测器。 9.根据权利要求1所述的的寻骨风样品的质量控制方法， 其特征在于， 寻骨风样品的超 高效液相色谱特征图谱具有9个特征峰， 并与对照药材参照物色谱中的9个特征峰保留时间 相对应； 以芦丁参照物相应的峰为S峰， 计算峰4、 6、 7、 8与S峰的相对保留时间， 其相对保留 时间应在规定值的 ±10％范围之内， 规定值为： 0.63(峰4)、 1.14(峰6)、 1.55(峰7)、 1.58(峰 8)。 10.根据权利要求1所述的寻骨风样品的质量控制方法， 其特征在于， 寻骨风样品为寻 骨风药材、 寻骨风饮片、 寻骨风制剂中间体或寻骨风制剂成品。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115308352 A 2一种寻骨风样品的质量控制方 法 技术领域 [0001]本发明涉及药物质量控制方法， 尤其涉及 一种全面控制的寻骨 风样品的质量控制 方法。 背景技术 [0002]寻骨风为马兜铃科植物绵毛马兜铃Aristolochia  mollissima  Hance的干燥全草 (中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典[S].人民卫生出版社,1977:251)。 寻骨风中 含有氨基酸类、 马兜铃内酯、 马兜铃酸I、 马兜铃酸萜酯I、 β 一谷甾醇和银袋内脂乙,此外， 它 还含有马兜铃酸倍半萜酯及39个已知化合物(彭国平,楼凤昌,王颖,等.马兜铃酸的倍半萜 的酯类化合物 Ⅶ.绵毛马兜铃中马兜铃酸萜酯 Ⅰ的结构鉴定[J].药学学报,1996,31(6): 446‑450)。 其味辛、 苦， 性平。 具有祛风、 通络， 止痛之功 效， 可用于治疗风湿痹痛， 关节酸痛 等症(王秀兰,洪宗超,孙伟,等.寻骨风药材质量标准研究[J].湖北中医杂志,2018,40 (05):54‑58)。 [0003]现代药理作用与临床应用研究表明， 寻骨风在抗炎、 镇痛(陈铎葆,徐冰,李兵,等. 寻骨风对抗炎、 镇痛作用的研究[J].基层中药杂志,2001(01):9 ‑10)， 抗风湿(王雪,刘为 忠,沈云修,等.寻骨风化学成分研究[J].山东农业科学,2010(04):34 ‑36)， 治疗类风湿性 关节炎(郭春慧,王东巧,杨震.寻骨风散外敷治疗骨痹131例[J].中医外治杂志,2001(01): 16‑17)， 坐骨神经痛(张世友.寻骨风药酒治疗坐骨神经痛[J].河南赤脚医生,1976(01): 48)， 疟疾， 外伤出血、 乳痈及多种 化脓性感染(夏侯国论,李小花,范小娜.寻骨风中微量元 素的测定及其对药物配伍的影 响[J].时珍国医国药,2 010,21(03):749 ‑750)等方面都有较 好的疗效。 [0004]中药配方颗粒是由单味中药饮片经水提、 浓缩、 干燥、 制 粒而成， 是饮片改革的一 种新形式， 相比于传统饮片汤剂具有方便携带， 使用简单的特性， 能够 满足现代快节奏工作 与生活的要求。 近年来， 中药配方颗粒快速发展， 多个中药品种的配方颗粒国家标准相继出 台， 为规范中药配方颗粒的生产， 推动中药现代 化做出了巨大贡献。 寻骨风配方颗粒是寻骨 风药材经过现代工艺提取、 浓缩、 干燥、 制粒而成， 保留了寻骨风的临床效果， 同时兼顾了使 用的便携性。 [0005]关于寻骨风药材的质量控制手段目前已有部分报道。 1992年版 《中药材》 标准、 《河 南地方中药材标准》 中， 采用性状、 茎横切面及粉末显微鉴别、 理化鉴别作为控制寻骨风药 材质量的标准( 河南省卫生厅.河南省中药材标准[S].郑州:中原农民出版社,1992:39 ‑ 40)。 刘超等人建立RP ‑HPLC法对寻骨风药材中马兜铃酸A进行定量研究(刘超,陈蕴,赵小 磊,等.RP ‑HPLC法测定寻骨风中马兜铃酸A的含量[J].中草药,2003(12):87 ‑89)。 王秀兰等 人建立寻骨风药材的质量标准， 对寻骨风药材的性状、 鉴别(显微、 薄层)、 各项检查(水分、 总灰分、 酸不溶性灰分、 浸 出物)、 含量测定等项目进 行了研究(王秀兰,洪宗超,孙伟,等.寻 骨风药材质量标准研究[J].湖北中医杂志,2018,40(05):54 ‑58)。 寻骨风目前未收录于 2020年版中国药典， 虽然有文献对寻骨风药材的质量控制进行了部分研究， 但都未建立全说　明　书 1/34 页 3 CN 115308352 A 3