(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211024547.6 (22)申请日 2022.08.25 (71)申请人 上海和黄药业有限公司 地址 201401 上海市奉贤区肖业路38 8号 (72)发明人 孔瑶　詹常森　姜鹏　温方方　 (74)专利代理 机构 上海光华专利事务所(普通 合伙) 31219 专利代理师 许亦琳　余明伟 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/86(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一种安宫牛黄丸四味粉指纹图谱及其成分 的检测方法 (57)摘要 本发明提供一种安宫牛黄丸四味粉指纹图 谱的检测方法。 本发明还提供了上述安宫牛黄丸 四味粉指纹图谱的检测方法在安宫牛黄丸四味 粉中成分的质量检测 中的用途及其质量检测方 法。 本发明进一步提供了上述安 宫牛黄丸四 味粉 中9种成分含量的测定方法。 本发明更进一步提 供了一种安宫牛黄丸四味粉中多味药材指纹图 谱的筛选方法。 本发明提供的一种安宫牛黄丸四 味粉指纹图谱及其成分的检测方法， 建立了安宫 牛黄丸四味粉的高效液相指纹图谱， 能够对安宫 牛黄丸四味粉中9个化学成分进行了定量分析， 并对安宫牛黄丸四味粉中各单味药材色谱峰进 行了归属确证， 能够从原料源头进行有效监测， 严格控制原药 材的质量。 权利要求书3页 说明书16页 附图3页 CN 115236242 A 2022.10.25 CN 115236242 A 1.一种安宫牛黄丸四味粉指纹图谱的检测方法， 包括以下步骤： 1)供试品溶液的制备： 将安宫牛黄丸四味粉样品加入溶剂溶解， 超声提取后冷却、 摇 匀、 过滤， 即得供试品溶液； 2)对照品溶液的制备： 将盐酸小檗碱、 盐酸巴马汀、 表小檗碱、 黄连碱、 黄芩苷、 黄芩素、 汉黄芩素、 栀子苷、 汉黄 芩苷对照品， 加入溶剂溶解并定容， 配成对照品溶 液； 3)测定： 采用相同色谱条件的高效液相色谱法分别测定供试品溶液和对照品溶液， 获 得供试品溶液的指纹图谱和对照品溶液的指纹图谱， 将供试品溶液的指纹图谱与对照品溶 液的指纹图谱进行比较， 对供试品溶液指纹图谱中的指标成分进行归属定位， 从而获得安 宫牛黄丸四味粉指纹图谱。 2.根据权利要求1所述的一种安宫牛黄丸四味粉指纹图谱的检测方法， 其特征在于， 步 骤1)或2)中， 包括以下 条件中任一项或多 项： A1)步骤1)中， 所述安宫牛黄丸四味粉样品在制备供试品溶液前要进行60Co‑γ射线辐 照； A2)步骤1)中， 所述安宫牛黄丸四味粉样品加入的重量与所述溶剂加入的体积之比为 0.05： 15‑25， g/mL； A3)步骤1)或2)中， 所述溶剂为5 0‑100％甲醇； A4)步骤1)中， 所述超声提取时间为3 0‑60min； A5)步骤1)中， 所述超声提取的功率 为200‑300W， 所述超声提取的频率 为30‑50kHz。 3.根据权利要求1所述的一种安宫牛黄丸四味粉指纹图谱的检测方法， 其特征在于， 步 骤3)中， 所述高效液相色谱法 的色谱条件为： 色谱柱为C18色谱柱； 检测 器为光电二极管阵 列检测器； 柱温为20 ‑30℃； 进样量为1 ‑20μL； 流速为0.5 ‑1.0mL/min； 检测波长为220 ‑ 240nm； 流动相为乙腈 ‑0.1‑0.3％磷酸水溶液， 其中， A相为乙腈， B相为0.1 ‑0.3％磷酸水溶 液； 分析时间为90mi n； 梯度洗脱。 4.根据权利要求3所述的一种安宫牛黄丸四味粉指纹图谱的检测方法， 其特征在于， 所 述梯度洗脱的具体程序为： 0‑5min， A相： B相体积比为5： 95 ‑11： 89； 5‑25min， A相： B相体积比为1 1： 89‑23： 77； 25‑35min， A相： B相体积比为23： 7 7‑25： 75； 35‑45min， A相： B相体积比为25： 75 ‑26： 74； 45‑55min， A相： B相体积比为26： 74 ‑31： 69； 55‑60min， A相： B相体积比为31： 69 ‑39： 61； 60‑70min， A相： B相体积比为39： 61 ‑69： 31； 70‑80min， A相： B相体积比为69： 31 ‑89： 11； 80‑90min， A相： B相体积比为89： 1 1‑95： 5。 5.根据权利要求1 ‑4任一所述的一种安宫牛黄丸四味粉指纹图谱的检测方法在安宫牛 黄丸四味粉中成分的质量检测中的用途。 6.一种安宫牛黄丸四味粉的质量检测方法， 包括采用权利要求1 ‑4任一所述的安宫牛 黄丸四味粉指纹图谱的检测方法获得安宫牛黄丸四味粉指纹图谱， 将得到的安宫牛黄丸四 味粉指纹图谱与相同指纹图谱检测条件下获得 的安宫牛黄丸四味粉的对照指纹图谱进行权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115236242 A 2相似度比较。 7.根据权利要求6所述的一种安宫牛黄丸四味粉的质量检测方法， 其特征在于， 采用与 权利要求1 ‑4任一所述的安宫牛黄丸四味粉指纹图谱的检测方法相同的条件得到安宫牛黄 丸四味粉的对照指纹图谱， 所述安宫牛黄丸四味粉的对照指纹图谱包括23个共有指纹峰， 以16号峰为参照峰S峰， 相对保留时间为1.0000， 其他22个共有指纹峰 的相对保留时间依次 为1号峰0.2327 ±0.0010、 2号峰0.2783 ±0.0010、 3号峰0.3705 ±0.0010、 4号峰0.4204 ± 0.0010、 5号峰0.4473 ±0.0010、 6号峰0.4957 ±0.0019、 7号峰0.5485 ±0.0022、 8号峰 0.5909±0.0012、 9号峰0.6286 ±0.0040、 10号峰0.7213 ±0.0029、 11号峰0.8085 ±0.0010、 12号峰0.8560 ±0.0043、 13号峰0.87 16±0.0045、 14号峰0.8874 ±0.0045、 15号峰0.9029 ± 0.0051、 17号峰1.0934 ±0.0072、 18号峰1.1473 ±0.0097、 19号峰1.2587 ±0.0010、 20号峰 1.3433±0.0015、 21号峰1.5119 ±0.0036、 22号峰1.6255 ±0.0046、 23号峰1.6347 ± 0.0047。 8.一种安宫牛黄丸四味粉中9种成分含量的测定方法， 包括以下步骤： a)供试品溶液的制备： 与权利要求1 ‑4任一所述的安宫牛黄丸四味粉指纹图谱的检测 方法的步骤1)相同； b)对照品溶液的制备： 与权利要求1 ‑4任一所述的安宫牛黄丸四味粉指纹图谱的检测 方法的步骤2)相同； c)测定： 采用与权利要求1 ‑4任一所述的安宫牛黄 丸四味粉指纹图谱的检测方法中相 同色谱条件的高效液相色谱法， 分别测 定步骤a)的供试品溶液和步骤b)的对照品溶液， 并 采用外标法计算供 试品溶液中9种成分的含量。 9.一种安宫牛黄丸四味粉中多味药 材指纹图谱的筛 选方法， 包括下列步骤： A)单味药材样品溶液的制备： 将安宫牛黄丸四味粉中黄连、 黄芩、 栀子、 郁金4味药材样 品中任一种或多种， 按权利要求1 ‑4任一所述的安宫牛黄丸四味粉指纹图谱的检测方法的 步骤1)进行制备， 分别获得至少一种单味药 材样品溶 液； B)测定： 采用与权利要求1 ‑4任一所述的安宫牛黄 丸四味粉指纹图谱的检测方法的步 骤3)中相同色谱条件的高效液相色谱法测定单味药材样品溶液， 获得单味药材样品溶液的 指纹图谱； C)对照指纹图谱的取得： 采用 与权利要求1 ‑4任一所述的安宫牛黄 丸四味粉指纹图谱 的检测方法相同的步骤， 得到安宫牛黄丸四味粉的对照指纹图谱； D)质量检测： 将单味药材样品溶液的指纹图谱， 与安宫牛黄丸四味粉的对照指纹图谱 进行比较， 通过相对保留时间， 指认出单味药材样品溶液在安宫牛黄丸四味粉的对照指纹 图谱中的相应特 征峰， 从而对单味药 材样品溶 液的指纹图谱中的特 征峰进行归属定位。 10.根据权利要求9所述的一种安宫牛黄丸四味粉中多味药材指纹图谱的筛选方法， 其 特征在于， 步骤D)中， 包括以下 条件中任一项或多 项： B1)黄连样品溶液的指纹图谱包括11个共有指纹峰， 所述11个共有指纹峰为1号峰、 4号 峰、 6号峰、 7号峰、 10号峰、 12号峰、 13号峰、 14 号峰、 15号峰、 17号峰、 18号峰； B2)黄芩样品溶液的指纹图谱包括8个共有指纹峰， 所述8个共有指纹峰为8号峰、 9号 峰、 16号峰、 19号峰、 20号峰、 21号峰、 2 2号峰、 23号峰； B3)栀子样品溶液的指纹图谱包括4个共有指纹峰， 所述4个共有指纹峰为2号峰、 3号权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115236242 A 3