(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210885992.5 (22)申请日 2022.07.26 (71)申请人 南京医科 大学 地址 211166 江苏省南京市江宁区龙眠大 道101号 (72)发明人 王丽　王守林　袁安杰　李旭旭　 李书书　王超　陈超　 (74)专利代理 机构 南京天华专利代理有限责任 公司 32218 专利代理师 邢贤冬　徐冬涛 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01)G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种基于气相色谱-串 联质谱快速测定微量 人血清中尼古丁和可替宁的方法 (57)摘要 本发明公开了一种基于气相色谱 ‑串联质谱 快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法， 包括： 取15～100μL血清， 加入5～50μL氘代同 位素内标溶液混匀， 再加入45～300μL甲醇， 充 分涡旋， 离心， 取上清液进行气相色谱 ‑串联质谱 检测； 根据定性离子对和保留时间对尼古丁、 可 替宁进行定性； 将尼古丁 或可替宁的定量离子的 峰面积与氘代同位素内标的峰面积的比值分别 代入尼古丁或可替宁的基质匹配内标标准曲线， 获得尼古丁和可替宁的浓度。 本发 明仅需微量血 清样品， 基于特定的毛细管柱有效分离尼古丁和 可替宁， 利用优化的串联四级杆监测参数， 就可 以准确、 灵敏、 省时、 高效的获得尼古丁和可替宁 残留数据， 且成本低。 权利要求书2页 说明书7页 附图7页 CN 115389651 A 2022.11.25 CN 115389651 A 1.一种基于气相色谱 ‑串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法， 其特 征在于： 包括： 取15～100 μL血清， 加入5～50 μL氘代同位素内标溶液混匀， 再加入45～300 μL 甲醇， 充分涡旋， 离心， 取上清液进 行气相色谱 ‑串联质谱检测； 根据定性离子对和保留时间 对尼古丁、 可替宁进行定性； 将尼古丁或可替宁的定量子离子的峰面积与氘代同位素内标 定量子离子的峰面积的比值分别代入尼古丁或可替宁的基质匹配内标标准曲线， 获得尼古 丁和可替宁的浓度； 其中， 气相色谱检测条件： 色谱柱为DB ‑EUPAH毛细管柱， 规格为： 柱长15～30m， 内径 0.18～0.25mm， 膜厚0.14～0.25 μm； 进样量为1～2 μL， 进样方式为不分流进样， 进样口温度 为200～280℃； 色谱柱初始温度为3 5～100℃， 保持1mi n， 以20℃/mi n升至280℃， 保持2mi n。 2.根据权利要求1所述的基于气相色谱 ‑串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可 替宁的方法， 其特征在于： 取25μL血清， 加入5μL氘代同位素内标溶液混匀， 再加入70μL甲 醇， 充分涡旋， 离心， 取 上清液进行气相色谱 ‑串联质谱检测。 3.根据权利要求1所述的基于气相色谱 ‑串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可 替宁的方法， 其特征在于： 所述的氘代同位素内标为氘代苊； 所述的氘代同位素内标溶液为 氘代苊浓度为1 μg/mL的 甲醇溶液。 4.根据权利要求1所述的基于气相色谱 ‑串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可 替宁的方法， 其特征在于： 所述的离心条件为： 在温度4～40℃下、 以转速5000～12000rpm/ min离心5～15mi n。 5.根据权利要求1所述的基于气相色谱 ‑串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可 替宁的方法， 其特征在于： 所述的气相色谱检测条件： 色谱柱 为DB‑EUPAH毛细管柱， 规格为： 柱长20m， 内径0.18mm， 膜厚0.14μm； 进样量为2μL， 进样方式为不分流进样， 进样口温度为 220℃； 色谱柱初始温度为6 0℃， 保持1mi n， 以20℃/mi n升至280℃， 保持2mi n。 6.根据权利要求1所述的基于气相色谱 ‑串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可 替宁的方法， 其特征在于： 串联质谱检测条件： 电子轰击电离源， 70eV； 离子源和传输线的温 度均为300℃； 检测模式为MS/ MS检测模式。 7.根据权利要求1所述的基于气相色谱 ‑串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可 替宁的方法， 其特征在于： 尼古丁的定性离子对为162 ‑84m/z和162 ‑133m/z； 可替宁的定性 离子对为176 ‑98m/z和176 ‑68m/z； 氘代苊的定性离子对为162 ‑160m/z和162 ‑158m/z； 尼古 丁、 可替宁和氘代苊的定量离 子对分别为162 ‑84m/z、 176‑98m/z和162‑160m/z。 8.根据权利要求7所述的基于气相色谱 ‑串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可 替宁的方法， 其特征在于： 离子对162 ‑84m/z和176 ‑98m/z的碰撞能量为10eV； 离子对162 ‑ 160m/z的碰撞能量为15eV； 离子对176 ‑68m/z和162 ‑158m/z的碰撞能量为2 0eV； 离子对162 ‑ 133m/z碰撞能量 为35eV。 9.根据权利要求1所述的基于气相色谱 ‑串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可 替宁的方法， 其特征在于： 所述的尼古丁的保留时间为5.7～6.2min， 可替宁的保留时间为 9.0～9.5min。 10.根据权利要求1所述的基于气相色谱 ‑串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可 替宁的方法， 其特征在于： 所述的尼古丁或可替宁的基质匹配内标标准 曲线是由以下方法 绘制的： 取25 μL混合人血清， 与5 μL氘代苊 溶液以及尼古丁标准溶液或可替宁标准溶液中的权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115389651 A 2至少一种混合， 甲醇定容至100 μL， 得到标准曲线 溶液， 涡旋， 离心， 取上清液进行气相色谱 ‑ 串联质谱检测； 以尼古丁或可替宁的浓度为横坐标， 以尼古丁或可替宁的定量子离子的校 正峰面积与氘代苊的定量子离子的峰面积的比值为纵坐标， 建立尼古丁或可替宁的基质匹 配内标标准 曲线； 其中， 所述的尼古丁或可替宁的定量子离子的校正峰面积为尼古丁或可 替宁的定量子 离子的峰面积减去基质本底中尼古丁或可替宁的定量子 离子的峰面积。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115389651 A 3