(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211003257.3 (22)申请日 2022.08.19 (71)申请人 通化谷红制药有限公司 地址 135099 吉林省通 化市梅河口市 建国 路5099号 (72)发明人 赵建东　王毅　张丽莉　张海燕　 (74)专利代理 机构 西安佩腾特知识产权代理事 务所(普通 合伙) 61226 专利代理师 曹宇飞 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/16(2006.01) G01N 30/30(2006.01)G01N 30/32(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种含有红花药物制剂的指纹图谱检测方 法 (57)摘要 本发明提供一种含有红花药物制剂的指纹 图谱检测方法， 该检测方法在2 65nm下， 检测标定 出27个色谱峰。 并指认出： 确定16号峰为羟基红 花黄色素A， 保留时间适中、 分离度好且峰面积较 大， 又是谷红注射液中的主要有效成分。 该指纹 图谱检测方法具有检测指标成分全面、 操作步骤 简便、 专属性强、 准确性高、 重复性和稳定性好的 优点。 该指纹图谱检测方法可用于本发明药物制 剂的内在质量评价。 权利要求书1页 说明书11页 附图1页 CN 115508467 A 2022.12.23 CN 115508467 A 1.一种含有红花药物制剂的指纹图谱检测方法， 其特征在于， 所述检测方法包括以下 步骤： ⑴、 供试品溶液的制备： 取红花药物制剂， 置量瓶中， 加10～30％甲醇稀释并定容， 混 匀， 以离心5～15分钟， 取 上清液， 即得； ⑵、 对照品溶液的制备： 称取羟基红花黄色素A对照品， 称定， 加10～30 ％甲醇制成对照 品溶液， 混匀， 离心， 取 上清液， 即得； ⑶、 色谱检测条件为： 色谱柱： 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 流动相为0.08～ 0.12％甲酸水溶液(A) –60～80％乙腈(B)， 梯度洗脱比例为： 0～12min， 100～96％A； 12～ 20min， 96 ％～82％A； 20～30min， 82％～81％A； 30～43min， 81％～66 ％A； 43～47min， 66 ％ ～52％(A)； 47～ 56min， 52％～ 0； 进样量： 1～2 0 μL； 流速： 0.3～1.2ml/min； 柱温： 2 5～38℃； 检测波长： 25 0～300nm； ⑷、 指纹图谱构建： 分别取步骤 ⑴供试品溶液和步骤 ⑵对照品溶液， 按照上述步骤 ⑶色 谱条检测件测定， 再以步骤 ⑴方法制备多批次供试品溶液， 并分别测定记录多批次供试品 溶液的HPLC 色谱图， 导入中药指纹图谱相似度评价系统， 并进 行相似度评价， 对指纹图谱 数 据进行分析， 选择中位数法作为对照指纹图谱， 计算红花药物制剂与对照指纹图谱之间的 相似度。 2.如权利要求1所述检测方法， 其特征在于， 所述检测方法步骤 ⑴供试品溶液的制备中 加甲醇的浓度为20％。 3.如权利要求1所述检测方法， 其特征在于， 所述检测方法步骤 ⑴供试品溶液的制备 中， 所述离心时间为： 10mi n。 4.如权利要求1所述检测方法， 其特征在于， 所述检测方法步骤 ⑶色谱检测条件中， 所 述色谱柱型号 为Waters Altantis@T3 。 5.如权利要求1所述检测方法， 其特征在于， 所述检测方法步骤 ⑶色谱检测条件中， 所 述流动相为0.1％甲酸水 溶液(A)–70％乙腈(B)。 6.如权利要求1所述检测方法， 其特征在于， 所述检测方法步骤 ⑶色谱检测条件中， 流 速： 0.9ml/mi n， 柱温： 3 5℃， 检测波长： 26 5nm。 7.如权利要求1所述检测方法， 其特征在于， 所述检测方法步骤 ⑷中的多批次供试品溶 液的指纹图谱相似度≥0.90 。 8.如权利要求1～7任一所述方法在含有红花药物制剂质量检测中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115508467 A 2一种含有 红花药物制剂的指纹图谱检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 一种含有红花药物制剂的指纹图谱检测方法， 属于中成药质量检测方 法领域。 背景技术 [0002]本发明所述的红花药物制剂为谷红注射液， 该产品是通化谷红制 药的独家品种。 国家药品监督管理局批准文 号为国药准字H22 026637(20ml)、 H22 026582 (5ml)、 H22 026638 (10ml)、 其主要由乙酰谷酰胺和中药材红花组配而成配伍组成， 本申请人对该产品布局多 件专利申请， 其申请号为： 200310102230.0、 200410086213.7， 上述专利技术保护主题主要 为： 该谷红注射液的组方配比、 制备工艺等。 目前谷红注射液的现行质量标准为WS ‑11419 (ZD‑1419)‑2002， 该标准中以羟基红花素A不得少于1.0％山奈素含量不得少于0.050％。 但 现有的该产品检测方法仅检测两个单一指标成分， 却不能满足中药复方提取液中含有众多 的有效成分更高的质量标准要求。 [0003]然而中药指纹图谱技术作为评价与控制中药质量与活性的重要手段之一， 是一种 可量化鉴定技术， 已广泛应用于中药质量控制。 中药指纹图谱的建立， 它从药材的生产、 粗 加工、 贮存、 制剂的原料、 中间品、 成品、 流通样品等各角度和方面， 建立全面反映所含药物 中有效成分的指纹图谱， 通过相似性和相关性对比， 更加有效地体现中药成分的复杂性， 发 现质量变异和缺陷， 从而全面、 特异地控制中药的质量。 [0004]又因中国国家 药品监督管理局于2000年发布了 《中药注射剂指纹图谱研究的技术 要求(暂行)》 。 但是指纹图谱主要是针对小分子成分， 对于大分子多糖的指纹图谱研究较 少， 这是由于大多数糖类成分无紫外吸收， 分子量大， 结构复杂多样的特点决定的。 本发明 开发了糖类指纹图谱方法， 控制药物的安全性和疗效。 传统的中药注射剂是复杂混合物， 具 有生物提取物特征， 根据分子量可分为小分子物质和大分子物质。 有效成分只可能是小分 子物质， 而 大分子物质必 然属于杂质， 即使某些大分子具有某些活性， 但也不应属于中药的 传统功效。 中药注 射剂的产品质量仍是主要矛盾， 且主要与大分子物质有关， 严控大分子物 质则有可能显著提高中药注射剂的安全性。 因此谷红注射液在原有单一成分基础上， 建立 多指标成分指纹图谱 控制模式， 进行较全面的质量控制， 显得非常有必要。 发明内容 [0005]本发明提供一种含有红花药物制剂的指纹图谱检测方法， 该检测方法在  265nm 下， 检测标定出27个 色谱峰。 并指认出： 确定16号峰为羟基红花黄色素  A， 保留时间适中、 分 离度好且 峰面积较大， 又是谷红注射液中的主要有效成分。 该指纹图谱检测方法具有检测 指标成分全面、 操作步骤简 便、 专属性 强、 准确性高、 重复性和稳定性好的优点。 该指纹图谱 检测方法可用于 本发明药物制剂的内在质量评价。 [0006]本发明提供的技 术方案如下： [0007]一种含有红花药物制剂的指纹图谱检测方法， 所述检测方法包括以下步骤：说　明　书 1/11 页 3 CN 115508467 A 3