(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210675714.7 (22)申请日 2022.06.15 (71)申请人 呼伦贝尔东北阜丰生物科技有限公 司 地址 162650 内蒙古自治区呼伦 贝尔市岭 东工业开发区 （扎兰屯） 开创大街 (72)发明人 李德衡　白红兵　李树标　关丹　 赵杰　刘刚　李武红　吴锦涛　 陈安琪　 (74)专利代理 机构 北京领科知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 11690 专利代理师 张丹 (51)Int.Cl. C12N 1/38(2006.01) C12N 1/20(2006.01)C12N 13/00(2006.01) C12P 13/14(2006.01) C12R 1/15(2006.01) (54)发明名称 提高谷氨酸发酵菌 体量和产酸效率的方法 (57)摘要 本发明属于生物 技术领域， 公开了提高谷氨 酸发酵菌体量和产酸效率的方法， 其包括如下步 骤： 谷氨酸棒杆菌种子 液按照5‑15％的接种量接 种到含有发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养， 当菌体OD600达到15时， 开始流加全营养培养基， 流加至发酵培养结束前4h停 止。 本发明在提高菌 体量的同时， 谷氨酸的发酵效率 也有一定提升 。 权利要求书1页 说明书4页 CN 115386529 A 2022.11.25 CN 115386529 A 1.提高谷氨酸发酵菌体量和产酸效率的方法， 其包括如下步骤： 谷氨酸棒杆菌种子液按照5 ‑15％的接种量接种到含有发酵培养基的发酵罐中进行发 酵培养， 当菌体OD600达到15时， 开始流加全营养 培养基， 流加至发酵培 养结束前4h停止 。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述发酵培养基为： 葡萄糖60g/L， 玉米浆 30g/L， 酵母膏5g/L， 大豆蛋白胨10g/L， KH2PO42.5 g/L， MgSO4·7H2O 1.2g/L， KCl  1g/L， MnSO410 mg/L， FeSO410 mg/L， 苏氨酸1g/L， 甜菜碱1g/L， VH3 mg/L， VB10.5 mg/L。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述全营养培养基为： 玉米浆干粉30g/L， 大豆蛋白胨10g/L， KH2PO42.5 g/L， MgSO4·7H2O 1.2g/L， KCL1  g/L， MnSO410 mg/L， FeSO410  mg/L， 甲硫氨酸0.5g/L， VH3 mg/L， VB10.5 mg/L， 2‑氨基乙醇1mg/L。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述发酵培 养采用蓝光照射培 养的方式。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述发酵培养的条件为： 发酵初始温度为 32℃， 当发酵液中菌体量OD600达到28时， 将温度在30min内升至37.5℃， 1h后升温至38℃； 通 过控制转速和通 风将溶氧控制在3 0％； 通过氨水控制pH在7.0， 发酵总时间为6 0h。 6.根据权利要求 4所述的方法， 其特 征在于， 所述蓝光照射的强度为5 0‑200lux。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特 征在于， 所述蓝光照射的强度为10 0lux。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述方法包括如下步骤： 谷氨酸棒杆菌种 子液按照10％的接种 量接种到含有280L发酵培养基的1000L发酵罐中进行发酵培养， 当菌 体OD600达到15时， 开始流加420L全营养 培养基， 流加至发酵培 养结束前4h停止 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115386529 A 2提高谷氨酸发酵菌 体量和产酸效率的方 法 技术领域 [0001]本发明属于生物技 术领域， 具体涉及提高谷氨酸发酵菌体量和产酸效率的方法。 背景技术 [0002]谷氨酸， 是一种酸性氨基酸。 分子内含两个羧基， 化学名称为α ‑氨基戊二酸。 谷氨 酸是里索逊1856年发现的， 为无色 晶体， 有鲜味， 微溶于水， 而溶于盐酸溶液， 等电点3.22。 大量存在于谷类蛋白质中， 动物脑中含量也较多。 谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中 占重要地 位， 参与动物、 植物和微 生物中的许多重要化学反应。 [0003]谷氨酸的制造， 从最初的水解小麦面筋， 到后来的分离提取， 特别是发酵法生产的 谷氨酸取得的成果， 是现代发酵工业的重大创举； 谷氨酸 发酵工艺 发展至今， 已经取得了翻 天覆地的变化， 现国际上采用温敏型菌种进行谷氨 酸发酵生产产酸率高达18 ‑21g/dl， 糖酸 转化率65％以上。 微生物发酵法是制备谷氨酸最重要的方法， 温度敏感型谷氨酸棒杆菌是 一种L‑谷氨酸生产的新兴菌株， 其具有在高温下能够使菌体细胞膜结构发生变化， 从而增 加细胞膜的通透性， 使得L ‑谷氨酸得以分泌的特点， 因此温度敏感型谷氨酸棒杆菌即使在 高生物素条件下依旧能够进行L ‑谷氨酸发酵生产。 目前， 利用温度敏感型谷氨酸棒杆菌进 行L‑谷氨酸发酵的方法， 主要 是发酵前期将温度控制在28℃～33℃， 使菌体快速增长； 当发 酵液中菌体OD600达到20～24时， 将温度在30min内提高至37℃ ～40℃， 之后菌体进行适度的 剩余生长， 此时菌体开始在发酵液中大量积累L ‑谷氨酸。 然而按照现有的生产方法进行生 产时， 初期温度敏感型谷氨酸棒杆菌生长速度较为缓慢OD600到达20～24的时间较长， 后续 剩余生长较少， 菌体量小， 影响L ‑谷氨酸产量， 同时在发酵后期菌体活力会出现明显下降， 进一步影响菌体生产L ‑谷氨酸的性能。 不同种属的菌株生长习性和规律不相同， 也难以根 据参考其他菌株， 因此， 需要根据特定的菌株 类型来研究适 合菌株增殖的方法。 发明内容 [0004]本发明所要解决的技术问题在于提供一种提高谷氨酸发酵菌体量的方法， 旨在提 高菌体量的同时， 提高谷氨酸发酵效率。 [0005]本发明是通过如下技 术方案来实现的。 [0006]提高谷氨酸发酵菌体量和产酸效率的方法， 其包括如下步骤： [0007]谷氨酸棒杆菌种子液按照5 ‑15％的接种量接种到含有发酵培养基 的发酵罐中进 行发酵培养， 当菌体OD600达到15时， 开始流加全营养培养基， 流加至发酵培养结束前4h停 止。 [0008]优选地， [0009]所述发酵培养基为： 葡萄糖60g/L， 玉米浆30g/L， 酵母膏5g/L， 大豆蛋白胨10g/L， KH2PO42.5 g/L， MgSO4·7H2O1.2 g/L， KCl 1g/L， MnSO410 mg/L， FeSO410mg/L， 苏氨酸1g/L， 甜菜碱1g/L， VH3 mg/L， VB10.5 mg/L。 [0010]优选地，说　明　书 1/4 页 3 CN 115386529 A 3